第二十二章 局部用药的毒性研究

第二十二章局部用药的毒性研究局部用药的毒性试验是根据局部用药部位的解剖和生理特点设计的。涂剂、擦剂皮肤用药膏剂、凝胶剂其他透皮吸收制剂常用局部用药制剂滴眼剂、滴鼻剂喷雾剂直肠和阴道制剂肌内注射第一节皮肤用药的毒性研究皮肤组织结构表皮真皮皮下组织皮肤覆盖全身。表皮较薄，厚为0.1-0.2mm。角质层表皮颗粒层生发层真皮依附于皮下组织，厚约2mm。胶原真皮弹性硬蛋白纤维母细胞一、化学物质对皮肤毒性作用的类型（一）皮肤原发性刺激原发性刺激—药物直接作用于皮肤引起的病理性反应。红斑、水肿原发性刺激的表现水疱疮溃疡强碱脂溶性溶剂原发性刺激机理镉酸盐银、汞、砷等金属盐特征：有明确的毒理学量-效关系。首次接触即可产生某种特征。（二）皮肤致敏皮肤致敏为变态反应，包括：药物致敏和光敏反应。作用机制药物与蛋白以共价键结合，具用免疫原性。药物在光的作用下，形成半抗原性物质。特征没有明确的毒理学量-效关系。再次接触该药物才能激发特定症状。（三）皮肤致癌有机大分子化合物----多环芳烃类金属盐----无机砷盐二、皮肤用药（制剂）毒性研究1.皮肤用药急性毒性试验目的：观察完整与非完整皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。方法：实验材料1）动物-家兔、豚鼠、大鼠2）受试药物-膏剂、液体或粉末试验方法1）剂量选择-3个剂量组2）给受试物方法和观察-涂敷固定结果判断2.皮肤用药长期毒性试验目的观察动物皮肤长期接触受试物，对机体产生的异常毒性反应。方法：•实验材料1）动物-家兔、豚鼠或大鼠2）受试药物-膏剂、液体及粉末•试验方法1）剂量选择-3个剂量计对照组2）给受试物方法及时间-涂敷固定、每日一次至少6小时，按临床用药时间的3倍时间。检测项目每日观察皮肤临床症状、皮肤病力学检查；一般症状、血液学、血液生化指标及病理学检查。结果判断进行统计学计算，并应写明安全剂量、中毒剂量、中毒的靶器官以及中毒的可逆性。3.皮肤刺激性试验目的观察动物皮肤接触受试物后所产生的刺激反应情况。方法•实验材料1）动物-家兔、豚鼠2）受试药物-膏剂、液体或粉末•试验方法1g或1ml涂敷固定、于去除受试物后1、24、48和72小时观察涂敷部位红肿、红斑以及上述变化的恢复情况和时间。皮肤刺激反应评分反应分值反应分值红斑水肿无红斑0无水肿0略见红斑1稍有水肿1中度红斑2明显可见(边缘高出皮肤)2严重红斑3皮肤隆起水肿轮廓清晰3紫色红斑并有焦痂形成4水中隆起＞1mm4总分8结果判断与评价强度平均分值无刺激＜0.5(0-0.5)轻度刺激＜2.0(0.5-2.0)中度刺激＜4.0(0.5-4.0)严重刺激＜6.0(0.5-6.0)极严重刺激＞6.0(6.0-8.0)4.皮肤吸收试验（1）整体皮肤吸收试验化合物经皮渗透的量同皮肤微灌流量直接相关，通过测量与皮肤灌流量相关的电压，测算出化学经皮吸收速率。1）LDV法用643.8nm氦-氖激光，照射血管中流动中的红细胞，测量用药前后变化，测定出皮肤吸收速度。PPG法LED射出的800-940nm红外线照射，收集反射光转变成电压波谱，通过电压波谱变化，计算皮肤吸收量的大小。（2）离体皮肤吸收试验静态渗透装置上室防药剂，下室接受液，下室中间方皮肤并密封，药剂放于皮肤之上，每隔一定时间后，测定接受液，计算皮肤渗透率。流动渗透装置上述方法的改进，接受液为血浆或白蛋白，以5ml/小时的速度灌流，测定不同时间灌流液的药量。以次测定皮肤的透过率。5.皮肤光敏试验目的观察受试物接触皮肤后遇光照否有光敏反应试验方法1）光敏反应试验评价标准2）光毒性试验评价标准6.皮肤过敏试验目的通过动物皮肤重复接触受试物，观察机体免疫系统反映在皮肤上的表现。