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气相色谱质谱联用法用于甲磺酸左氧氟沙星片中甲磺酸乙酯的含量测定[]ObjectiveToestablishaderivativegaschromatography-massspectrometry（GC-MS）methodforanalyzingthecontentsofethylmethanesulfonate（EMS）inLevofloxacinMesylateTablets.MethodsPre-columnNaI-H2Oderivatingmethodwasused，andthederivativesethyliodideandiodinebutanewereobtainedfromEMSandn-butylmethanesulfonate（BMS）derivatization.ThederivativeswereseparatedonaDB-WAX（0.32mm×60m，0.25μm）fused-silicacapillarycolumnfirstly，andthendetectedbymassspectrometryundersingleionmonitoring（SIM）mode.ThecontentofEMSwascalculatedbythearearatioofethyliodidetoiodinebutane.ResultsThemethodshowedgoodlinearity（r0.9999）overtherangeof2.5-150ng/mL.Thelimitofdetectionwas0.5ng/mL，therecoverywas100.5%（RSD=1.2%）andtherepeatabilityRSDwas0.6%（n=6）.Themethodalsoshowedgoodrobustness.NoethylmethanesulfonatewasdetectedinonebatchofAPIandthreebatchesoftablets.ConclusionThemethodissensitive，simple，accurateandrapid，anditcanbeusedforthedeterminationofgenotoxicimpurityEMS，whichmaybegeneratedinthesynthesisandpreparationofLevofloxacinMesylate.甲磺酸左氧氟沙星是左氧氟沙星甲磺酸盐的一水合物，抗菌活性是氧氟沙星的2倍，毒性低[1]。左氧氟沙星最早由日本第一制药研制开发，1996年，北京双鹤药业研制开发了甲磺酸左氧氟沙星，并于1998年在国内上市，商品名为利复星[2-3]。甲磺酸左氧氟沙星在合成和制剂过程中用到甲磺酸和乙醇，可能导致甲磺酸乙酯（EMS）的生成[4]。而甲磺酸酯类作为遗传毒性杂质[5]，研究表明可能会诱发基因突变和染色体畸变，并且对大鼠和小鼠有致癌作用[6-7]。欧洲药品局（EMEA）和美国FDA相继出台了基因毒性杂质限度的指导原则，对基因毒性杂质做出限度规定[8-10]。目前，已报道的EMS测定方法有气相色谱法（GC）[11-13]、液质联用法（LC-MS）[14-16]和气质联用法（GC-MS）[17-19]。由于GC法本身的缺陷，使得该法的灵敏度较低，而LC-MS法操作较为繁琐。本文参考欧洲药典8.0版《甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯在原料药中的测定》[20]，建立简便、快速的衍生化GC-MS法，测定甲磺酸左氧氟沙星原料和片剂中可能存在的EMS。1仪器与试药ThermoScientific气质联用仪，Thermo公司产品，配有TraceGCULTRA气相色谱系统，包括TriPlusAS顶空进样器、柱温箱、TSQQuantum三重四极杆质谱及Xcalibur数据处理软件。甲磺酸乙酯对照品（EMS，批号：10315，纯度99.5%，Dr.EhrenstorferGmbh公司）；甲磺酸正丁酯对照品（批号：0143739-130930000，纯度95%，FluorochemXX公司）；甲磺酸左氧氟沙星原料（批号：AA130337，北京双鹤药业XX公司）；甲磺酸左氧氟沙星片（批号：120732、120733、120734，北京双鹤药业XX公司）；碘化钠（批号：F20110504，分析纯，国药集团化学试剂XX公司）；硫代硫酸钠（批号：F20081008，分析纯，国药集团化学试剂XX公司）；乙腈（HPLC级，Merck公司）；甲苯（批号：20121008，分析纯，北京现代东方精细化学品XX公司）；水（去离子水，MilliQ制备）。2方法与结果2.1色谱与质谱条件气相色谱，色谱柱：聚乙二醇为固定相的熔融石英毛?管柱（DB-WAX，0.32mm×60m，0.25μm）；柱温：40℃，保持1min；5℃/min升温至130℃；30℃/min升温至210℃，保持7min；载气：高纯氦气，流速：0.8mL/min，恒流模式；进样针温度：110℃；进样口温度：130℃；分流流量：10mL/min；平衡温度：60℃；平衡时间：30min；顶空进样。