抗体筛选和鉴定

输血前实验室检查与质量控制广州血液中心临床输血研究所罗广平输血前检查的目的选择用于患者的血液或血液制品，使输入的成分能在受者体内有效存活，无不良反应。要求输入的红细胞在受者体内必须不凝集和不溶血，输入的血浆不导致患者自身红细胞显著破坏。输血前的血型血清学试验包括:ABO血型正反定型Rh（D）定型抗体筛检和鉴定交叉配合试验输血前检查的主要程序患者的病史和标本等的检查核对及处理ABO和Rh(D)定型抗体筛选和鉴定交叉配血试验已配合血液的标签与发出一、病人的病史和标本等的检查核对及处理1．病史资料和信息输血前检查强调输血科(血库)工作人员应仔细阅读输血申请单。检查前应尽可能了解，核对病人的有关资料，包括病人的姓名，年龄，床号、住院号及唯一性标识码，性别，种族，临床诊断，输血史，药物史，妊娠史。凡资料填写不全的输血申请单要退回临床科室补充，不得迁就，也不能通过电话修改。一、病人的病史和标本等的检查核对及处理1．病史资料和信息如果病人以前有过试验，则要注意核查病人以前检查的血清学试验记录及以往输血反应的记录等。把以前的ABO、Rh血型和抗体检测的解释同现在的解释及任何异常情况的解答进行比较。如既往曾经检出某种血型抗体，即使目前该抗体检测阴性，也应选择无相关抗原的血液输注。一、病人的病史和标本等的检查核对及处理2．标本的要求:标本必须有正确的标签。如果标本标签上的内容与血液申请单上的内容不一致或对病人身份确认有疑问的话，必须重抽一份新的血液标本，任何人不得对错误的标签进行修改。所用血标本能代表患者当前的免疫学状态。输血前检查的各项试验必须使用3天内采集的血标本，反复输血的患者更应注意抽取新的标本作配血试验，避免因回忆反应而产生的抗体漏检。输血后所有的标本均应妥善保存于2~8℃冰箱中，至少一周。二、ABO和Rh(D)定型各血型系中，以A、B抗原性最强，Rh（D）抗原次之，当受者接受了所缺少的A、B抗原后，几乎每个人都会产生特异性同种抗体。大约有2/3的Rh(D)阴性的人，接受Rh(D)阳性血液后可产生抗D抗体。经一次妊娠Rh(+)的胎儿后，大约7%的Rh(-)妇女在6个月内血清学可测到抗D。三、抗体筛选和鉴定目的是发现有临床意义的不规则抗体，献血者血清最好也作不规则抗体筛选，如发现有不规则抗体就将它排除，不可用于输血，特别是大量输血时，为了避免输入血液相互间的反应，对献血者进行抗体筛选具有重大价值。三、抗体筛选和鉴定抗体筛选试验意义：欧美等发达国家的血库已将抗体筛选试验列为输血前检验的常规项目，在交叉配血试验前完成或同时进行。当抗体筛选试验为阴性，且以往的记录未检出有临床意义的抗体时，可用盐水法快速配血，确认ABO血型相容即可输血。如抗体筛选试验阳性，应进一步作抗体鉴定，根据所鉴定出的抗体特异性事先选择缺乏对应抗原的献血者血液配血，以缩短寻找合适血源及配血时间。三、抗体筛选和鉴定常使的试验方法有盐水介质试验法、低离子强度介质法（LISS）、酶技术、抗球蛋白试验、Polybrene及其改良法、微柱凝胶技术等等，可按抗体的血清学行为和试验的具体条件选择，但必须做抗球蛋白试验确证。四、交叉配血试验交叉配血试验也称配合性试验，实际上是检查不配合性，使病人，献血者血液之间没有可测到的不相配合的抗原，抗体成份。交叉配血应在37℃孵育，除作盐水介质法配血外，还应选用酶法、抗球蛋白试验法、Polybrene或其改良法等能有效检出不完全抗体的配血方法。交叉配血的主要作用（1）大多数情况下能证实献血者的红细胞与病人的ABO血型是配合的。（2）能检查出存在于病人血清中的针对献血者红细胞的大多数抗体。（3）有无工作上的差错事故（如认错病人，拿错血袋等）。交叉配血的作用仍有许多局限性，还不能解决如下几个问题：（1）保证输入的红细胞有正常存活率。（2）防止病人的免疫作用。（3）从病人的血清中检出所有红细胞抗体。（4）防止由于针对献血者抗原而发生的记忆性抗体应答引起的迟延性溶血性反应。