第八章芳香胺类药物的分析

TianjinMedicalUniversity天津医科大学药学院《药物分析》第八章——芳香胺类药物的分析芳胺类药物的分析芳胺类药物分为两类芳伯氨基未被取代芳伯氨基被酰化一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物COOR2NR1HCOOC2H5H2N苯佐卡因H2NCOOCH2CH2NC2H52.HCl盐酸普鲁卡因COOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺1.芳伯氨基特性：重氮化－偶合反应；芳醛缩合成Schiff碱；易氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。（二）主要理化性质2.水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸丁卡因外水产物为对丁基苯甲酸外，上述均为对氨基苯甲酸。3.弱碱性：除苯佐卡因外，其余均含有叔胺氮的侧链，故具有弱碱性。4.其它特性：因结构中有芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链，其游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物NHCR2OR1R3R4HONHCOCH3对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3CONH醋氨苯砜NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因1.水解后显芳伯氨基特性：分子结构中含有芳酰氨基，酸水解后显芳伯氨基的特性反应。注意空间位阻的影响。2.水解产物易酯化：对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋酸乙酯香味。（二）主要化学性质3.酚羟基特性：对乙酰基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸水解有酚羟基，可与FeCl3发生显色反应，可相互区别。4.弱碱性：利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可相互区别。5.与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比卡因酰氨基上氮可与Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。三、鉴别试验（一）重氮化-偶合反应分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。Ar-NH2HClNaNO2重氮盐OH--萘酚橙黄~猩红色直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺、盐酸氯普鲁卡因间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N－亚硝基化合物的乳白色沉淀。NH2COOCH2CH2N(C2H5)2OHNHCOCH3[H2O]Ar-NH2NaNO2+HClAr-N2+Cl-OHOH-OHAr-N=N猩红或红色NHC4H9COOCH2CH2(C2H5)2+HNO2C4H9N-NOCOOCH2CH2(C2H5)2+H2O乳白色（二）与三氯化铁反应对乙酰氨基酚+FeCl3蓝紫色化合物NHCOCH3O-NHCOCH3OH3+FeCl33Fe+3HCl1.与铜和钴离子反应：利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物；与氯化钴生成亮绿色沉淀。（三）与金属离子反应CH3CH3NHCOCH2N(C2H5)22+Cu2+CH3CH3NCOCH2N(C2H5)2CH3CH3(C2H5)2NCH2CONCu蓝紫色+Co2+CH3CH3NCOCH2N(C2H5)2CH3CH3(C2H5)2NCH2CONCo亮绿色2.羟肟酸铁盐反应基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构。NH2CONHCH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)23FeH2O2FeCl3紫红，暗棕色，棕黑色3.与汞离子反应盐酸利多卡因+H2NO3+Hg(NO3)2黄色对氨基苯甲酸酯＋H2NO3+Hg(NO3)2红色或橙黄色1.盐酸普鲁卡因的鉴别(四)水解产物反应盐酸普鲁卡因+NaOH普鲁卡因油状物对氨基苯甲酸钠+二乙氨基乙醇（使湿润的红色石蕊试纸变兰色）对氨基苯甲酸钠+HCl对氨基苯甲酸（白色）NH2COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2NH2COONaNaOHNaOH+HOCH2CH2N(C2H5)2NH2COONaNH2COOHNH2COOHHClHClHCl.2.苯佐卡因的鉴别苯佐卡因+NaOH乙醇乙醇+I2+NaOHCHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）(五)制备衍生物测熔点1.三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3H3CNO2NO2O2NOH.熔点为228℃～232℃CH3NHCOCH3NC4H9NO2NO2O2NOH.熔点为194℃2.硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNHC4H9COOCH2CH2N(C2H5)2HSCN.NH4SCNNHC4H9熔点为131℃(六)紫外特征吸收光谱法Chp2010在规定的浓度测定λmax例如：盐酸布比卡因0.4mg/ml;λmax=263nm;271nmA=0.53~0.58；0.43~0.48再例如：盐酸普鲁卡因胺5μg/ml;λmax=280nm（七）红外吸收光谱法盐酸普鲁卡因的红外吸收图谱3315，3200cm-1NH21692cm-1C=O1645cm-1N-H1271，1170，1115cm-1C-O2585cm-1N+-H1604，1520cm-1C=C（七）红外吸收光谱法盐酸普鲁卡因胺的红外吸收图谱3100~3500cm-1NH21640cm-1C=O1600，1515cm-1C=C1280cm-1C-N2645cm-1N+-H1550cm-1N-H(一)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查为什么要检查？H2NH2NCOOH-CO2O==O[O]黄色怎样检查？采用HPLC法中的杂质对照品法进行检查。四、特殊杂质检查(二)盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和光解产物的检查4-氨基-2-氯苯甲酸原料药不得过0.625%注射剂不得过3.0%（一）亚硝酸钠滴定法Ar-NH2;Ar-NHCOR;Ar-NO2均可采用此法ChP2010中的苯佐卡因；盐酸普鲁卡因、注射用盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片注射液可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。五、含量测定NHCOR+H2ONH2+RCOOHH+△NO2+6[H]NH2+2H2O1.原理：Ar-NHCOR+H2OAr-NH2+RCOOHH+Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2+Cl-+NaCl+2H2O2.测定主要条件：(1)加KBr增加反应速度重氮化的反应历程为：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2OKHClNN+Cl-快NNOH快NNOH慢NO+Cl-NH2KBr+HClHBr+KClHNO2+HClNOBr+H2OKKBr∵KHBr比KHCl大300倍∴生成NOBr量大得多∴加快反应速度(2)加过量HCl加速反应：①重氮化速度加快；②重氮盐在酸性介质中稳定；③防止生成氨基偶氮化合物。Ar-N2+Cl-+H2N-ArAr-N=N-NH-Ar+HCl一般摩尔比为Ar-NH2:HCl=1:2.5~6。(3)室温条件下滴定:温度高反应速度快；每升高10℃加快2.5倍太高,可使Ar-N2+Cl-+H2OAr-OH+N2+HCl(4)滴定管尖端插入液面下滴定3.指示终点的方法(1)用停滴定法溶液检流计终点前：无过量无电流HNO2终点时：有过量有电流（使指针偏离零HNO2永停在某一位置）(2)外指示剂法用KI-淀粉指示剂指示终点的原理：2NaNO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2OGVVR1R2+V(二）非水溶液滴定法基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因侧链叔胺氮在滴定盐酸丁卡因时，因其在冰醋酸中碱性弱，加醋酐可增加其碱性。因醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强，可增加碱性。2(CH3CO)2O(CH3CO)3O++CH3COO-相当于［B]HCl+Hg(Ac)2[B]HAc+HgCl2[B]HAc+HClO4[B]HClO4+HAc（三）紫外分光光度法Chp2010采用紫外分光光度法测定注射用盐酸丁卡因的含量。含盐酸丁卡因为标示量的93.0%-107.0%中性条件下的重氮化反应（四）比色法盐酸普鲁卡因+1,2-蒽醌-4-磺酸钠pH4-9棕红色化合物，max482nm处测定A（五）盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定λex400nm（激发波长）、λem485nm（发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。盐酸普鲁卡因胺+荧胺pH7.5荧光物此法主要用于盐酸盐酸普鲁卡因注射液的测定。色谱条件：色谱柱为C18流动相为含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾（PH=3.0）-甲醇(68:32);UV检测器290nm.（六）HPLC法盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸(PABA)的检查：取本品，加乙醇制成2.5mg/mL溶液，作为供试液，另取PABA对照品，加乙醇制成60ug/mL的溶液，作为对照品液，取供试品液10ul，对照品液5ul，分别点于同一薄层板上，展开，显色，供试品所显杂质斑点颜色，不得比对照液所显斑点深。求PABA的限量是多少？1亚硝酸钠滴定法测定芳胺类药物的原理是什么？在测定中应注意哪些反应条件？1加入适量KBr加快反应速度2加过量HCl加速反应3反应温度：滴定一般在低温下进行4滴定速度：重氮化反应速度相对较慢，故滴定速度不宜太快。2请设计盐酸普鲁卡因注射液的鉴别、特殊杂质对氨基苯甲酸的检查方法以及其含量测定方法（鉴别只需写出主要的鉴别依据和方法；特殊杂质检查需写出实验手段和可能的实验结果和实验现象；含量测定需写明测定方法的基本原理，所需的主要实验试剂和主要实验步骤）。