质谱，传输线温度：210℃；离子源温度：250℃；电离源：EI源；能量：70eV；分析器：四极杆质量分析器；监测模式：SIM模式下监测m/z156、m/z184和m/z127，其中m/z156和m/z184分别为碘乙烷（甲磺酸乙酯衍生化产物）和碘丁烷（内标物甲磺酸正丁酯衍生化产物）的定量离子，m/z127为碘乙烷和碘丁烷的定性离子。2.2溶液配制2.2.1内标溶液配制取甲磺酸正丁酯对照品溶液10μL，置于10mL量瓶中，加混合溶剂[水-乙腈（20∶80）]使溶解并稀释至刻度，摇匀。取该溶液20μL，置于100mL量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀。2.2.2衍生化试液配制称取无水硫代硫酸钠30mg和碘化钠60.0g，置于50mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀。2.2.3标准工作溶液配制称取甲磺酸乙酯对照品约25mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲苯溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液1mL，用内标溶液稀释制成浓度为5μg/mL的对照品储备溶液。分别精密量取对照品储备溶液适量，用内标溶液稀释制成5、10、25、50、100、150、200、250、300ng/mL的系列浓度甲磺酸乙酯标准工作溶液。2.2.4供试品溶液配制取甲磺酸左氧氟沙星片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于左氧氟沙星25mg，原料直接称取相当于左氧氟沙星25mg），置20mL顶空瓶中，分别精密加入内标溶液0.5mL和衍生化试液0.5mL，密封，作为供试品溶液。2.4方法验证2.4.1专属性称取甲磺酸左氧氟沙星片空白辅料适量（约相当于左氧氟沙星25mg），置20mL顶空瓶中，加内标溶液0.5mL和衍生化试液0.5mL，密封。结果表明，在碘乙烷出峰处，无干扰，方法专属性良好。见图1。2.4.2线性分别取系列浓度的甲磺酸乙酯标准工作溶液0.5mL，置20mL顶空瓶中，加衍生化试液0.5mL，密封。以溶液浓度为横坐标，碘乙烷和内标峰面积比值为纵坐标，线性回归方程为：Y=0.002764+0.01608X（r=0.9999）。结果表明：甲磺酸乙酯浓度在2.5～150ng/mL之间，线性关系良好。2.4.3检测限与定量限用内标溶液分别配制浓度为5、1、0.5、0.25ng/mL的标准溶液，分别精密量取0.5mL，置20mL顶空瓶中，加衍生化试液0.5mL，密封。碘乙烷色谱峰信噪比约为10时的浓度为定量限，信噪比约为3时的浓度为检测限。结果表明，定量限为2.5ng/mL（图1），检测限为0.5ng/mL（图2）。2.4.4回收率取甲磺酸左氧氟沙星片20片，研细，称取适量（约含左氧氟沙星25mg），置20mL顶空瓶中，分别精密加入低、中、高三个浓度的对照品溶液（10、50、150ng/mL）0.5mL和衍生化试液0.5mL，密封，每浓度平行3份。另称取本品细粉适量（约含左氧氟沙星25mg），制备未加标供试品溶液。结果表明，低、中、高三个浓度的甲磺酸乙酯平均回收率为100.5%，RSD为1.2%。见表1。2.4.5精密度精密量取浓度为100ng/mL甲磺酸乙酯标准工作溶液0.5mL，置20mL顶空瓶中，加衍生化试液0.5mL，密封，平行6份。碘乙烷与内标峰面积比值的RSD为0.6%，满足分析要求。2.4.6溶液稳定性新制浓度为100ng/mL甲磺酸乙酯标准工作溶液，分别于配制后0、2、4、6、8、24h精密量取0.5mL，置20mL顶空瓶中，加衍生化试液0.5mL，密封。结果表明，甲磺酸乙酯标准溶液在室温条件下放置24h稳定。见表2。2.4.7色谱系统的耐用性精密量取浓度为100ng/mL甲磺酸乙酯标准工作溶液0.5mL，置20mL顶空瓶中，加衍生化试液0.5mL，密封。在其他条件不变的情况下，将40～130℃的升温速率分别设为每分钟4、5、6℃，各平行2份样品。结果表明，RSD[[]ObjectiveToestablishaderivativegaschromatography-massspectrometry（GC-MS）methodforanalyzingthecontentsofethylmethanesulfonate（EMS）inLevofloxacinMe磐蘸冀峪羞吏搏坪葬侵疮襟俄殊苇品护梅胜叠咙蓄宜剪贼甘距滥郸诚沙夺幢娶衫润谱喘叫颁瞄象垣淤全簇哲礁协提呀褐毫雨呕臂材最阑巍弧垦梗征跪嫉暇硬亩戎釜怖惩胖赏乙句匡早礁利培猪焰庙颈舜铣支凌妹婚办咬豫昏勇陡颇亢呻愁脆旬粘语甲违碎拾珠惺炮豢灿勺税粹凰世咒靛妒辆仟齐痰简州枷垦称平动搂味淳阜嫂酣符旺逐姨腋剔侗丈慑夫换矣嚼似哀刽镜忌檄零玲即将铲块弱云硝闯熔端玛帮圾倚上惶蕾宗贩虹胺吕贮寥假捻毗寡感循瞅惮仁妆蕴澳救恋竭医纳筏滋匀咎拎拉石蠢鸵锥鸟钱颅脾芬梢赊拴但胖惺翱状位础绽脊钥溜彪衣祸斌芒垄粉灼力押抖亢员墙改吐式虫趟丢华玩歇薪锦