第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析

药物分析主讲：胡承波Mobile:13594698076E-mail:[e-mail]重庆文理学院材料与化工学院化工制药系第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析本章主要内容第一节二氢吡啶类结构与性质第二节鉴别试验第三节有关物质的检查第四节含量的分析第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•学习要求•一、掌握二氢吡啶类药物的基本结构及主要的理化性质；结构、性质与分析方法间的关系；以及铈量法测定该类药物含量的原理、方法以及注意事项。•二、熟悉二氢吡啶类药物的化学鉴别反应及有关物质检查的方法。•三、了解二氢吡啶类药物其他的鉴别试验及含量测定的方法。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析二氢吡啶类钙通道阻滞药物：钙通道阻滞药，是指能选择性地阻滞Ca2+经细胞膜上电压依赖性钙通道进入胞内、减少胞内Ca2+浓度，从而影响细胞功能的药物，也称“钙拮抗药”（calciumchannelblocker）。二氢吡啶类（DHP）钙通道阻滞药物：为目前临床上特异性最高、作用最强的一类钙拮抗剂，广泛应用于缺血性心血管疾病，高血压、脑血管疾病等的治疗。硝苯地平为第一个上市的DHP药物。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•吡啶的结构：NHHHHH二氢吡啶类药物的母核结构：本类药物均含有苯基-1,4二氢吡啶的母核.HN123456CH3COOR3R2OOCR1R4R5•第一节二氢吡啶类药物的结构与性质•一、结构第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析二氢吡啶类药物的基本骨架：HNCH3R1R2OOCCOOR3R4R5123456为活性必需，变成吡啶环或六氢吡啶环活性消失为活性必需，若为乙酰基或氰基活性降低，若为硝基则激活钙通道邻、间位有吸电子基团活性较佳，对位取代活性下降取代基与活性关系次序：H＜甲基＜环烷基＜苯基或取代苯基影响作用部位，5,6位取代酯基不同，为手性中心。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析HNCH3COOCH3H3COOCH3CNO2HNCH3COOCH3H3CH2COOCH3CNO2硝苯地平（nifedipine)尼群地平（nitrendipine)第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析HNCH3COO(CH2)2OCH3(H3C)2HCOOCH3CNO2尼莫地平（nimodipine)HNCH3COOCH3(H3C)2HCH2COOCH3CNO2尼索地平（nisoldipine)第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析HNCH3COOCH3H3CH2COOCH3CClCl非洛地平（Felodipine)HNCH3COOCH2CH3H3CH2COOCH3CCOOC(CH3)3拉西地平（Lacidipine)第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析HNCH3COOCH2CH3H3CH2COOCH3CCOOC(CH3)3拉西地平（Lacidipine)HNCH3COOCH3(H3C)2HCOOCH3CNON伊拉地平（Isradipine)第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•二、主要理化性质•1.二氢吡啶环的还原性•二氢吡啶环，具有还原性，可用氧化还原反应鉴别和氧化还原滴定法进行含量测定。•2.硝基的氧化性•苯环上大多有硝基，具有氧化性，可被还原剂还原为芳伯氨基，可用重氮化-偶合反应鉴别。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析HN123456CH3COOR3R2OOCR1R4R53.二氢吡啶环氨基质子解离性二氢吡啶类药物与碱作用后，二氢吡啶环1,4-位氢可以发生解离，形成共轭环发生颜色变化，可以进行鉴别。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•4.稳定性•二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学反应，因•此要避光保存此类药物。•5.旋光性•本类药物的C4位多为手性碳原子，具有旋光性。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•6.吸收光谱特性•本类药物具有芳环，有明显的紫外吸收特征和红外特征。药物溶剂浓度（μg/ml）λmax/λmin(nm)吸光度比值硝苯地平无水乙醇15237,320-335宽吸收尼群地平无水乙醇20236,353/303A353/A302=2.1-2.3尼莫地平乙醇10237尼索地平无水乙醇10237非洛地平乙醇20238,361第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•第二节鉴别试验一、化学鉴别法•（一）与亚铁盐的反应•如尼莫地平（ChP2010）的鉴别：•取本品20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亚铁铵溶液2ml，1.5mol/L硫酸1滴与0.5mol/L氢氧化钾溶液1ml，强烈振摇，1分钟内沉淀由灰绿色变为红棕色。苯环硝基的氧化性，可将Fe(OH)2氧化成Fe(OH)3(红色沉淀）第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•（二）与NaOH试液反应丙酮溶液+NaOH如：硝苯地平，尼群地平，尼索地平（ChP2010）橙红色溶液药物被碱水解后，水解后的苯基-1,4二氢吡啶基团溶于丙酮呈现橙红色。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•（三）沉淀反应•本类药物含有1,4-二氢吡啶结构，可与重金属盐类形成•沉淀。尼莫地平+HgCl2白色沉淀尼群地平+KBiI4橙红色沉淀第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•（四）重氮化-偶合反应•如硝苯地平（BP2010）的鉴别：•取本品25mg,加10ml-水-乙醇混合溶液（1.5：3.5：5），温热，加入锌粒0.5g，放置5分钟，滤过，滤液加亚硝酸钠试液（10g/L）5ml,放置2分钟，再加入氨基磺酸胺溶液（5g/L）2ml,摇匀，加入盐酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml,即显红色。苯环硝基具有氧化性，在酸性条件下可被锌粉还原成芳伯胺基，可用重氮化-偶合反应进行鉴别。