维生素类药物

第九章维生素类药物的分析AnalysisofvitaminsCompanyLogo概述一、概念维生素1）维持人体正常代谢功能所必需的一类微量的生物活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节。2）大多数人体内不能自行合成,必须从食物中摄取。CompanyLogoHotTip二、化学结构：醇、酯、酸、胺、醛，酚三、分类脂溶性维生素:VitA、D2、D3、E、K1水溶性维生素:VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺CompanyLogo四、分析方法1.生物法2.微生物法3.化学法4.物理化学法CompanyLogo第一节维生素A（VitaminA）的分析维生素A1活性最高，维生素A2的生物活性是维生素A1的30-40%，维生素A3的生物活性是维生素A1的0.4%，故通常所说的维生素A系指维生素A1。CompanyLogo第一节维生素A（VitaminA）的分析来源1）天然产物主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油,即鱼肝油。从鱼肝油提取的VA多为各种酯类的混合物，其中主要为醋酸酯和棕榈酸酯。2）人工合成产物全反式维生素A醋酸酯《中国药典》收载的VA是人工合成的VA醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有VAD胶丸和VAD滴丸。CompanyLogo药典收载情况VA及醋酸酯棕榈酸酯混合物的食用油溶液。人工合成的VA醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有VAD胶丸和VAD滴丸。浓缩VA油混合物Ch.PUSPBPCompanyLogo第一节维生素A（VitaminA）的分析一、结构和性质（一）结构H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯CompanyLogo环己烯共轭多烯侧链存在多种立体异构化合物具有UV吸收易发生脱氢、脱水、聚合反应CompanyLogo（二）性质1。性状AddYourText2。稳定性3。紫外吸收特性AddYourText4。与三氯化锑呈色TextCompanyLogoO2H+重排[O][O]VA酸VA醛呋喃型氧化物（无生物活性）CompanyLogoH+++-H去水VA（VA3）烯丙型醇遇酸易发生脱水反应CompanyLogo二、鉴别反应紫红蓝色3SbClVitACHCl3反应机理：VA与三氯化锑(SbCl3)中存在的亲电试剂氯化高锑（SbCl5）作用形成不稳定的蓝色正碳离子。注意事项：反应需在无水、无醇条件下进行。水可使SbCl3水解成SbOCl乙醇可与正碳离子作用，使正电荷消失溶剂：饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液CompanyLogo2、紫外吸收特征去水维生素A（A3）：6个共轭双键，其最大吸收波长向红移，在340～390nm波长间出现3个最大吸收峰(348、367、389nm)。维生素A：5个共轭双键，其无水乙醇液在326nm波长处有最大吸收。CompanyLogo3、薄层色谱法BPUSP薄层板：硅胶G硅胶展开剂：环已烷-乙醚（8：2）显色剂：三氯化锑磷钼酸现象：蓝色斑点蓝绿色斑点CompanyLogo三、含量测定1紫外-可见分光光度法2比色法3高效液相色谱法CompanyLogo（一）紫外-可见分光光度法利用维生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在325～328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定CompanyLogo三点校正法——三波长测定法（1）原因（2）原理CompanyLogo11VitA的max（328nm）22和3在1的两侧各选一点(3)波长选择等波长差法：1-2=3-1等吸收比法：A2=A3=6/7Amaxeg:《中国药典》中测定VA醋酸酯，1=328nm、2=316nm、3=340nmeg:《中国药典》中测定VA醇，1=325nm、2=310nm、3=334nmCompanyLogo(4)测定方法测定对象VA醋酸酯（纯度较高）第一法（直接测定法）max在326-329nm之间，且分别计算5个波长处的差值均不超过±0.02，直接用测得的A328，用下述公式计算含量标示量%=A328×D×1900×w/(W×100×L×标示量)×100%—等波长差法300、316、328、340、360nmCompanyLogo最大吸收波长是否在326-329之间是否计算吸收度比值之差是否超过±0.02第二法（皂化）是否计算A328（校正）A328CompanyLogo%100AAA328328328（校正）-15%-3%03%皂化A328（校正）A328皂化计算A值(一个或几个超过±0.02)CompanyLogo5、生物效价及换算因数1IU的VitA=0.300ug的全反式维生素A醇=0.344ug的全反式维生素A醋酸酯（1）生物效价的定义维生素A含量是用生物效价表示单位IU/g（国际单位）生物效价（IU/g）=吸收系数×换算因数CompanyLogo（2）换算因数的计算1g维生素A醋酸酯相当的维生素A的国际单位数为）（IU2907000g344.010IU161g维生素醇相当的维生素A的国际单位数为）（IU3330000g300.010IU16CompanyLogo190015302907000183018203330000(VitA酯)(VitA醇)换算因子=IU/g/%11cmECompanyLogo1、判断法选择AA测定或A校正2、求%11cmE3、计算效价换算因数）效价（%1cm1g/IUElcAEcm）（%%11（3）计算CompanyLogo制剂——VitA胶丸的含量计算%100IU/g%标示量平均丸重）效价（标示量%100E%1cm1标示量平均丸重换算因数%100cA标示量平均丸重换算因数CompanyLogo第二法（皂化法）用醇制氢氧化钾加热皂化（水解），用乙醚提取，挥干溶剂，残渣用异丙醇溶解，测定含量。