第十八章一般药理学评价

第十三章化学致癌作用化学致癌的历史癌症是以具有失控细胞生长为共同特征的一类疾病。化学致癌问题时是当今关注的热点近年来肿瘤发病率不断提高，发病年龄向低龄化发展。查明了遗传因素与病毒的化学因素与肿瘤有关，但并非是肿瘤发病率增高的主要原因。发现环境化学污染和某些物理有害因素与肿瘤发病密切相关。WHO指出，人类癌症90%与环境因素有关，其中主要为化学因素FDA列出2400种可能对动物致癌的物质。已知化学药物在动物身上能诱发肿瘤的数目为150种以上。对于人类，有20-30种化学物质与肿瘤有关。（环磷酰胺、氯霉素等）不同环境因素引起的肿瘤死亡分布一、化学致癌作用一）基本概念1、致癌作用是导致癌症的一系列内在或外部的多步骤过程，具体包括任何良性或恶性肿瘤的起源或发生。2、致癌剂能引起人类或动物体内产生肿瘤的化学物质。3、直接致癌物或初发致癌原指未经代谢或生物转化就足以激发致癌效应的母体化合物。4、前致癌剂（物）需经代谢或生物转化成为另一种化合物，才能诱发致癌作用的化学物质。5、辅致癌物（肿瘤促进剂）本身无致癌作用，只有与致癌剂同时存在时，能增加后者致癌活性的化学物质。二）致癌过程1、癌症细胞遗传型改变（癌症的体细胞突变理论）2、肿瘤促进剂（非遗传毒致癌剂）二、化学致癌活性试验一）慢性动物实验1、模型设计1）动物两个种类的啮齿动物，种属及性别差异要小。2）对照组建立对照组。3）动物数量动物数量要足够体现阳性反应。4）观察期给药应贯穿动物整个生命周期。5）至少三个剂量组a、最大耐受量组b、50%最大耐受量组c、25%最大耐受量组6）给药途径7）试验结束时或每6个月作全面病理学检查。8）结果分析与评价2、动物长期致癌试验举例1）动物幼年小鼠或大鼠，雌雄各半，每组100只。2）剂量与分组给药组至少三个剂量组、溶剂组、空白组。3）实验期限大鼠两年、小鼠一年半4）给药方式与期限原则上应与临床拟用途径一致。5）观察与检查注意观察记录6）结果分析与评价二）短期癌症生物分析1、Tg.AC小鼠模型Tg.AC小鼠遗传行为类似于处于始动作用阶段的小鼠，再用致癌剂局部处理后起反应，表皮乳头状瘤迅速生长。在增生的细胞中过量表达突变型转基因，在正常细胞中却不表达。用初始作用剂或肿瘤促进剂处理，也同样引起皮肤肿瘤生长。未处理的小鼠具有正常皮肤组织，在试验期间几乎不出现自发肿瘤。用典型始动作用促进剂实验，用致癌剂处理的小鼠在6个月内皮肤出现恶性肿瘤。2、P53小鼠模型由于只有一个单个功能等位基因，P53小鼠正常生长，但对肿瘤诱发敏感性增加。这种情况类似于遗传性肿瘤抑制基因缺陷的个体。给予突变致癌剂时，P53+/-小鼠与正常小鼠相比通常在6个月内迅速生长肿瘤，而未处理的P53+/-小鼠在试验期间通常不发生肿瘤。3、哺乳动物培养细胞恶性转化试验1）细胞叙利亚地鼠（SHE）胚胎细胞。2）剂量至少应用3种不同浓度。3）药物的作用时间药品一般和细胞接触24小时，更换培养液后在培养7-14天。4）外源性代谢活化系统。5）对照组空白、溶剂、阴性和阳性对照组。6）观察报告细胞固定，染色，计数，转化集落数。7）判定（1）有明确的剂量效应关系（2）无明确的剂量效应关系，有2个或2个以上浓度发生细胞转化。（3）单一剂量下出现3个获3个以上转化集落。4、动物短期致癌试验—小鼠非肿瘤诱发短期试验1）动物A系小鼠。2）剂量及分组高、中、低三个剂量组，另设阴性对照组。3）给药途径一般腹腔注射。4）观察时间30-35周。5）结果评价符合下列情况可判为阳性（1）给药组动物肺肿瘤生成均数显著增加（2）有剂量效应关系（3）阴性对照组动物肺肿瘤生成均数与文献报道的同龄未染毒小鼠肺肿瘤发生率大体相符。化学致癌性是毒理学领域最复杂的研究内容1）化学致癌性至少涉及两个明显阶段（1）始动作用（2）促进作用2）化学物质可以通过不同机制在各个阶段增加致癌可能性。3）可能仅仅产生或影响致癌过程单个环节或但各方面。