药典动态对药品研发影响及原始记录常见问题讨论

化学原料药质量研究及原始记录常见问题讨论余立[e-mail]特性研究-理化、稳定性对照品研究-标化、校正因子方法研究-建立、验证原料药研究的特点杂质研究-工艺、残留溶剂1432建立标准时要考虑的问题200820072006200520042003200220012000常见研究误区以及供参考的经验和体会新版药典动态对化学原料药质量研究的影响研发原始记录中常见问题及改进建议主要讨论内容Clicktoedittitlestyle杂质控制微粒控制安全性控制注射剂所用的原辅料应从来源及工艺等生产环节进行严格控制并应符合注射用的质量要求。标准增项杂质谱的比较供注射用原料质控变化重点提示杂质控制力度大幅度提高未修订品种有关物质（常规）增项增指标严限度改方法TLC→HPLC等度→梯度理论板数→分离度特定杂质增订单列项盐酸阿糖胞苷项目2005年版2010年版含量限度97.0％～103.0％98.0%～102.0%鉴别3项3+1项（+HPLC）检查干燥失重干燥失重----溶液的澄清度与颜色----含氯量----有关物质梯度、校正、3个特定杂质----残留溶剂----炽灼残渣和重金属含量测定UV吸收系数法HPLC外标法*性状项下还有熔点和比旋度项，第一次飞跃第二次飞跃纯度控制杂质控制杂质谱控制有关物质的研究－杂质质控理念的变迁杂质谱的定义•ImpurityProfile（杂质谱）:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.•对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质的总的描述。已确证了结构特征的杂质在质量标准中规定检查并有自己限度标准的杂质。已鉴定或未鉴定按照理论推测在生产或贮藏过程中可能产生的杂质，实际产品中不一定存在存在于药品中的杂质组成或模式Clicktoedittitlestyle选择最优多种互补结构确证比较杂质的数与量，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品的安全有效性结果杂质谱比较杂质谱的比较新方法分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）原方法中国抗生素杂志，2009，34：734在对各国药典方法比较的基础上确定分析方法项目原研厂标准拟定标准EP7.0USP34JP15含量限度按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg效价不得少于150I.U.（非口服制剂），每1mg效价不得少于120I.U.（口服制剂按干燥品计算，每1mg中效价不得少于180USP肝素单位每1mg的效价不得少于110单位。性状白色或类白色的粉末，有引湿性白色或类白色的粉末，极具引湿性白色或几乎白色的粉末，有适度的引湿性白色到灰棕色的粉末或颗粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度不小于+35°(40mg/ml,水)应不小于+50°(40mg/ml,水)鉴别1、电泳法2、钠盐1、电泳法2、钠盐A、具有抗凝血作用B、比旋度C、电泳法：D.钠盐A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、钠盐酸碱度5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.5～8.0（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）6.0～8.0杂质谱的比较－多种互补•不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长）•不同检测器（uv、DAD）•不同原理的方法•-分离或检测杂质谱的比较－多种互补–柱串联技术–适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，通过将一根SCX（阳离子交换）短柱与一根MGⅡC18长柱串联就可以简单达到将其分离的目的。–原理：有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于SCX短柱的离子交换作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入C18长柱中，从而成功分离；然后由于MGⅡC18长柱中疏水性基团间的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了–如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与C18长柱前接一根NH2短柱（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的分离效果。杂质挥发性杂质有机杂质无机杂质残留溶剂其它RP-HPLC不同检测器ICP-MS离子色谱互补方法HPCEHPTLCGC-MSHS-GC梯度洗脱HPGPC颜色控制杂质谱分析的基本途经新杂质的研究－药物杂质的可能来源1.原料：红霉素A、红霉素B、红霉素C、红霉素D、红霉素E、红霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺3.副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氢阿奇霉素、O-甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8，9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮阿奇霉素中可能存在的杂质：37种结构确证常用的方法热分析Ｘ－粉末衍射核磁元素分析质谱紫外红外模拟色谱图实际色谱图毒性快速评价平台•斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。优点：–杂质用量少–无需知道杂质结构–实验周期短（3－4天一个周期）药物耳毒性检测利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后1神经丘消失。给药后系统对照组（正常幼体）增设有效项目指标加强安全性监控结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的特殊性设立特色有针对性检测项目，最大限度解决安全隐患。