药物的鉴别

第三章药物的鉴别1、掌握性状、化学鉴别法、仪器鉴别法等常用药物的鉴别方法，了解药物鉴别的目的和特点。2、掌握一般药物的鉴别试验方法。学习目标是根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学、仪器分析等方法来判断药物的真伪。药物鉴别试验（identificationtest）第一节常用的鉴别方法（一）鉴别目的：仅适用于鉴别药物的真伪（二）鉴别特点1.为已知药物的确证试验2.鉴别试验是个别分析，而不是系统分析3.对药物制剂进行鉴别时，要注意消除制剂中辅料的干扰一、药物鉴别的目的和特点二、性状外观、溶解度和物理常数1．外观指药物的聚集状态、晶型、色泽及臭、味等性质。2．溶解度是药物的一种物理性质，在一定程度上反映了药品的纯度。3．物理常数具有鉴别意义，也反映该药品的纯净程度。•比旋度在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度称为比旋度。•吸收系数在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。酸值酸值系指中和脂肪、脂肪油或其他类似物质1g中含有的游离脂肪酸所需氢氧化钾的重量(mg)。碘值系指脂肪、脂肪油或其他类似物质100g，当充分卤化时所需的碘量(g)皂化值系指中和并皂化脂肪、脂肪油或其他类似物质1g中含有的游离酸类和酯类所需氢氧化钾的重量（mg）。酸值说明供试品中游离脂肪酸的多少，酸值高质量差，也可以看出酸败的程度。碘值说明油中不饱和键的多少，碘值高，则不饱和键多，油易氧化，不适合注射用。皂化值表示油中游离脂肪酸和结合成酯的脂肪酸的总量多少，可看出油的种类和纯度。三、化学鉴别法化学鉴别法是根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应生成不同颜色，不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光，从而做出定性分析结论的方法。呈色反应沉淀生成反应生成气体反应生成荧光反应褪色反应生成衍生物测定熔点呈色反应指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。1)三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生酚羟基；2)异羟肟酸铁反应---多为芳酸及其酯类、酰胺类；3)茚三酮呈色反应---脂肪氨基；4)重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基或能产生芳伯氨基；5)氧化还原显色反应及其它颜色反应。最为常用的反应类型沉淀生成反应１）与重金属离子的沉淀反应在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐；3）其它沉淀反应。生成气体反应1)大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；2)化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；3)含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。褪色反应具有不饱和键与高锰酸钾或溴水反应，如司可巴比妥钠。氧化还原反应，如碘液等。生成荧光反应常用的荧光发射形式有以下类型：1）药物本身可在可见光下发射荧光；2）药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。生成衍生物测定熔点利用甾醇、甾酮类药物与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨基脲或水解甾体生成相应母体，测定熔点。四、仪器鉴别法定义：是以物质的物理和物理化学性质为基础的分析方法，需要特殊仪器。具有灵敏度高、信息量大等特点。（一）光谱法1.紫外－可见光谱鉴别法对比吸收曲线一致性对比最大吸收波长和同时测定最小吸收波长的一致性规定一定浓度的供试品在最大吸收波长处的吸收度规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收度比值法经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性2．红外光谱鉴别法按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，标准图谱对比，峰位、峰形、相对强度一致时，即为同一药物。试样制备方法有压片法、糊法、膜法和溶液法等方法。如压片法如下：取供试品约1mg，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约200mg，充分研磨，移置于直径为13mm的压模中，使铺布均匀，压模与真空泵相连，抽气约2min后，加压至0.8～1GPa，保持2～5min，除去真空，取出制成的供试片，用目视检查应均匀，无明显颗粒。将供试片置于供试品的样品光路中，并扣除用同法制成的空白溴化钾或氯化钾片的背景，录制光谱图。要求空白片的光谱图的基线应大于75%透光率；除去3440cm-1及1630cm-1附近因残留附着水而呈现一定的吸收峰外，其他区域不应出现大于基线3%透光率的吸收谱带。（二）色谱鉴别法同一种药物在同样条件下的薄层色谱行为是相同的，依次可以鉴别药物及其制剂的真伪。用同种溶剂配成同样浓度的溶液，在同一薄层板上点样、展开、显色，供试品所显主斑点的颜色，位置应与对照品的主斑点相同，以此来验证药品的真伪。1.