2018年艾滋病检测点培训课件

HIV实验室检测培训2018.7.10艾滋病基础知识---定义艾滋病（AIDS）：由人类免疫缺陷病毒（HIV）所引起的一种以辅助性T淋巴细胞（CD4+T淋巴细胞）数量减少导致免疫功能减退为主要特征的严重传染性疾病。---来源20世纪40-50年代的非洲，HIV病毒可能由猴子体内的猿免疫缺陷病毒演变而来---流行最早在美国发现欧洲非洲20世纪80年代中后期传播到亚洲---感染的自然发展过程•窗口期受到HIV感染到可以检测出艾滋病抗体的这一段时间特点：轻微的一过性感冒症状在窗口期内检测不出抗体感染（HIV-1）2-3周可检出P24抗原感染者的血液、精液、阴道分泌物等体液中，含有大量HIV•无症状潜伏期8-10年特点：HIV抗体+•临床症状出现平均10年的潜伏期后出现•艾滋病病人临床症状出现后1年发展为病人•死亡无抗病毒治疗情况下，半年到2年的时间，病人死于艾滋病HIV抗体（-）HIV抗体（+），无症状HIV抗体+有症状艾滋病4-8周8—10年1年0.5—2年左右个体感染艾滋病病毒后的自然发展过程HIV检测是艾滋病防治的一项重要保证措施明确HIV感染者（诊断）及早医学干预合宜的治疗指标和效果评估疫苗效果考评发现HIV阴性者做好减少危险（不安全性行为和药瘾者）的咨询开展VCT的基础流行病学监测和专题研究公共卫生规划（政策形成、保险、控制等）职业保护达到保证措施的必要条件贯彻有关HIV检测的法规（实验室网络、人员、仪器设备、房屋等条件）有效的检测方法和检测试剂常规质量控制和质量保证艾滋病检测工作管理文献1990.全国HIV检测管理规范（试行）1997.9.全国艾滋病检测工作规范2004.8.全国艾滋病检测技术规范（试行）-----“规范”2003.全国艾滋病检测工作管理办法-----“办法”2004.12全国艾滋病检测技术规范（正式）2009全国艾滋病检测技术规范（修订版）HIV感染的实验诊断检测方法HIV培养，核酸测定，P24抗原检测，血清抗体测定金标准血清抗体测定，HIV感染后平均25天检出，待12周时几乎全检出HIV抗体检测两个阶段（筛查和确认）三个程序（初筛－复检－确认）2＋3标本（血清，全血，唾液，尿液，滤纸干血）HIV筛查试剂要求和种类---要求SFDA注册批准中检所批批检合格CDC临床评估质量优良使用有效期内采供血机构必须使用HIV-1/2---种类•酶联免疫试剂（EIA）•颗粒凝集试剂（PA）•其它快速试剂（RT）检测注意事项---HIV抗体检测工作应该按照《全国艾滋病检测技术规范》，在合格的艾滋病检测实验室进行---为了减少检测的错误和误差，应采取严格的质量保证、质量控制和质量评价措施---注意实验室生物安全防护和职业暴露预防---严格遵守实验室标准操作程序（SOP），按照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污染检测程序---筛查试验---重复检测---确认试验HIV抗体筛查---职责经省卫生行政部门指定验收专家组，验收合格的HIV筛查实验室---方法、试剂酶联免疫实验：第三代双抗原夹心法试剂（ELISA）快速检测明胶颗粒凝聚实验斑点ELISA斑点免疫胶体金艾滋病唾液检测卡采集标本血液标本一般采集肘正中静脉血液3-5ml婴幼儿可选择颈外静脉采集标本以肘静脉取血为例。选择适宜静脉，在上臂扎上压脉带。先用25g/L碘酊棉签于欲穿刺处皮肤从内向外做环形消毒，待干后再用0.75L/L乙醇棉签以同样方式擦去碘迹。采集标本取无菌注射器，按牢针头，使针头斜面与针筒刻度平行，并查看有无阻塞和漏气。采用一次性注射器还应注意包装是否密封，有无过期，否则不得使用。采集标本嘱病人紧握拳头，使静脉显露。左手拇指固定穿刺部位下端，右手持注射器，使针筒刻度向上，先以约30º角度沿静脉正面进针，快速穿过皮肤刺入静脉中央。见回血后，右手固定注射器，用左手缓缓抽出注射器针栓，至所需血量后，解除压脉带，放松拳头，以消毒棉签压住穿刺孔，拔出针头。采集标本取下针头，将血液沿管（瓶）壁缓慢注入容器内，待血液自行凝固。血块收缩后，即可分离出血清。如需全血或血浆，则将血液注入事先准备的抗凝管（瓶）中，轻轻混匀，防止凝固，即为抗凝血。经适当离心可分离出血浆。