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结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册主审肖东楼王文杰许绍发王黎霞主编赵雁林刘宇红姜广路夏辉尚美编者（以姓氏拼音为序）柴琦陈马秀陈田雄冯苗顾才宏贾卫蓝如束李定越李国刚李国明李辉李琳梁庆福刘洁柳正卫梅建尼玛彭多潘毓萱钱明司红艳苏云开谭云洪王进鸿王莉王庆王瑞王苏民杨修军杨丹丹袁薇张学志赵德福周杨PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册前言为加强我国结核病实验室网络建设，提高各级痰涂片实验室工作质量，我国自圆园园源年引入并全面推行了世界卫生组织（宰匀韵）推荐的“结核病实验室痰涂片检查室间质量保证指南”，并出版印刷了第一版《中国结核病防治规划·痰涂片镜检质量保证手册》（以下简称“手册”）。在使用新的痰涂片镜检质量保证方法的实践中，我们积累了经验，也发现一些问题；同时，随着我国结核病控制一些新技术策略的出台，现行“手册”需要进行相应的修改和补充。为此，我们广泛征求了各省专家意见，并进行多次讨论，为了更准确地描述本手册涵盖的内容，经圆园园愿年省级参比室工作会议决定，将本手册命名为《中国结核病防治规划·痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》。本手册包括了第一版的大部分内容：结核病痰涂片检查的标准化操作、我国结核病实验室网络中各级实验室在痰涂片镜检质量保证中的职责、实验室质量控制及评估的具体方法，并附有统一的表格，供各省（自治区、直辖市）、地市、县区、乡镇卫生院以及各医疗机构从事结核病痰涂片检查的实验室遵照执行。本手册的修订和出版过程中，得到了香港跨国结核病参比实验室甘启文主任（阅则援运葬蚤酝葬灶运粤酝）、宰匀韵顾问阅则援杂葬灶早允葬藻运陨酝以及宰匀韵驻中国代表处医学官员阅则援匀藻灶灶蚤早悦燥则灶藻造蚤葬的大力支持和帮助，谨表谢意。PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册目录前言圆第一章绪论缘第二章痰涂片显微镜检查标准化操作远第一节痰涂片检查的目的远一、诊断传染性肺结核远二、评价化疗效果远三、为流行病学疫情评价服务远第二节痰涂片检查对象苑一、确定诊断苑二、疗效评价苑第三节痰标本的采集愿一、采集痰标本的容器愿二、痰标本的采集时间和采集次数愿三、对就诊者的留痰宣传教育怨四、采集痰标本地点怨五、痰标本评价怨第四节痰直接涂片抗酸染色显微镜检查标准化操作程序员园一、萋尔原尼尔逊染色显微镜检查法（在蚤藻澡造原晕藻藻造泽燥灶，简称萋尼染色法）员园二、荧光染色显微镜检查法员源三、玻片的保存员缘四、抗酸菌痰检注意事项员远第五节显微镜的使用、维护和保养员苑一、一般原则员苑二、日常维护员怨三、维修和保养员怨PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册第六节试剂和材料圆园第三章痰涂片显微镜检查质量保证圆员第一节实验室网络及职能圆员一、结核病实验网络圆员二、质量保证体系中各级实验室职能圆圆第二节室内质量控制圆源一、痰标本收集圆源二、抗酸染色液制备圆源三、涂片制备圆缘四、染色圆缘五、镜检圆缘六、登记报告圆远七、痰涂片保存圆远第三节室间质量评估圆苑一、现场评价圆苑二、盲法复检圆愿三、批量测试源园第四章报表源猿参考文献源缘附件源远附件员、结核病细菌学实验室登记本源远附件圆、痰涂片镜检检验报告单参考式样源苑附件猿、染色剂配制、保存源愿附件源、结核病实验室痰涂片镜检督导清单缘园附件缘、督导报告参考模式缘缘附件远、盲法复检涂片抽取举例缘远附件苑术语注释缘怨PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册第一章绪论在结核病控制工作中，通过实验室细菌学检查诊断传染性肺结核是阅韵栽杂策略的重要要素之一，痰结核菌检查对于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义。因此，结核病细菌学检查是国家结核病防治规划（晕葬贼蚤燥灶葬造栽怎遭藻则糟怎造燥泽蚤泽孕则燥早则葬皂皂藻，晕栽孕）的重要组成部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺少的重要作用。