搜索
学习目标：1、说出动物细胞融合原理、过程和方法2、单克隆抗体的原理和应用重点和难点：1.动物细胞融合的过程2.单克隆抗体的制备和应用2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞与植物细胞的差别：•无细胞壁•全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：不需去除细胞壁不能发育成新的动物个体一、动物细胞融合（细胞杂交）P521、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5、动物细胞融合过程动物细胞融合杂种细胞愈伤组织杂种植株植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B植物体细胞杂交去壁融合组培不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂5、动物细胞融合过程6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、生物方法获得部分或完整植株主要用于制备单克隆抗体提问？1.抗体是由何种细胞产生的？效应B细胞（浆细胞）。2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.简述获得抗体的传统途径？抗原动物体抗体抗原不纯抗体不纯二、单克隆抗体（单个细胞分裂产生的细胞群体分泌抗体）刺激浆细胞体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？4.这种方法获得的抗体有什么缺陷？产量低，纯度低，特异性差一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，但是不能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生抗体设计方案：动物细胞融合技术杂交瘤细胞动物细胞培养技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能够得到大量的单一抗体。效应B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养2、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高产生相应的B淋巴细胞2.诱导其融合的方法有哪些？3.融合后培养液中有几种细胞?4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点?原因？1.注射抗原的目的是什么?5.大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法?产生相应的B淋巴细胞选择培养基既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体具有双亲细胞的遗传物质培养液中或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取(2)、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养基第一次筛选杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养专一抗体检测第二次筛选相应杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体(3).单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞灭活病毒杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞A2..动物细胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服远缘杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新品种D.生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞BD4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是------（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D