第四章药物定量分析与分析方法验证

第四章药物定量分析与分析方法验证第一节定量分析样品的前处理方法一、概述有机金属药物：金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固，如醋酸苯汞、汞撒利含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物。例：酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠处理方法主要分为两大类:不经有机破坏的处理经有机破坏的处理二、不经有机破坏的分析方法(一)直接测定法金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物某些C—M键结合不牢固的有机金属药物例：富马酸亚铁的含量测定。(二)经水解后测定法1、碱水解后测定法适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物，如卤素和脂肪碳链相连。加NaOH，加热回流含有机结合的卤素间接银量法测定有机药物方法原理：药物水解无机的卤素离子例：三氯叔丁醇的含量测定2、水解后测定法例：硬脂酸镁的含量测定Mg(C17H35COO)2+H2SO4△定量、过量2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2OMgSO4+2C17H35COOH过量剩余(三)经氧化还原后测定法例：泛影酸、胆影酸等的含量测定1、酸性或碱性还原后测定卤素结合在芳环上例：含锑药物具有氧化性2、利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量利用药物中可游离出的金属离子的氧化性，在酸性溶液中氧化碘化钾，析出碘，再用硫代硫酸钠滴定析出的碘，以测定含量。三、经有机破坏的分析方法适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物，使有机结合状态的金属及卤素转变为可测定的无机化合物，再选用适当的方法测定。（一）湿法破坏（1）硝酸-高氯酸法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态。本法不能用于含氮杂环药物的破坏干法灼烧法（2）硝酸-硫酸法适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态。不能用于含碱土金属有机药物的破坏（3）硫酸-硫酸盐法加入浓硫酸作为氧化剂加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。用于含砷或锑有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态注意点：④破坏操作要放在通风橱中进行①试剂不含有被测金属离子或干扰测定的组分②做空白试验③破坏在凯氏燃烧瓶（硅或硼玻璃）中进行(二)干法破坏1、高温炽灼法目的：将有机物灼烧灰化以达分解的目的适用范围：湿法不易破坏完全的有机药物，以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物限制：对于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物不适用注意事项：（1）加热或灼烧时，应控制温度在420℃以下（2）一定要灰化完全（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去2、氧瓶燃烧法：氧瓶燃烧法：将有机药物放在充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，有机结构部分分解为CO2和H2O，用适当的吸收液吸收燃烧所产生待测物质（已转化为不同价态的氧化物）,然后根据待测物质的性质,然后采用相应的方法进行鉴别、检查或测定.NaClHClOCl-RNaOH2溶液点燃特点：适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析（1）仪器装置①燃烧瓶一般为不同体积的磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞严密、空心、底部熔封一根直径为lmm铂丝，铂丝下端是网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的2/3②样品制备：称样用材料及称样方法无灰滤纸：用于固体样品纸袋：适用于液体样品③吸收液A.作用：将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为便于测定的价态B.吸收液的选择待测元素燃烧产物吸收液氟氟化氢水氯氯化氢水－NaOH溶液溴单质溴、溴化氢水－NaOH－SO2饱和溶液碘单质碘、少量I5+、I3+、I-1硝酸银法：I-1，水－NaOH－SO2饱和溶液间接碘量法：水－NaOH溶液硫三氧化硫浓H2O2－水液硒SeO2(少量SeO3)硝酸溶液④、操作方法A、固定已称好样品的无灰滤纸或纸袋B、燃烧瓶中加入规定量及种类的吸收液C、用水把瓶口湿润，小心急速通入氧气，立即用表面皿盖好D、点燃滤纸或纸袋尾部，迅速放入装有吸收液的燃烧瓶中，拧紧瓶盖，用少量水封口E、待燃烧完全、无黑色碎片后，充分混合，使生成的烟雾被完全吸收后，放置15分钟，再用少量水冲洗瓶塞和铂丝，合并洗液和吸收液。用同样的方法作空白试验（2）注意事项①按规定方法操作根据供试品的取用量选择不同的燃烧瓶待分解样品量燃烧瓶的体积3〜5mg（微量分析）150〜250ml20〜30mg（半微量分析）300〜500ml50〜60mg1000ml0.6〜0.7g或更多2000ml或特殊结构的燃烧瓶正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中防止爆炸的可能性②燃烧瓶要洁净，不能残留有机溶剂，不能用有机润滑剂涂抹瓶塞③要有防爆措施④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色炭化物⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收充分振摇和放置都是为了保证吸收完全例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟雾颜色完全消失后，即表示吸收完全⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶4、应用含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂质的检查及含量测定例碘苯酯的含量测定ChP（2005）原理碘苯酯为有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液（氢氧化钠），生成碘化物与碘酸盐，加入溴-醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点碘苯酯（有机碘化物）氧瓶燃烧碘化物氧化碘化物与碘酸盐游离碘紫色烟雾氢氧化钠吸收液加溴-醋酸液碘酸盐过量，以甲酸及通空气除去碘化钾游离碘硫代硫酸钠淀粉终点蓝色消失溶液中要标定例：氧瓶燃烧法中的装置有：A.