为了进一步加强结核病细菌学实验室质量控制，实现全国结核病控制规划目标，必须具备完善、有效的结核病实验室网络，实验室必须能够提供准确可信的试验结果，并且符合成本原效益原则。为此，只有通过实施有效的质量保证（匝怎葬造蚤贼赠粤泽泽怎则葬灶糟藻，匝粤）才能实现。完善的实验室质量保证系统依赖于国家结核病防治规划对各级实验室工作的支持、培训和监督，并在具体实施过程中逐步完善。本手册目的是提供标准化操作程序，为评估实验室工作的质量和结果的可靠性提供指南和方法。需要指出的是应用这些方法并不是为了校正每个病人的诊断正确与否，而是为了发现实验室工作中可能存在的问题并提出相应的解决方案和措施，从而确保整个实验室诊断服务的质量。PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册第二章痰涂片显微镜检查标准化操作第一节痰涂片检查的目的及优势在当前国家结核病防治规划的框架下，通过痰涂片显微镜方法检查抗酸杆菌（葬糟蚤凿原枣葬泽贼遭葬糟蚤造造蚤，粤云月）的目的是：一、诊断传染性肺结核结核病的控制是以发现和控制传染源为主，而痰涂片粤云月阳性的肺结核患者是社会上最主要的传染源，故痰涂片粤云月镜检结果对诊断传染性肺结核是一项重要指标。二、评价化疗效果结核病是由结核分枝杆菌引起的，现行化疗方案的制定也主要以结核分枝杆菌的生物学特性为依据，所以对化疗效果的评价，也将细菌学检查结果作为根据。三、为流行病学疫情评价服务由于传染性结核病在流行病学中有着特殊的意义，因此，在反映某一国家或地区结核病疫情的严重程度的指标中，涂阳患病率、涂阳发病率被更多关注。根据世界卫生组织（宰燥则造凿匀藻葬造贼澡韵则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶，宰匀韵）和国际防痨及肺部疾病联合会（陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造哉灶蚤燥灶粤早葬蚤灶泽贼栽怎遭藻则糟怎造燥泽蚤泽葬灶凿蕴怎灶早阅蚤泽藻葬泽藻，陨哉粤栽蕴阅）针对低收入且结核病疫情严重的发展中国家所制定的技术指南，痰涂片镜检是相应国家开展结核病控制项目时非常符合成本效益原则的细菌学实验技术。相对于临床和实验室经常采用的其它诊断和检查项目，高质量的痰涂片镜检有其自身特有的优势：员、作为诊断手段，对传染性肺结核的诊断比载线的准确性高；PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册圆、作为实验方法，技术相对简单，容易标准化和完成操作；猿、建立粤云月检查时所需设备投入少；源、检查成本低，易于接受；缘、从收到标本到报告结果的时间短，能够满足临床诊断的需要；远、对涂阳患者的治疗效果，能够作出及时和准确的评价。第二节痰涂片检查对象根据《国家结核病防治规划指南》的有关规定，检查对象根据检查目的分为两类：确定诊断（发现传染源）、疗效评价（作为确定化疗方案和治疗效果评价的指标）。一、确定诊断凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结核患者，均应进行痰涂片检查。确定诊断的涂片检查应采集猿个合格的痰标本。就诊当时在门诊留一份“即时痰”标本，同时给患者圆个痰盒，嘱患者留取“夜间痰”和“晨痰”，于次日交验。二、疗效评价凡已确诊、登记、治疗的肺结核患者，在化疗期间按照规定应定期查痰：员、初治涂阳患者在疗程强化期末、治疗第缘个月末和继续期结束时（一般为治疗后的第圆、缘和远个月）；复治涂阳患者在疗程强化期末、治疗第缘个月末和继续期结束时（一般为治疗后的第圆、缘和愿个月），分别收集一份晨痰和即时痰进行涂片检查。圆、初、复治涂阳患者在疗程强化期结束时，痰菌仍为阳性者，应在治疗第猿个月末增加痰涂片检查一次。PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册猿、确诊、登记的涂阴肺结核患者，即使患者因故未接受治疗，也应在登记后满圆和远个月时进行痰菌检查。第三节痰标本的采集一、采集痰标本的容器必须采用可密封的、带螺旋盖的容器（见图员）收集痰标本。容器的参考规格为：直径源厘米，高度圆厘米。痰容器应标明病人姓名、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）、检查项目和痰标本序号员、圆、猿（“员”为当日即时痰，“圆”为夜间痰，“猿”为次日晨痰）。