血清和血浆的主要差别是，血清中无纤维蛋白原。采样完毕后应同时填写采样登记表标本处理将采集好的血液标本放入离心机3000转/分离心5分钟取出标本，用移液器（或一次性滴管）将血清移入血清储存管中（1.5ml）检测完毕后将血清储存管盖紧，放入冰箱冷冻室保存至少2个月胶体金快速检测技术一、原理本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗HIVgp41抗体，当检测进行时，样品中HIV抗体可与金标记的HIV抗原结合形成复合物，由于层析作用,使复合物沿试纸条向前移动。若样品中含有可被检测的HIV抗体，则与检测线预包被的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗原-HIV抗体一HIV包被抗原复合物凝聚显色；若样品中没有HIV抗体或HIV抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。二、试剂盒组成1.HIV(1／2)抗体胶体金试纸条／板50人份／盒，(5条)／lO袋。2.说明书1份。3.稀释液l份，4ml／瓶。三、操作步骤根据试剂盒说明书进行操作！一般操作步骤：1．将密封袋打开，取出所需试纸条／板。2．样本检测：取4Oul待检样本加在试纸条／板的加样区，再在近加样区上方加1滴稀释液。3．30分钟内观察并记录试验结果。四、结果判断阳性结果：在试纸条／板的检测窗和质控窗位置上各出现一条紫红色条带。阴性结果：仅在试纸条／板的质控窗位置上出现一条紫红色条带。无效结果：在试纸条／板的检测窗和质控窗位置上均未出现紫红色条带为试验无效。五、实验结果判断示意图六、注意事项1．被检样品、试剂应在室温2O℃左右平衡30分钟后检测。被检品应为新鲜样品。如发现试纸条／板密封袋破损则需废弃。2．高血脂和高胆红素样品对检测结果无显著性影响，但溶血样品，尤其是大量溶血样品对检测结果有显著影响。3．当质控窗与检测窗上均不出现紫红色条带时，应重新测试，如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品并与当地供货商联系。七、胶体金快速试剂实物HIV检测中的保密的认识HIV检测前后咨询中获得的隐私HIV检测结果与专业人员的讨论在各种场合中对受检者的讨论（包括会议）档案记录与保存受检者，家属，朋友和单位传报医院匿名检测系统能确保保密，但不利于医学管理初筛结果处理---初筛（-）出具“HIV抗体阴性”报告初筛（+）可出具“HIV抗体待复检”的报告，但不能出具阳性报告。---送复检•填写复检检测单，两人签字•重新采集受检者的血样•原样和新样连同送样单HIV筛查实验室确认实验室•筛查实验室复检•做好检测前后咨询样品筛查检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送初筛实验室进行复检重复检测均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种筛查试剂筛查试剂阴性反应检测点筛查试验流程图重复检测---职责HIV筛查实验室或HIV确认实验室[筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制]---试剂•选择：两种不同原理或厂家•品种：酶联免疫试剂快速检测试剂重复检测结果处理---复检（-）出具“HIV抗体阴性”报告复检（+）可出具“HIV抗体待复查”的报告，但不能出具阳性报告。---送确认•填写复查送样单，两人签字•原样或新样连同送样单送确认实验室确认实验---职责确认实验室---检测方法•免疫印迹实验（WB）•线性免疫实验（LIA）•免疫荧光实验（IFA）确认结果解释1.确认阴性（-）进行阴性咨询2.确认阳性（+）进行阳性咨询3.不确定结果按照“全国艾滋病检测技术规范”的规定进行随访4．当样品中抗体含量极高时，质控窗条带有所减弱，但此结果仍视为有效结果(若需进一步确认，可用HIV抗体阴性血适量稀释后再作测试)。5．本品检测阳性结果须进行确证试验确证。6．测试过程中所接触血液样品，一律视为HIV阳性操作。7．30分钟后观察的结果无效。