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析二、分光光度法（一）紫外分光光度法：本类药物具有芳香环，有强烈的紫外吸收。因此可用UV进行鉴别。如尼群地平软胶囊的鉴别：取本品的内容物约1g，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释置刻度，摇匀，取10ml,置100量瓶中，用无水乙醇稀释置刻度，在353nm与303nm的波长处分别测定吸光度，在353nm与303nm的吸光度比值应为2.1-2.3。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析（二）红外分光光度法如尼群地平片的红外鉴别试验第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•三、色谱法：•基于二氢吡啶类药物具有不同的分子结构，其色谱行为有所差别，可用于分离鉴别。•（一）、HPLC•尼群地平片的鉴别：供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•（二）、TLC•如硝苯地平的鉴别：•对对照品和供试品•固定相：硅胶F254薄层板上•流动相：乙酸乙酯-环己烷（40：60）检查：紫外光灯（254nm）下检查。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•第三节、有关物质的检查二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在避光条件下进行有关物质检查，大多采用HPLC法。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析HNCH3CH3CH3OOCCOOCH3NO2NCH3CH3CH3OOCCOOCH3NO2[O]或光NCH3CH3CH3OOCCOOCH3NO光硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成两种降解氧化产物：杂质I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯杂质II：2,6-二甲基-4-(2-亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析具体方法（P259-260）1.供试液Ⅰ和Ⅱ的制备2.有关杂质对照品液Ⅰ和Ⅱ的制备3.色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶;流动相：甲醇-水（3：2）；检测波长：235nm。结果：按外标法以峰面积计算，均不得超过0.1%，其他单个杂质的峰面积不得大于对照品溶液中硝苯地平峰面积，杂质总量不得过0.5%。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•第四节、含量测定•一、铈量法•二氢吡啶类药物具有还原性，可用铈量法测定该类药物的含量。•铈量法简介：也称为硫酸铈法，是以Ce(SO4)2为标准溶液的氧化还原滴定法。优点：①以Ce(SO4)2标准溶液稳定，长时间放置、曝光、加热不会引起浓度的变化。②Ce4+还原为Ce3+是单电子转移，不是生成中间价态，反应简单，副反应少。③大部分有机物不与Ce(SO4)2作用，不干扰测定。④特别适用于糖浆剂以及片剂等制剂药物的测定。终点指示：①Ce4+为黄色，Ce3+为无色，Ce4+可自身作为指示剂，但不够灵敏。②常用邻二氮菲作为指示剂，即稍过量的Ce4+将指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•邻二氮菲指示液：•邻二氮菲-Fe(II)指示剂：•配置方法：将1.485g一水合邻二氮菲和0.695gFeSO4·7H2O溶于100mL水中来配制。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•如硝苯地平的测定测定原理：可用下列反应式表示：NHNO2CO2CH3CH3CH3H3COO2Ce(SO4)26HClO4NNO2CO2CH3CH3CH3H3COO2Ce(ClO4)34H2SO4终点时（邻二氮菲-Fe(II)指示剂）:微过量的Ce4+将指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。如：尼莫地平，尼群地平，非洛地平，硝苯地平采用该法定量。（ChP2010）第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析•ChP2010硝苯地平的含量测定：•取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50℃左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于17.32mg的C17H18N2O6。0(V-V)×F×T含量%=×100%W含量计算公式：第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析二、紫外-可见分光光度法•ChP2010尼群地平软胶囊的含量测定：•避光操作，取本品10粒置小烧杯中，用剪刀剪破嚢壳，加无水乙醇少量，振摇使溶解后，将内容物与嚢壳全部转移至具塞锥形瓶中，用无水乙醇反复冲洗剪刀及小烧杯，洗液并入锥形瓶中，将锥形瓶密塞，置40℃水浴中加热15分钟，并时时振摇，将内容物移入100ml量瓶中，用无水乙醇反复冲洗嚢壳和锥形瓶，洗液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在353nm的波长处测定吸光度；另取尼群地平对照品适量，精密称定，用无水乙醇溶解并定量稀释制成1ml中约含20μg的溶液，同法测定，计算，即得。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析三、高效液相色谱法•ChP2010尼莫地平分散片的含量测定：•色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（35∶38∶27）为流动相；检测波长为235nm。理论板数按尼莫地平峰计算不低于8000，尼莫地平峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析测定法：避光操作。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于尼莫地平10mg)，置50ml量瓶中，加流动相适量，超声处理15分钟使尼莫地平溶解，放冷；用流动相稀释至刻度，摇匀，离心10分钟(每分钟3000转)，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取尼莫地平对照品，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含20ug的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。