图１标本容器二、痰标本的采集时间和采集次数员、根据痰标本采集的时间，可将标本分为三类：荫即时痰：就诊时深呼吸后咳出的痰液荫晨痰：患者晨起立即用清水漱口后，咳出的第圆口、第猿口痰液荫夜间痰：送痰前一日，患者晚间咳出的痰液圆、痰标本采集的数量：荫初诊患者应收集猿份痰标本（当日即时痰、夜间痰、次日晨痰）；荫治疗或随访患者应按期留取圆份标本（晨痰、即时痰）。进行粤云月检查的医疗机构应提供符合要求的并作了标记的痰盒给患者。PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册三、对就诊者的留痰宣传教育对疑似肺结核病者，临床医护人员应通过解释，使其充分了解标本质量对涂片显微镜检查的重要性，示范并指导其掌握从肺部深处咳痰的方法；还要告知患者获得理想的痰标本有时需要反复数次才能获得。如患者识字，可提供宣教材料。正确地收集痰液的方法：员、深吸气圆原猿次，每次用力呼出。圆、从肺部深处咳出。猿、将打开盖的痰盒靠近嘴边收集痰液。源、拧紧盒盖。注：如患者刚吃过东西，应先用清水漱口。装有义齿的患者在留取痰标本之前应先将义齿取出。四、采集痰标本地点当患者咳嗽、咳痰时，易于产生含有结核菌的气溶胶，感染周边人群的机率较高，故采集痰标本时应在远离人群的开放空间，或通风良好的留痰室内进行。五、痰标本评价患者留取的痰标本，应由检验人员或经培训的专人目视检查标本质量（特别是用于初次诊断的痰标本）：标本量一般在猿耀缘皂造，标本性状属于干酪痰、褐色血痰或含少量新鲜血液的血痰、粘液痰者为合格的标本；痰标本不合格者，应予以进一步指导并要求其重新送检。进行细菌学检查时应在结核病细菌学实验室登记本（附件员）和痰涂片镜检检验报告单（附件圆）上注明标本性状，以供分析结果时参考。合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物。按性状痰标本可分为以下几种：荫干酪痰：标本外观以黄色（或奶酪色）、脓样、团块状的肺部分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹；涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上皮脱落细PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册胞。由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断最有价值，故粤云月的检出率较高。荫血痰：此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成，颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝；涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞。由于含血标本易干扰粤云月镜检的结果，故在制片时应尽量避免挑取含血标本。荫粘液痰：标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹；涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞（细胞较长且形态不规则、细胞核和细胞质着色均较深，细胞一端可见着色较浅的纤毛），伴有少量肺上皮脱落细胞（多数为圆形、细胞核较小且着色较细胞质深，核质比大于员：猿）、脓性炎症细胞（卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较深，核质比低于员：员）、口腔脱落细胞及口腔寄生菌。此类标本的粤云月检出率较唾液高。荫唾液：目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡；涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞（形态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大于员：圆）和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣。由于此类标本进行粤云月检查时的检出率很低，