生物制品化学规定规程

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资源描述

生物制品化学规定规程本规程载人的化学检定项目,如采用其他方法测定,其结果与本规程所列应无显著差异。如遇制品质量存在疑问时,其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。标准液的配制与标定方法参看最新版《中国药典》。PH值测定(电位法)1仪器校准(定位)用标准缓冲溶液应使用分析纯标准缓冲物质配制。1.10.05mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液称取于115±5℃干燥2~3小时的邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)10.12±0.01g,溶于蒸馏水,并稀释至1000ml。1.20.025mol/L磷酸氢二钠和0.025mol/L磷酸二氢钾混合溶液分别称取在115±5℃干燥2~3小时的磷酸氢二钠(Na2HPO4)3.53±0.01g和磷酸二氢钾(KH2PO4)3.39±0.01g,溶于预先煮沸过15~30分钟并迅速冷却的蒸馏水中,并稀释至1000ml。1.30.01mol/L硼砂溶液称取硼砂(Na2B4O7·10H2O)3.80±0.01g(注意:不能烘!),溶于预先煮沸过15~30分钟并迅速冷却的蒸馏水中,并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。标准缓冲溶液于0~50℃的标准pH值温度(℃)0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾0.025mol/L混合磷酸盐0.01mol/L硼砂04.016.989.4654.006.959.39104.006.929.33154.006.909.28204.006.889.23254.006.869.18304.016.859.14354.026.849.10404.036.849.07454.046.839.04504.066.839.022操作使用玻璃电极酸度计测定,操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对,相差不得超过0.05。固体总量测定甲、105℃干烤法1操作精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中,置105℃烤箱中烘至恒重。2计算烘干后样品重量样品固体总量%(g/ml)=──────────×100样品ml数乙、50℃干烤法1操作精确量取1mlA群脑膜炎球菌多糖菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶(2×2.5cm)中,置50℃干燥箱中,干燥至恒重。2计算同105℃干烤法。半微量定氮法1试剂1.1硫酸化学纯,比重1.84。1.2消化剂硫酸铜(CuSO4·5H2O)1份与硫酸钾(K2SO4)10份共同研细混匀即成。1.312.5mol/L氢氧化钠液取氢氧化钠500g,加蒸馏水至1000ml,摇匀。1.42%硼酸吸收液硼酸20g加蒸馏水使溶解成1000ml,加混合指标剂10ml,摇匀。1.5混合指示剂0.2%(g/ml)溴甲酚绿酒精溶液5份与0.1%(g/ml)甲基红酒精溶液2份混合配成。1.6标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸溶液。2操作2.1消化准确量取一定体积样品(含氮量在1~2mg左右)于凯氏定氮瓶中,加消化剂约0.3g,浓硫酸1.0ml进行消化,至澄明蓝绿色,继续消化约60分钟,同时做空白。2.2蒸馏与滴定取10ml硼酸吸收液于100ml三角瓶内,将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内,将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内,用蒸馏水洗定氮瓶3~4次,洗液亦移入蒸馏器内,再加5ml12.5mol/L氢氧化钠溶液,然后进行蒸馏,待接收液总体积约35~50ml,将冷凝管末端取出液面,让蒸汽冲洗约1分钟,再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端,接收液用标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸进行滴定,至溶液显著变色。3计算(样品滴定数–空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14样品总氮含量(mg/ml)────────────────────────样品ml数附注1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟。