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课题结题报告结题报告肾早期损伤定位标志物研究重庆三峡中心医院杜红心立项依据研究内容研究结果项目完成情况预实验结果经费来源一、立项依据研究背景•妊娠期糖代谢异常：包括妊娠期糖耐量受损（GIGT）和妊娠期糖尿病（GDM）。•GIGT：一组已有糖代谢异常并可能向糖尿病发展的病理生理过程的中间阶段。•GDM：妊娠期首次发生或发现的不同程度的糖代谢异常。近年的研究表明,GDM与GIGT的总体发病率逐年升高,达7.61%。追踪研究显示30%-50%的GDM患者可在远期发生糖尿病，且有糖尿病家族史者，GDM患病机率增加，提示其有一定的免疫遗传学背景。研究背景妊娠期糖代谢异常对妊娠的影响最常见的是导致巨大儿、胎儿窘迫和新生儿低血糖的发生；以及并发血管病变，增加妊娠期高血压和手术产的发生率。国内外的数据表明：未治疗的GDM孕妇并发症明显增加，且围生儿患病率主要与治疗早晚有关，证明早期筛查、诊断、干预可以降低孕产妇的并发症及围生儿患病率。研究背景妊娠期糖代谢异常的发生与遗传、环境及生活习惯密切相关,近年来国内外的研究表明,某些基因的多态性对妊娠期糖代谢异常的发生可能具有重要作用。如：葡萄糖转运蛋白基因、葡萄糖激酶基因、磺脲类药物受体基因、胰岛素受体底物基因、人类主要组织相容性基因复合体以及钙蛋白酶-10基因、尾加压素Ⅱ基因、肿瘤坏死因子-α基因等均与妊娠期糖代谢异常发病有一定关联。立项依据但是目前已有的研究成果还存在争议,引起疾病的责任基因及其作用机理尚未明确。因此对致病基因的研究已日益成为临床诊疗的迫切需要。探究及筛选与妊娠期糖代谢异常相关的基因多态性,将会对妊娠合并糖尿病、GDM及GIGT的预防、治疗、改善预后及提高广大妊娠妇女围产期的生命质量起到十分积极而重要的作用。同时,对节约医疗资源、提高出生人口质量也将有十分重要的意义。立项依据二、研究内容对葡萄糖转运蛋白基因、磺脲类药物受体基因、人类主要组织相容性复合体基因、钙蛋白酶-10基因、尾加压素Ⅱ基因等五个可能的糖代谢异常相关基因及其相关位点的多态性进行研究，以明晰它们与妊娠期糖代谢异常的发生发展的关系。观察可能与GIGT、GDM及T2DM的发生有关的危险因素。研究内容关键技术或方法1采用酚-氯仿法提取基因组DNA23PCR技术扩增目的基因片段PCR-RFLP方法检测基因型4logistic回归进行数据分析研究对象NGT组GIGT组GDM组T2DM组100例,贵阳医学院附属医院内分泌科100例,贵阳市妇幼保健院门诊健康体检者各100例,贵阳市妇幼保健院门诊患者实验方法1.GDM及GIGT的诊断方法（NDDG标准）◆1、50g葡萄糖负荷试验筛查,＞7.8mmol/L为阳性者做糖耐量试验(OGTT)。◆2、OGTT试验：抽血前禁食8～12h,75g葡萄糖溶300ml水中3～5min服完,查空腹及服糖后1、2、3h血糖。两次≥5.8、10.6、9.2、8.1mmol/L者诊断为GDM；两次空腹血糖≥5.8或糖筛≥10.6mmol/L,空腹血≥5.8mmol/L即诊断为GDM。◆OGTT4项中任何一项异常或第2小时≥6.7mmol/L诊断为GIGT。诊断标准2.T2DM的诊断标准（1999年WHO标准）◆糖尿病症状+任意时间血浆葡萄糖水平≥11.1mmol/L或◆空腹血浆葡萄糖(FPG)水平≥7.0mmol/L或◆OGTT试验中，2h-PG水平≥11.1mmol/L诊断标准全血DNA的提取PCR-RFLP、PCR-AFLP凝胶电泳分离收集标本PCR扩增目的片段基因型的判定数据处理实验步骤计数资料：基因频率及基因型频率：计量资料：危险因素采用logistic回归分析百分数描述（X±S）描述，采用t检验Hardy-Weinberg平衡检验；卡方检验，P＜0.05统计学处理数据分析及处理：三、研究结果实验数据及