磨口硬质玻璃锥形瓶B.磨口软质玻璃锥形瓶C.铂丝D.铁丝E.铝丝例：选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A.磨口硬质玻璃锥形瓶B.铂丝C.普通滤纸D.氢气E.无灰滤纸第二节定量分析方法的特点一、容量分析法（一）特点原理：aA+xX→cC+dD标准溶液被测物质容量分析的化学反应必须满足的条件：（1）反应要有一定的化学计量关系，并且要能定量地完成（2）反应速度要快，即反应在瞬间完成（3）必须要有合适的确定滴定终点的方法滴定分析法:酸碱滴定法;沉淀滴定法配位滴定法;氧化还原法；非水溶液滴定法等（二）计算1、滴定度的定义滴定度：指每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的量，以T表示，中国药典以mg表示例：每1ml的盐酸滴定液（0.5mol/l）相当于72.06mg苯甲酸钠2、滴定度（T）的计算aA+bB→cC+dDMbammlmgT)/(待测物滴定液式中：m—滴定液的摩尔浓度，mol/lM---待测物的毫摩尔质量（分子量）a、b—分别为被测物、滴定液的摩尔数定义3、含量计算（1）直接滴定法%100WVT药物的百分含量％＝规定滴定液浓度得滴定液浓度）实际滴定液浓度（标定F%100%100WFTVWTV含量％＝实际滴定度（或校正滴定度）T’的计算T’=T*F其中每1ml标准溶液相当于被测物质的量%100%100标示量平均片重标示量平均片重片剂：标示量％＝WFTVWTVmlVVFTVVTVOO量取注射剂的体积，标示量标示量注射剂：标示量％＝:%100%1000(2)间接滴定法1）生成物滴定法计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量计算同直接滴定法DCBBA化合物＋滴定液化合物化合物供试品＋试剂2）回滴定法（剩余滴定法）原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定液A，使它和样品反应，等反应结束后，再用另一种滴定液B来回滴剩余的滴定液A。①不做空白的含量计算%100)(WTFVFVBBAA含量％＝特点：A、B两种滴定液均需标定②做空白的含量计算方法%100)(WFTVVBASBOB含量％＝特点：仅需标定滴定液B的浓度例1：酸碱滴定法测定烟酸片含量。取本品（规格：0.1g/片）10片，精密称定为1.5840g，研细，精密称取片粉0.3329g,（约相当于烟酸0.2g），加新沸过的冷蒸馏水50mL，置水浴上加热，并时时振摇，使烟酸溶解后，冷却至室温，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1005mol/L)滴定，消耗16.90mL。1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于12.31mgC6H5NO2。问：本品是否符合《中国药典》规定的含量限度（《中国药典》规定，本品含C6H5NO2应为标示量的95.0%~105.0%)二、光谱分析法—紫外—可见分光光度法1、比耳—朗伯定律（Beer—Lambert定律）A=E*C*LBeer定律说明吸收和浓度的关系Lambert定律说明吸收和厚度的关系吸收系数：①ε：一定波长下，溶液浓度为1mol/l，液层厚度为1cm时，物质的吸收度--定性依据≥104，物质有强吸收102～104，物质具有中等强度吸收≤100，物质有弱吸收②：一定波长下，溶液浓度为1%（W/V），液层厚度为1cm时，物质的吸收度--定量依据两者间的关系：或%11cmE%1110cmEMMEcm10%112、对溶剂的要求溶剂的截止波长：使用范围不能小于截止使用波长溶剂的纯度：检查所用溶剂在检测波长处是否符合要求3、含量测定测定要求:空白对照：配制供试品溶液的同批溶剂吸收池：1cm石英吸收池吸收波长：该品种项下规定波长±2nm之内吸收值:0.3～0.7(0.2～0.8)（1）对照品比较法供试品的浓度为：rrXXCAAC%100%100%WADCAWDCrrxX＝含量原料药：%100%标示量平均片重＝片剂：标示量WADCArrx%100%标示量＝液体制剂：标示量VAVDCArrx（2）吸收系数法按规定方法配制供试品，在规定的波长及吸收厚度下，测定吸收度，计算再按在相同条件下，标准对照品测到的计算含量：%100%%11%11rcmxcmEE含量xcmE%11rcmE%11注意：此法对仪器要求高，必须注意校正和检定吸收系数100（3）计算分光光度法一般不宜用作含量测定（当测定波长处于吸收曲线陡升或陡降部位时，对测定影响大）（4）比色法供试品本身无吸收或有吸收但干扰大，可加入适当的显色剂后测定。此法影响因素较多，实验平行操作例：对照品比较法测定卡马西平含量。精密称取本品0.0503g,置100mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取2mL，置100mL量瓶中，加乙醇稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取卡马西平对照品适量，用乙醇制成1mL中含10.3μg的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液，用1cm吸收池在285nm波长处测定，测得供试品溶液吸光度为0.435，对照品溶液A值为0.440。问本品是否符合《中国药典》规定的含量限度（《中国药典》规定，本品按干燥品计算，含C15H12N2O应为标示量的97.0%~103.0%)三、色谱分析法（一）高效液相色谱法1、对仪器的一般要求固定相种类流动相组成：注意：使用C18时，流动相中含有的有机溶剂比例应不低于5％检测器药典中规定的固定相种类、流动相组成及检测器类型不能随意改变2、系统适用性试验试验指标：理论塔板数、分离度、重复性、拖尾因子（1）色谱柱的理论塔板数(n)（2）分离度(R)注意：峰宽的概念（3）重复性：5次连续进样，RSD应不大于2.0％（4）拖尾因子（T）用峰高法定量：0.95~1.05用峰面积法定量：105.02dWTh3、测定法（大多数采用峰面积法）（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量①按各品种项下的规定，精密称取（或量取）药物对照品和内标物质，分别配成溶液，②精密量取①中在所配溶液，配制成测定校正因子用的药品对照品（含内标）③进样，记录谱图，得峰高（H）或峰面积（A）RRSSCACAf校正因子R－－表示药物对照品S－－表示内标物④配制含有内标的供试