4）很多因素影响致癌性试验的结果。5）生命周期相关因素影响癌症形成过程。化学致癌性的研究需要众多学科交叉1、毒理学2、医药学3、流行病学4、公共卫生学5、其他支撑学科化学致癌作用的主要内容一、化学致癌的历史二、化学致癌作用一）概念1、致癌作用2、致癌剂3、初发致癌原4、前致癌剂5、辅致癌剂二）癌症体细胞突变理论三、化学致癌活性试验一）慢性动物实验二）短期癌症生物分析1、Tg.AC小鼠模型2、P53小鼠模型3、哺乳动物培养细胞恶性转化试验4、动物短期致癌试验第十八章一般药理学评价一、概述一般药理学（安全药理学）定义一般药理学主要是研究药物在治疗范围内剂量时，潜在的不期望出现的对重要生理功能的不良影响的研究。主要观察药物对中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统的影响。二、研究目的1、确定药物可能关系到人的安全性的非期望药理作用2、评价药物在毒理学和/或临床研究中所观察到的药物不良反应和/或病理生理作用3、研究所观察到的和/或推测的药物不良反应机制三、我国现行的对一般药理学研究的要求1、精神神经系统定性定量评价给药后动物的运动功能、行为改变、协调功能、感觉/运动反射和体温等变化。2、心血管系统测量给药前后血压、心电图和心率的变化。3、呼吸系统测量给药前后动物呼吸频率和呼吸深度的变化。四、日本对一种药物一般药理学试验的要求1、对一般症状与活动的影响2、对中枢神经的影响1）对自发运动的影响（1）转轴试验（氯丙嗪作阳性对照）（2）开阔场地试验（氯丙嗪作阳性对照）（3）大鼠自发活动（氯丙嗪作阳性对照）2）增强戊巴比妥睡眠作用3）抗惊厥作用（1）戊四氮惊厥（地西泮作阳性对照）（2）印防己毒素惊厥（苯巴比妥那作阳性对照）（3）最大电击惊厥（苯巴比妥那作阳性对照）4）惊厥诱发试验（1）戊四氮惊厥（咖啡因作阳性对照）（2）电击惊厥（戊四氮作阳性对照）5）镇痛作用（1）醋酸扭体法（阿司匹林作阳性对照）（2）夹尾法（吗啡作阳性对照）（3）甩尾法（吗啡作阳性对照）6）对体温的影响（1）对小鼠直肠体温的影响（2）对大鼠直肠体温的影响（安替比林阳性对照）7）抗利血平低温的影响（丙咪嗪作阳性对照）8）对自发脑电图的影响（1）家兔（2）猫（3）大鼠被动回避9）对脊髓反射的影响10）对协调运动的影响（地西泮作阳性对照）11）对条件反射的影响（氯丙嗪作阳性对照）12）木僵状态诱导作用13）对甲基苯丙胺毒性的影响（氯丙嗪作阳性对照）14）对去甲肾上腺素致死的保护作用（氯丙嗪作阳性对照）15）对毒扁豆碱致死的保护作用（丙咪嗪作阳性对照）3、对外周神经的影响1）对神经肌接点的影响2）肌肉松弛作用（1）斜板法（地西泮作阳性对照）（2）牵引试验3）局部麻醉作用：角膜反射法4、对自主神经及平滑肌的影响1）对离体豚鼠肠的影响2）对离体大鼠子宫的影响（1）非妊娠子宫自发运动（2）妊娠子宫自发运动5、对呼吸、循环系统的影响1）对麻醉犬呼吸运动、血压、血流量、心率和心电图的影响2）对麻醉犬血流动力学的影响3）对离体豚鼠心脏的影响（异丙肾上腺素作阳性对照）6、对消化系统的影响1）对小鼠肠道推进性蠕动的影响2）对家兔胃肠运动的影响3）对大鼠胃粘膜的影响7、对水和电解质代谢的影响对大鼠尿量、电解质排泄的影响8、对血液系统功能的影响1）对大鼠全血凝固时间的影响2）对家兔血小板凝固时间的影响3）对大鼠空腹血糖的影响4）对大鼠角叉菜胶肿胀的影响药物的一般药理学试验项目的选择是根据药物本身的作用部位、作用机制及用途有关。在设计一个新药的一般药理学实验时，应根据药物的实际情况取舍。最基本的应该按药物的一般药理学指导原则所规定的内容，并能反映药物的作用靶位及其所涉及作用机制。小结一、概述二、目的三、我国现行的对一般药理学研究的要求四、日本对一种药物进行一般药理学试验举例一般活动中枢神经系统、外周神经系统7大项自主神经及平滑肌呼吸系统、水和电解质代谢血液系统功能45小项