图表：12型:404,372bp11型:372bp22型:404bpCAPN-1019位点多态性分析：CAPN-1043位点多态性分析：GG型:144bpAA型:121,23bpGA型:144,121,23bpCAPN-1063位点多态性分析：CT型:192,162,30bpTT型:192bpCC型:162,30bp相关危险因素分析：单因素logistic回归分析结果相关危险因素分析：多因素logistic回归分析结果（GIGT组、GDM组与NGT组）相关危险因素分析：多因素logistic回归分析结果（T2DM组与NGT组）项目完成情况：主要考核指标完成情况：①对7个可能相关的基因及其相关位点的多态性与妊娠期糖代谢异常的关系进行研究，明晰了它们与妊娠期糖代谢异常相关疾病的发生和发展之间的关系；②根据实验室数据及统计结果，我们可以得出以下结论：可能与妊娠期糖代谢异常发病相关目的基因及其位点7个，它们具体是：技术指标方面:•CAPN-10基因多态性可能与GDM、T2DM遗传易感性有关；•CAPN-10基因SNP43位点G等位基因可能与GDM的发生有关，而16和63位点则与GDM的发生无关。•CAPN-10基因SNP43位点G等位基因可能与T2DM的发生有关，而16和63位点则与T2DM的发生无关。•CAPN-10基因SNP43位点多态性、糖尿病家族史、BMI和年龄是GDM、T2DM发生的重要危险因素。技术指标方面：•尾加压素Ⅱ基因rs228648位点单核苷酸多态性可能在决定受研究人群的妊娠期糖尿病遗传易感性中起重要作用。G等位基因可能与GDM发生有关,而rs228648位点的A型纯合子可能是GDM的一个重要的保护因素。•尾加压素Ⅱ基因rs228648位点单核苷酸多态性可能在决定妊娠期糖尿病遗传易感性中起重要作用。G等位基因可能与妊娠期糖代谢异常发生有关，rs228648的基因型频率与糖尿病家族史有关联。技术指标方面：•GLUT1基因基因型频率和等位基因频率在GDM、GIGT和T2DM中分布差异均无统计学意义。提示GLUT1基因可能与GDM、GIGT遗传易感性无关。•TNF-α基因的-308G/A、TNF-β基因的+252A/G单核苷酸多态性研究显示：GDM患者存在TNF-α启动子-308G-A等位基因的突变，可能是通过上调血浆TNF-α水平，增加胰岛素抵抗，最终导致GDM发生。同时TNF-β基因多态性与GDM没有显著相关性。技术指标方面：•脂联素基因+45位点GG基因型与GDM的遗传易感性显著相关，与GIGT的遗传易感性无关。•TCF7L2基因rs7903146位点CT基因型与GDM遗传易感性显著相关，与GIGT的遗传易感性无显著相关性。•同时，基因-基因的交互作用研究显示：脂联素基因+45位点、TNF-α基因-308位点基因型之间有交互作用。其他基因及位点间未显示明显的交互作用。技术指标方面：③撰写研究论文6篇，2篇已发表于国家级核心期刊；其余均已出投到相关学术刊物待发表；④培养硕士研究生2名：周龙、阚林。2011年6月，二名研究生均以优异成绩从贵阳医学院毕业，并且获得硕士学位。技术指标方面：社会、环境效益方面：•社会效益：寻找妊娠期糖代谢异常致病过程中起关键作用的基因，具有至关重要的意义，是近年来妇产科、优生及内分泌领域的研究热点。探索及筛选与妊娠期糖代谢异常相关的基因多态性,对妊娠合并糖尿病、GDM及GIGT的预防、治疗、改善、预后及提高广大妊娠妇女围产期的生命质量具有积极的作用。•环境效益：本研究课题采用成本最低廉的酚-氯仿法从外周血有核细胞中提取基因组DNA；然后用针对目的基因片段设计的引物在适当条件下进行扩增；再结合扩增片段长度鉴定技术和扩增DNA的限制性片段长度多态性技术，有效地分析扩增后DNA碱基序列的改变。课题的设计方法在降低实验成本的同时，可确保实验结果的准确性和可重复性。四、研究结果数据分析及处理：数据分析及处理：