病人以前就有此种抗体但未能查出这种免疫作用。患者用血选择用血申请单一定要注明输血的理由，以便血库技术人员能选择最合适的血液进行配合性试验，患者输注的血液必须认真地加以选择，以适应每个不同患者的要求（原则是ABO、Rh(D)同型或相容性输血）。按照库存血“先入先出”的管理原则，一般来说，首先用较陈的血，但有以下情况属于例外：1．患者接受大量的血液（超过其自身的总血量）需要供给最新鲜的血液。2．患者本身血容量小，但又需接受大量的血液，如新生儿换血或任何不到5岁的患者输血，都应当给予尽量新鲜的血液。3．超过5岁的患者为了纠正贫血要求输血，可以给予浓缩红细胞。接受定期输血的患者，如镰状细胞性贫血、地中海贫血等患者，需选择不超过7天的相对新鲜的血液，这样做会使输血间隔期延长一些。4．患者当前检出或既往曾检出某种血型特异性抗体，则需选择该抗体对应抗原阴性的血液配血，例如：患者检出抗E，则需选择ABO血型与患者同型或相容且Rh血型E抗原阴性之血液配血。又例如：患者既往曾检出有抗Jka抗体，尽管随着时间的延长该抗体水平下降，当前已不能检出该抗体，但为患者选择血液时仍需选择ABO血型与患者同型或相容且Kidd血型Jka抗原阴性之血液配血，只有这样才能避免因回忆反应产生的抗Jka导致迟发性溶血性输血反应。配血试验的内容包括：（1）病人血清对供者红细胞检测对供者红细胞起反应的抗体，一般称为“主侧”配血。（2）病人红细胞对供者血清检测对受者红细胞起反应的抗体，一般称为“次侧”配血。（3）病人血清对病人红细胞称为“自身对照”试验。目的是显示或排除自身抗体，直接抗球蛋白试验阳性及红细胞串钱状假阳性的存在。常用的配血方法酶技术配血方法低离子强度凝聚胺（Polybrene）交叉配血法血型抗体快速反应介质交叉配血法（Polybrene一步法）抗球蛋白配血法微柱凝胶试验配血法五、已配合血液的标签与发出配血试验显示供、受者血液配合，则应该有一种标志表明该血可以输给该患者。最好是使用配血标签，标签可以用某种方式附在血袋上。在配血单上，需写清楚病人的姓名，床号，ABO及Rh血型，医院名称，献血者编号，交叉配血试验结果的解释，发出血液内容的名称，日期和时间，以及工作人员的姓名。反复核对输血申请单，配血报告单和血液的标签，正确无误后，将血液或血液制品及时发出。配血标签样例本血液与以下患者配合患者姓名：患者住院号：患者标识码：患者床号：血型：效期：配血日期：签名：如不使用请交还血库输血实验室室内质控血型室内质控的内容设备仪器；离心机、冰箱、孵育箱、加样器…试剂：定型血清、细胞、其它试剂…实验；实验的选择、对照、环境对结果的影响实验室相关文件；操作规范、登记、记录、报告与复核体系人员培训；设备仪器离心机；（1）并未规定必须用何种离心机，但建议用血库专用离心机（2）离心力≠离心转速；标准的离心力900~1000g（3）离心时间；定型、各类判读结果的试验15秒；各类洗涤细胞的试验60秒（4）校正频率；每六个月一次离心对血型鉴定的重要性离心力过高，易形成亚型判断失误或假阳性离心力过低，是形成亚型判断失误或假阴性A1AintA2A3AmAxAyAmosAwAbantuAFinnAel4+3+1+~±0血库试剂试剂抗血清抗-A,抗-B,抗-AB,抗-D其他血型试剂抗人球蛋白血清试剂红细胞A细胞,B细胞筛选细胞(O1,O2)抗体筛选谱细胞Coombs质控细胞(IgG-致敏细胞)增效剂如.Liss,LIM选择确认有效的试剂只有通过国家认可的试剂才可使用.仔细阅读供应商应提供所有数据(产品说明书)以证明它们的试剂在特异性和效价方面符合最低标准购买前通过对样本的测试来对试剂的质量进行评估ABO和Rh(D)抗血清的最低标准抗血清试验细胞效价*亲和力(sec)Anti-AA112815A26430A2B6445Anti-BB12815Anti-DR1r1660*无稀释血清与3％相应红细胞抗原在盐水试管法3＋至4＋。