2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。蛋白质含量测定甲、钨酸沉淀法1试剂1.110%钨酸钠溶液取钨酸钠10g,加蒸馏水使溶解成100ml。1.20.33mol/L硫酸溶液量取化学纯硫酸1.86ml,缓缓注入适量的蒸馏水中,待冷加水稀释至100ml。1.30.145mol/L氯化钠溶液取氯化钠9g,加蒸馏水使溶解成1000ml。2操作2.1钨酸除蛋白质精确量取样品2ml加蒸馏水14ml,加10%钨酸钠2ml,0.33mol/L硫酸2ml,摇匀,静置30分钟过滤。2.2精确量取样品1ml,用0.145mol/L氯化钠溶液准确稀释至每ml含氮量1mg左右。2.3精确量取稀释液1ml及除蛋白质滤液5ml,分别移入凯氏定氮瓶中,用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。3计算样品总氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×稀释倍数样品非蛋白氮含量(mg/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×12样品蛋白质含量(g/ml)=(总氮-非蛋白氮)×6.25×1/10附注1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml),除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数,10%钨酸钠及0.33mol/L硫酸用量相应地按比例增加,使溶液钨酸浓度仍保持1%。2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。乙、三氯醋酸沉淀法12%三氯醋酸溶液取三氯醋酸12g,加蒸馏水溶解至100ml。2操作精确量取一定体积的样品(含蛋白质6~12mg左右,于10ml尖底离心管中,加等体积的12%三氯醋酸混匀,放置半小时后3000r/min离心30分钟,倾净上清,沉淀用蒸馏水约3ml(分数次)洗入凯氏烧瓶,按半数量定氮法测定氮含量。3计算(样品滴定数–空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14样品蛋白质含量(mg/ml)──────────────────────×6.25样品ml数丙、微量法(Lowry法)1.试剂1.14%碳酸钠溶液取4g碳酸钠,加蒸馏水溶解成100ml。1.20.2mol/L氢氧化钠溶液取0.8g氢氧化钠加蒸馏水,溶解成100ml。1.30.04mol/L硫酸铜溶液取1gCuSO4·5H2O加蒸馏水溶解成100ml。1.42%酒石酸钾(或0.1mol/L酒石酸钠)取2g酒石酸钾(或酒石酸钠),加蒸馏水溶解成100ml。1.5碱性铜液临用前取试剂1.1和1.2各25ml,试剂1.3和1.3各0.5ml混匀配制而成。1.6酚试剂称取100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25g钼酸钠(Na2MoO4·2H2O),置1500ml烧瓶中,加入700ml蒸馏水,50ml85%磷酸及100ml浓盐酸,上联回流管(使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞)微沸加流10小时,取下回流管,加入150g硫酸锂,50ml蒸馏水,几滴溴液,煮沸约15分钟,驱除过量的溴。冷却,加蒸馏水稀释至1000ml,过滤,为酚试剂贮备液。酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定,测定酸浓度,而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度,即为酚试剂。1.7标准蛋白质溶液取牛血清白蛋白标准品(由检定所统一标定发给),准确稀释至1mg/ml(含0.02%NaN3),为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml于25ml容量瓶中,用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度,为标准蛋白质溶液(100μg/ml)。2操作2.1样品精确量取一定体积样品(含蛋白质50μg左右)于试管中,加5ml碱性铜液,混匀,于室温放置10分钟,快速加入0.5ml酚试剂,摇匀,于室温放置30分钟,用650nm波长或红色滤光片比色(呈色后,如发现混浊,经3000r/min离心15分钟后再比色)。2.2标准曲线精确量取标准蛋白质溶液(100μg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,分别置于试管中,加蒸馏水补至1ml,其余操作同样品,可得一标准曲线。