方法实验材料1）动物-豚鼠2）受试药物-膏剂、液体不稀释直接涂敷3）阳性致敏物：2,4-二硝基氯代苯1%-致敏浓度0.1%-激发浓度试验方法1）试验分组随机分成三组：给药组、赋形剂组、阳性对照组2）致敏接触0.1-0.2ml(g)涂于脱毛区，接触6小时，第7天和14天亦同样方法重复。3）激发接触末次给药后第14天，激发给药，6、24、48和72小时观察皮肤过敏情况。结果判断与评价皮肤过敏反应评分标准刺激反应程度分值刺激反应程度分值红斑形成水肿形成无红斑0无水肿0轻度红斑1轻度水肿1中度红斑2中度水肿2重度红斑3重度水肿3水肿性红斑4最高总分值7致敏率分类过敏反应强度致敏率%弱致敏性0-10轻度致敏性10-30中度致敏性30-60高度致敏性60-80极度致敏性80-100红斑形成总分+水肿形成总分反应平均值=合计动物总数第二节眼睛用药刺激性试验眼睛的结构角膜结膜炎炎症角膜表面水肿上皮脱落刺激作用结膜充血、水肿灼痛、流泪、畏光慢性结膜炎、睑腺炎、分泌物增多试验目的角膜浑浊刺激性试验试验方法虹膜结果与评价结膜水肿分泌物目的观察动物眼睛接触受试物所产生的刺激反应方法家兔，原液（原膏）加入眼睛肿0.1ml(0.1g)，闭合5-10分钟。6、24、48和72小时至7天眼刺激情况。结果与评价眼刺激反应评分眼刺激反应分值角膜浑浊0-4虹膜0-2结膜0-3水肿0-4分泌物0-3总分16眼刺激性评价标准刺激程度积分无刺激性0-3轻度刺激性4-8中度刺激性9-12重度刺激性13-16第三节肌内注射用药局部刺激性试验目的肌内注射后药物对肌肉的刺激性反应情况。方法家兔6只，一侧骨四头肌注射供试物，另一侧注射生理盐水1-2ml作为对照，48小时处死动物，取骨四头肌纵向剖开，肉眼观察，观察注射部位刺激情况，必要时作组织病理学检查。家兔股四头肌肌肉组织结果与评价肌内注射刺激反应评分标准反应级数刺激反应0给药部位无明显反应1给药部位轻度充血，直径0.5cm以下2给药部位中度充血，直径1.0cm以下3给药部位中度充血，红肿，肌肉有变性4出现肌肉褐色变性，坏死0.5cm以下5肌肉严重变性，出现大片坏死超过2认为不符合规定，不可进行肌内注射第四节静脉给药局部刺激性试验见第二十章：全身用药毒性试验中-血管刺激性试验第五节滴鼻剂和吸入剂的毒性试验一、滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验目的观察受试物一次滴入或吸入后对动物产生的毒性反应或死亡情况。方法3个剂量组，组距0.65-0.85,滴入或吸入；4小时后即可以及7-14天观察动物。结果评价二、滴鼻剂和吸入剂刺激性试验目的观察受试物一次滴入或吸入后对动物产生的刺激反应。方法将受试物滴入或喷雾与动物，24小时后处死动物，观察有无充血、红肿等。结果评价第六节应用于直肠、阴道制剂的毒性试验一、直肠、阴道用药急性毒性试验目的受试物对动物直肠或阴道产生的毒性反应或死亡情况。方法栓剂、膏剂或液体等，将受试物轻置入直肠或阴道内。至少接触4小时，观察即可以及7-14天的情况。结果评价二、直肠、阴道用药长期毒性试验目的方法结果评价三、直肠、阴道用药刺激性试验目的方法结果评价四、有关问题1、给药量与给药浓度2、给药途径3、多次给药问题4、对照组的建立小结第一节皮肤用药的毒性研究一、皮肤组织结果二、化学物质对皮肤毒性作用的类型1、皮肤原发性刺激2、皮肤致敏3、皮肤致癌三、皮肤用药毒性试验1、皮肤用药急性毒性试验2、皮肤用药长期毒性试验3、皮肤刺激性试验4、皮肤过敏试验5、皮肤吸收试验6、皮肤光敏试验第二节眼睛用药刺激性试验第三节肌内注射用药局部刺激性试验第四节静脉给药局部刺激性第五节滴鼻剂和吸入剂的毒性试验第六节应用于直肠、阴道制剂的毒性试验