用于ABO反定型的试剂红细胞A细胞-与抗A，抗A1反应4＋，与抗B无反应B细胞-与抗B反应4＋，但与抗A，抗A1无反应A细胞&B细胞尽可能不表达M.Lewis，P1抗原抗体筛选细胞2-3份O细胞通常是R1R1&R2R2细胞两份细胞应明确表达的抗原:D,C,c,E,e,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb,S,s,M,N,Mia,P1,Lea,Leb,Dia(尽可能是纯合子)抗体鉴定细胞大于8份O细胞对常规抗体和混合抗体必须有明确的反应格局一组细胞应包括rr,rr’,r”r(r”r’)细胞型和至少包括R2R2表现型至少1至2种细胞为Le(a-b-),K(+),Fya(-),M(-)和Mia(+)和至少2种表现型纯合子Jka,Jkb评估－试剂、技术若该试剂或技术是首次使用，则需增加试验新的试验应在常规工作中试用一周，或至少做五十份标本，包括婴儿贫血，亚型，弱D抗原环境对结果的影响温度：IgM4℃IgG37℃抗A、抗B在37℃条件下反应的活性是4℃时的1/3内部质控品（QCs）的来源合适的诊断样本实验室自制其他来源:–其他实验室–QC计划的提供者商品试剂质控标准红细胞亲和力试验标准血清效价测定试验标准血清亲和力试验配血试剂[凝聚胺等]室内质控血型卡质控日常工作试剂质控试剂质控记录试剂:–最好以表格形式记录全部试剂记录内容批号(是否更换新的批号)效期生产厂商质控结果–通过–不通过失控原因及分析日期及检测者室内质控品抗原(体)谱ABObl.groupreagentsRh(D)bl.guoupreagentsABOr.redcellAntibodyscreeningwithcellsPelicheckABA,BD1D2contr1D+2D+3D-Cell13+3+3+000Serum1001+1+0/1Cell20002+2+0Serum22+2+0/10/10/1Cell3000++K+室内质控记录表评估项目试剂批号效期厂商Anti-AAnti-B……….试剂质控123…….批号变化批号:12345口改变口未改变口改变口未改变…….通过质控质控失控失控原因日期签名ABO/RhD定型质控检测标本时必须设立阳性和阴性对照试验：对照试验的频次取决于工作模式、使用的方法和试剂的使用说明每一批抗-A，抗-B，都必须与A1，B和O细胞有合适的反应能力。每一批试剂反定型红细胞都必须与抗-A，抗-B有合适的反应能力。每批抗-D定型试剂都必须与R1r有合适的阳性反应能力，同时与r’r或rr细胞不凝集。ABO/RhD定型质控AB0/RhD定型试验阳性对照、阴性对照所选用的细胞试剂阳性对照阴性对照抗-AA细胞B细胞抗-BB细胞A细胞抗-DRhD-阳性细胞RhD-阴性细胞A1细胞抗-A抗-BB细胞抗-B抗-A不规则抗体筛选质量控制检测过程中必须开展室内质量控制，检测当天至少做1次室内质量控制。推荐使用具有弱抗体或具有弱阳性直接抗球蛋白试验（DAT）结果的红细胞作为质控品，来评价实验室是否能检出弱凝集。实验室必须至少参加一项由加国家有关部门认可或得到认证的机构组织的室间质量评价活动。输血实验室室间质控--------室间质量评价（EQA）简介:–在实验室质量管理中,意义重大而受到密切关注,是实验室质量保证的重要组成部分–EQA是多家实验室分析同一标本并由外部独立机构收集和反馈实验室上报结果来评价实验室操作的过程–EQA也被称作能力验证,是通过实验室间的比对判定实验室的校准/检测能力的活动室间质量评价（EQA）室间质评的目的和作用一．识别实验室间的差异,评价实验室的检测能力二．识别问题并采取相应的改进措施三．改进分析能力和实验方法四．确定重点投入和培训需求五．实验室质量的客观证据六．支持实验室认可七．增加实验室用户的信心八．实验室质量保证的外部监督工具要求:实验室必须至少参加一项由国家有关部门认可或