肠胃舒胶囊等6种中成药微生物

肠胃舒胶囊等6种中成药微生物限度检查法验证实验总结样品•骨络通酒011362北京北卫药业有限公司、化瘤胶囊302107北京北卫药业有限公司、肾宁丸21006北京北卫药业有限公司、消渴丸0201060北京北卫药业有限公司、肠胃舒胶囊030610北京北卫药业有限公司、防癌胶囊100210北京北卫药业有限公司．菌种•枯草杆菌63501、金黄色葡萄球菌26003、大肠杆菌44102、白色念珠菌98001、黑曲霉98003、沙门氏菌50094。方法•中国药典2000版与2005版微生物限度检查法方法验证的比较实验。方法验证：（一）．菌液制备•1．取经37℃培养18-24小时，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌肉汤培养物1ml+9ml盐水10倍稀释至10-5~10-7为50~100个/ml，做活菌计数备用。•2．取经25℃培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9ml盐水10倍稀释至10-5~10-7为50~100个/ml，做活菌计数备用。•3．取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3~5ml盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用标准比浊管比浊，与浊度相当后，取1ml+9ml盐水=10-1，逐管10倍稀释为10-4约50~100个/ml，做活菌计数备用。（二）．供试液制备•称取各品种样品10g，加0.1%胨水氯化钠稀释液100ml浓度均为1：10供试液，分别人工污染上述5种试验菌株。（三）．培养基稀释法•采用加0.5ml、0.2ml、0.1ml/皿供试液，再加15~20ml琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~48小时观察结果，细菌计数，测定回收率。（四）．离心集菌薄膜过滤法•分别取不同品种的1：10供试液10ml，移至灭菌的离心管中，以500转/分5分种后，取上清液1ml，加入薄膜过滤器中，采用0.1%蛋白胨氯化钠冲洗液300ml/膜，再加规定菌株冲洗后，取膜贴于琼脂平板，置规定温度培养24~72小时观察结果（五）．回收率测定：1)试验组•分别取不同品种的1：10供试液1ml、50~100个/ml试验菌株，同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时观察结果。薄膜过滤法以最后一次的冲洗液加入试验菌。2)活菌组•测定每一菌株加的试验菌数3)供试液对照•测定供试品本底菌数4)稀释剂对照组四．结果见表1.2.3.药物名称人工染菌回收率%控制菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉大肠菌群1g0.1g化瘤胶囊96.0100.0100.0100.0100.0⊕⊕肾宁丸100.0100.075.6100.095.5⊕⊕防癌胶囊35.4100.066.6100.081.2⊕⊕肠胃舒胶囊100.021.746.6100.0100.0⊕⊕骨络通酒100.06.861.1100.091.6⊕⊕消渴丸93.41.166.6100.087.5⊕⊕表1结果可见•1.采用常规方法检验６个品种，人工污染5株代表菌株，其中化瘤胶囊、肾宁丸，２个品种供试品的回收率均高于70%，经方法学验证，无抗菌活性，可采用常规方法检验。•2．有3个品种对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌有不同程度的抗菌活性，肠胃舒胶囊、骨络通酒、消渴丸3个品种供试品回收率为1~66.6%，有明显的抗菌活性。此外防癌胶囊对大肠杆菌的回收率为35.4%低于70%，有抗菌作用，不可采用常规方法，可采用适宜方法进行检验3．采用培养基稀释法•测定上述含抑菌成份的中成药微生物限度验证试验，结果见表2.3。药品名称人工染菌回收率%大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌骨络通酒*75.8100.0消渴丸*79.076.0肠胃舒胶囊*21.2防癌胶囊65.9*86.4•其回收率显示，骨络通酒、消渴丸稀释0.5ml/皿对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌回收率均超过70%，可用此法测定。防癌胶囊对枯草杆菌回收率超过70%，而对大肠杆菌回收率低于70%，稀释至0.2ml/皿对大肠杆菌回收率超过70%，可采用稀释法0.2ml/皿测定。胃肠舒胶囊对枯草杆菌采用稀释法0.2ml/皿，仍不可除去其抗菌成分，应采用薄膜过滤法进行测定。表2结果证明•采用培养基稀释法，人工污染金黄色葡萄球菌、枯草杆菌可消除抗菌作用。•回收率达到70%以上的骨络通酒、消渴丸可采用培养基稀释法（0.5ml/皿）检验。其中肠胃舒胶囊对金黄色葡萄球菌回收率低于70%，防癌胶囊对大肠埃希菌回收率低于70%，故应降低稀释度（0.1、0.2ml/皿），进行检验。培养基稀释法和薄膜过滤法回收率结果表3表3结果证明•采用培养基稀释法0.2ml/皿，人工污染大肠埃希菌，防癌胶囊回收率达到70%以上；人工污染金黄色葡萄球菌，肠胃舒胶囊回收率达到70%以上，而对枯草杆菌回收率62.0%，仍不可消除抗菌作用，采用薄膜过滤法进行测定，回收率为100%。五、结论•通过方法学验证实验证明，上述6个品种中，肾宁丸、化瘤胶囊可采用常规方法检验；骨络通酒、消渴丸采用稀释法（0.5ml/皿）；防癌胶囊（0.2ml/皿）检验；肠胃舒胶囊应采用薄膜过滤法检验，对5株阳性代表菌株回收率均为70%以上。