–人尿制品增加乙肝表面抗原检查：如尿激酶、尿促性素、绒促性素、乌司他丁等–重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性DNA残留量如重组人生长激素、重组人胰岛素等。–含不饱和脂肪酸的品种增加甲氧基苯胺值检查：如多烯酸乙酯（P272）等。增设有效项目指标-甲氧基苯胺值–含有不饱和脂肪酸的药物在生产和贮藏过程中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可进一步生成醛类等化合物，而甲氧基苯胺值（也称p-茴香胺值）就是ISO推荐的一种对此类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录2.5.36收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺值越高，说明其劣变程度越严重。–测定原理：甲氧基苯胺与醛反应生成醇胺，醇胺脱水生成的醛亚胺可采用紫外-可见分光光度法在350nm波长处测定。增设有效项目指标-甲氧基苯胺值注意：–甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时应避免接触皮肤，一旦失误，需用水冲洗15分钟以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，需当天配制使用。以异辛烷作空白做基线校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超过了0.2，则需重新配制试剂。–供试品溶液中加入0.25％的4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注意避光，在350nm波长处的吸光度随时间的延长缓慢增加，需准确放置10分钟后测定，尽量减小误差。–本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分的存在会导致反应不完全，测定值偏低，当样品中水分含量超过0.1%时，可按10g样品加1～2g无水硫酸钠的比例脱除水分后测定。另外，应取用新开启包装的供试品。2-乙基己酸•β-内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录－2010年版药典二部（附录ⅦL）；如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。2-乙基己酸勘误：•β-内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录－2010年版药典二部（附录ⅦL）；如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。勘误：目前中国不仅接受了ICH对化学药品中残留溶剂控制的理念，而且结合中国国情，建立了具有中国特色的残留溶剂检查方法。–《中国药典》2005版中，对残留溶剂的分类及限度标准已经与ICH的要求完全一致，但仅在附录中作为原则性统一要求。–《中国药典》2010版中，原料药要求在各论项下根据其生产工艺制定残留溶剂检查方法–抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细的残留溶剂检查方法从附录走向各论残留溶剂如：头孢泊肟酯残留溶剂照残留溶剂测定法（附录ⅧP）测定。甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯色谱条件与系统适用性试验略内标溶液的制备取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml中约含200μg的溶液，作为内标溶液。残留溶剂残留溶剂检查方法及验证！除正文已明确列有“残留溶剂”检查的品种必须依法进行检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的规定检测方法进行了相应的调整：•顶空进样甲烷气体，记录死时间(t0)•顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保留时间(tR)相对于参考物质保留时间(t’R)的相对调整保留时间(Relativeadjustmentretentiontime，RART)法替代RRT法•tR为组分的保留时间;t’R为参比物的保留时间。•t0为甲烷保留时间。0'0ttttRARTRR－残留溶剂检测方法选择：•直接进样？顶空进样？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？•验证项目确定：•回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？•原始记录较常发现的问题•连带问题：按无水无溶剂计算残留溶剂方法建立、验证与常见问题高聚物凝胶色谱法（2010年版新增的19个标准）原料制剂头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠头孢替唑钠注射用头孢替唑钠头孢尼西钠注射用头孢尼西钠头孢噻吩钠注射用头孢噻吩钠磺苄西林钠注射用磺苄西林钠阿洛西林钠注射用阿洛西林钠美洛西林钠注射用美洛西林钠氯唑西林钠注射用氯唑西林钠苯唑西林钠注射用苯唑西林钠普鲁卡因青霉素高聚物2010版：品种增加,方法多元化1、自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝胶G-10（SephadexG10）；短柱子的使用，减少分离时间2、商品凝胶柱TSK-GELG2000SWXL：头孢地嗪（北京所）3、ODS柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所)4、柱切换（中检所），实现凝胶色谱与反相色谱的统一高聚物盐酸头孢替安聚合物分析方法的比较SephadexG-10系统TSK-GelG2000swxl系统0.8ml/min供注射用原料可见异物检查•头孢他啶：•取本品5份，每份3.0g，加1%碳酸钠溶液（经0.45μm滤膜滤过）溶解，依法检查（附录ⅨH），应符合规定。•头孢地嗪钠：•取本品5份，每份2.0g，分别加微粒检查用水溶解，依法检查（附录ⅨH），应符合规定。•有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反应，产生白点、白块和玻璃屑•有些品种如甲