测定对象VitA醇等吸收比法300、310、325、334nmCompanyLogo最大吸收波长是否在323-327之间是否A300/A325是否超过0.73色谱法纯化是否计算A325（校正），或A值CompanyLogo计算A值%100AAA325325325（校正）03%－3%CompanyLogo（二）三氯化锑比色法（三）高效液相色谱法CompanyLogo思考题1）三点校正紫外分光光度法测定维生素A含量的依据（原理）是什么？2）三点校正紫外分光光度法测定维生素A醋酸酯含量时，校正公式是什么？换算因子是多少？写出测定其胶丸含量时标示量%的计算式。CompanyLogo氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)第二节维生素B1的分析氨基嘧啶环噻唑环UV（一）结构一、结构与性质还原性CompanyLogo1、溶解性易溶于水；微溶于乙醇；不溶于乙醚2、硫色素反应（二）性质3、紫外吸收特性4、与生物碱沉淀试剂反应5、氯化物特性CompanyLogo二、鉴别试验（一）硫色素反应（二）生物碱沉淀反应（三）与硝酸铅的反应（四）氯化物反应VitB1+NaOH共热Na2SNa2S+Pb(NO3)2PbS2（黑色）CompanyLogo硫色素反应（鉴别与含量测定）硫色素反应为VitB1的专属反应原理NaOH环合［Ｏ］环合CompanyLogo荧光消失蓝色荧光硫色素正丁醇）（环合HCNFeKOHNaOHVitB6321]O[OH鉴别试验CompanyLogo42][42HgIHBHgIK淡黄H+白色硅钨酸H+OHWOOHSiOB23222412][H+VitB1与生物碱沉淀试剂的反应（鉴别）H+CompanyLogo（一）非水溶液滴定法（原料药）三、含量测定原理利用噻唑环上季铵和嘧啶环上氨基的弱碱性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。CompanyLogo（二）紫外吸收（鉴别与含量测定）VitB1分子结构中具共轭双键，在紫外区246nm处有最大吸收，可进行鉴别与含量测定。原理差示分光光度法？CompanyLogo计算公式：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素Ｂ125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9→1000)约70ml，振摇15分钟使维生素Ｂ1溶解，加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数为421计算，即得。%10010011%1%标示量）标示量（WWnVcmEA（二）紫外－可见分光光度法（维生素Ｂ1片剂）CompanyLogo（三）硫色素荧光法激发波长365nm发射波长435nm1、方法与计算对照液+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇供试液%WWdSbA%VitB1001稀释度稀释度样对SdAb含量测定CompanyLogo2、特点①灵敏度高，线性范围宽②代谢产物不干扰，适用于体液分析CompanyLogo（三）高效液相色谱法（四）毛细管电泳法CompanyLogoL（+）－抗坏血酸（活性最高）D（-）－异抗坏血酸（为前者5%）L（+）－异抗坏血酸（无活性）D（-）－抗坏血酸（无活性）第四节维生素C的分析一、结构与性质(一）结构两个手性碳原子，有四个光学异构体二烯醇强还原性弱酸性（一元酸）CompanyLogo（二）性质1、性状白色结晶或结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变微黄，水溶液显酸性。2、溶解性易溶于水；略溶于乙醇；不溶于氯仿和乙醚。3、旋光性比旋度+20.50-+21.50CompanyLogo4、酸性烯二醇结构由于共轭效应的影响C3－OHpKa=4.17C2－OHpKa=11.5故VC表现为一元酸，可与NaHCO3生成钠盐CompanyLogo５、水解性ＮaOHＮa2CO3酮酸盐CompanyLogo6、强还原性二烯醇结构－２Ｈ＋２ＨＯＨ（Ｈ＋）Ｌ－抗坏血酸（有生物活性）Ｌ－去氢抗坏血酸（有生物活性）Ｌ－二酮古洛糖酸（无生物活性）CH2OHC--HC--OHCOONaOHHOOCompanyLogo蓝色糠醛吡咯脱水HVitC50℃7、具糖的性质结构与糖类相似8、紫外吸收特性CompanyLogo（二）鉴别试验1、氧化反应（１）与AgNO3反应（银镜）黑AgAgNOVitCCompanyLogo（２）与2，6-二氯靛酚反应（含量测定）还原型原理酚亚胺二氯靛酚，VitC氧化型无色还原空样二氯靛酚液空白样品VVHAcHPO3自身指示终点法测定方法CompanyLogo快速滴定防止其他还原性物质干扰（2min内）酸性环境HPO3-HAc中VitC稳定剩余比色测定（定量过量）（测剩余染料）讨论CompanyLogo缺点需经常标定贮存≤一周不稳定干扰多氧化力较强CompanyLogo红碱性酒石酸铜OCuVitC（3）与碱性酒石酸铜反应（4）与KMnO4反应MnKMnOVitC2、糖类的反应3、紫外分光光度法243nmCompanyLogo1、原理（一）碘量法三、含量测定＋Ｉ２＋ＨＩＨ＋CompanyLogo取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.１mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.１mol/L)相当于8.806mg的C6H8O62、测定方法CompanyLogo1、酸性环境减慢VitC被O2氧化速度2、新沸冷H2O减免水中O2的干扰3、讨论3、立即滴定减少O2的干扰4、制剂测定时注意，注意消除辅料的干扰。Na2S2O5+H2O2NaHS