Sevag法脱蛋白

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资源描述

Sevag法是去除游离蛋白的有效方法。在粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。可以按下述操作试一试:取粗多糖溶液4ml,氯仿—正丁醇(预先配制成体积比为4∶1混合液)溶液1ml,置于具塞试管中,充分振摇30min后,经离心机离心1min,然后将水相与氯仿相分开。将水相再加入相当于其体积1/4的氯仿—正丁醇溶液,重复上述过程,共计重复三次。多糖溶液体积较大时也可以采用分液漏斗,人工进行剧烈振荡后直接分离,注意振荡强度与分离效率关系很大。操作过程中蛋白质多出现在两相界面处。Sevag法较为温和,对多糖的结构影响不大,但效率较低,往往重复五次以上才能达到理想效果。考虑较为剧烈但效率更高的三氯乙酸法除蛋白。需要的取上清液重复加入sevage试剂我重复了十一次每次振摇15分在紫外测250-280没有吸收峰才可确定除净了蛋白糖蛋白不是那么容易除干净的,通常大量取多糖溶液(5%)按117223angel说的,用三角瓶在摇床上摇2h再放离心管里离心,得到水层再重复,如果蛋白含量多的话,除一两个星期的.直到震荡后水层上不再有白色泡茉为止.

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