3计算从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之ml数A;A×0.01%样品蛋白质含量(g/ml)=────────样品ml数附注检测A群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取1ml(含抗原3~10mg)。硫酸铵含量测定1试剂1.11mol/L氢氧化钠液取化学纯氢氧化钠20g,加蒸馏水溶解成500ml。2操作2.1除蛋白质方法同蛋白质含量测定。2.2蒸馏精确量取除蛋白质滤液10ml于凯氏蒸馏器内,加1mol/L氢氧化钠1ml,加少量蒸馏水,按半微量定氮法进行蒸馏、滴定。3计算样品硫酸铵含量%(g/ml)=(样品滴定数-空白滴定数)×标准盐酸mol/L×14×4.715×1/10氯化钠含量测定1试剂1.10.1mol/L硝酸银溶液取硝酸银17g,加蒸馏水溶解成1000ml。1.2标准0.05mol/L硫氰酸铵溶液1.35.5mol/L硝酸1.48%硫酸铁铵指示液取8g硫酸铁铵,加蒸馏水溶解成100ml。1.5饱和高锰酸钾取高锰酸钾6.5g,加蒸馏水溶解成100ml。2操作2.1精确吸取样品1ml,准确加入0.1mol/L硝酸银溶液5ml,混匀(蛋白质含量高者加2ml饱和高锰酸钾),加10ml硝酸(5.5mol/L),直接加热消化至溶液澄清为止。待冷,加蒸馏水50ml,8%硫酸铁铵指示液1ml,用标准0.05mol/L硫氰酸铵溶液滴定至溶液呈淡棕红色,振摇匀仍不退色,即为终点。2.2空白试验准确量陬0.1mol/L硝酸银溶液5ml,加硝酸(5.5mol/L)10ml,可不消化,其余操作同样品。3计算样品氯化钠含量%(g/ml)=(空白滴定数-样品滴定数)×硫氰酸铵mol/L×5.845钠离子含量测定(火焰光度法)1试剂标准钠溶液:精确称取于110℃干燥至恒重的NaCl2.9227g,用双蒸水溶解并稀释至1000ml,为500mmol/L标准钠溶液。2操作2.1样品精确量取样品0.5ml于50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,于火焰光度计,589nm波长(或黄色滤光片)测其透光度。2.2标准曲线精确量取标准钠溶液0.9、1.1、1.3、1.5、1.7ml于50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,钠含量分别为0.9、1.1、1.3、1.5、1.7mmol/L,其余操作同样品。3计算由标准曲线上查出稀释后样品钠含量为ammol/L。样品钠含量(mmol/L)=A×100钾离子含量测定(火焰光度法1试剂标准钾溶液:精确称取于110℃干燥至恒重的KCl0.3728g,用双蒸水溶解并稀释至500ml,为10mmol/L标准钾溶液。2操作2.1样品精确量取样品2ml于50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,于火焰光度计769nm波长(或红色滤光片)测其透光度。2.2标准曲线精确量取标准钾溶液0.15、0.30、0.45、0.60、0.75ml于50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,钾含量分别为0.03、0.06、0.09、0.12、0.15mmol/L,其余操作同样品。3计算由标准曲线上查出稀释后样品钾含量为Ammol/L。样品钾含量(mmol/L)=A×25枸橼酸离子含量测定1试剂1.1标准枸橼酸钠浓溶液精确称取枸橼酸钠(Na3C6H标准5O7·2H2O)0.5882g,加蒸馏水溶解,并准确稀释至100ml,为20mmol/L枸橼酸钠液。1.2标准枸橼酸钠溶液精密量取标准枸橼酸钠浓溶液5ml,用5%三氯醋酸准确稀释至50ml,为2mmol/L枸橼酸钠标准液。1.310%三氯醋酸:称取三氯醋酸10g,用蒸馏水稀释至100ml。1.45%三氯醋酸:称取三氯醋酸5g,用蒸馏水稀释至100ml。1.5砒啶(A·R)。1.6醋酸酐(A·R)。2操作2.1样品精确量取0.5ml样品,加4.5ml蒸馏水,加5ml10%三氯醋酸,混匀,置60℃水浴5分钟,离心去沉淀。精确量取1ml上清液于25ml玻塞试管中,加1.3ml吡啶,混匀,加5.7ml醋酸酐,立即混匀并置于31℃水浴,准确培育35分钟后,于425nm波长下测OD值,同时做空白试验:取1ml5%三氯醋酸代替1ml去蛋白后样品上清液,其余操作同样品。2.2标准曲线精确量取标准枸橼酸钠溶液0.0、0.25、0.50、0.75、1.0ml,分别加5%三氯醋酸1.0、0.75、0.5、0.25、0.0ml(其相应的枸橼酸钠离子含量为0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol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