薄层色谱法此法是色谱鉴别方法中常用的方法，一般采用对照品(或标准品)比较法，要求供试品斑点Rf值应与对照品的一致。例如丙酸睾酮注射液的鉴别方法为：取本品适量（约相当于丙酸睾酮10mg），加无水乙醇10ml，强力振摇，置冰浴中放置使分层，取上层乙醇溶液，置离心管中离心，取上清液作为供试品溶液；另取丙酸睾酮对照品，加无水乙醇制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10µl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以二氯甲烷－甲醇（19:0.5）为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。供试品溶液所显主斑点的颜色和位置应与对照品溶液的主斑点相同。2.高效液相色谱法和气相色谱法（三）熔点测定鉴别法例如苯丙酸诺龙的鉴别方法为：取本品50mg，加甲醇2ml溶解后，加盐酸氨基脲试液4ml，加热回流30min，置水浴上浓缩，放冷，滤过；沉淀用甲醇洗涤数次，再用水洗净后，在105℃干燥，依法测定，熔点为178～185℃，熔融同时分解。基本要求掌握一般鉴别试验的原理。熟悉一般鉴别试验的基本方法。了解一般鉴别试验的条件和灵敏度。第二节一般鉴别试验鉴别试验一般鉴别试验分为专属鉴别试验一般鉴别试验是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别的真伪。专属鉴别试验是证实某一种药物的依据，它是根据每种药物化学结构差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。鉴别原理苯巴比妥及其钠盐、司可巴比妥、异戊巴比妥及其钠盐等原料药及其制剂的分子结构中均以丙二酰脲为母体，都能在弱碱性溶液中与硝酸银作用生成二银盐的白色沉淀；也能与铜吡啶试液作用显紫色。一、丙二酰脲类鉴别方法(1)取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。(2)取供试品约50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml,即显紫色或生成紫色沉淀NHNOOR1R2ONaNNOOR1R2ONaAg+AgNO3+Na2CO3++NaHCO3NaNO3NNOOR1R2ONaAgNNOOR1R2OAgAgAgNO3++NaNO3（1）与银盐反应（2）与铜盐反应NHNOOR1R2OHNHNHOOR1R2ONHNOOR1R2O+-H+NNNHNOOR1R2ONNNNHOOR2R1ONHNOOR1R2O+2+Cu-2Cu二、有机氟化物反应原理地塞米松磷酸钠及其注射液，醋酸曲安奈德及其注射液、诺氟沙星、醋酸氟轻松、醋酸氟轻可的松等药物都含有氟，将有机氟转化无机氟离子，用氧瓶燃烧法进行破坏，用水或碱性溶液吸收成无机氟化物，与茜素氟蓝、硝酸亚铈在PH4.3溶液中形成蓝紫色络合物。取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法（附录ⅦC）进行有机破坏，用水20ml与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，待燃烧完毕后，充分振摇，取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12％醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml,即显蓝紫色；同时做空白对照试验。鉴别方法OOOHF-+OHCH2NCH2COOHCH2COOH+Ce3+pH4.3茜素氟蓝OOOHFCH2NCH2COOCH2COOCeOOH蓝紫色三、托烷类生物碱类反应原理氢溴酸山莨菪碱及其片剂、注射液，氢溴酸东莨菪碱及其片剂、注射液，丁溴酸东莨菪碱及其注射液、胶囊、硫酸阿托品及其片剂、注射液，盐酸消旋山莨菪碱注射液等药物的分子结构，都是由莨菪烷衍生物（又称托烷衍生物）与莨菪酸生成的酯，称为托烷生物碱类。它们分子结构中都含有莨菪酸的结构，与发烟硝酸共热，即得黄色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷却后，加醇制氢氧化钾少许，即显深紫色。鉴别方法取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，即得黄色的残渣，放冷，加乙醇2～3滴，加固体氢氧化钾一小颗粒，即显深紫色。COOHCHCH2OH莨菪酸+3HNO3COOHCHCH2OH+NO2NO2O2NH2O3COOHCHCH2OH+NO2NO2O2NH2OKOHNOOKNO2O2NCHCH2OHCO2++深紫色四、芳香第一胺类鉴别原理对乙酰氨基酚、磺胺嘧啶、盐酸普鲁卡因及其注射液等芳香第一胺药物或水解后，能还原生成芳香第一胺类的药物均可与亚硝酸钠发生重氮化反应，生成的重氮盐与碱性β-萘酚形成偶氮染料。鉴别方法取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β－萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。NH2+NaNO2+HClNNCl+NaCl+H2O2NNClOH+OHN=N+NaCl+H2ORRRRNaOH2五、钠盐、钾盐1.测定原理钠的火焰光谱的主要谱线有589.0nm、589.6nm，故显黄色。钾盐的火焰光谱的主要谱线有766.49nm、769.90nm等，由于人眼在此波长附近敏感度较差，故显紫色。如有钠盐混存，因钠盐灵敏度很高，遮盖了钾盐的紫色，需透过蓝色钴玻璃将钠焰的黄色滤去，此时火焰显粉红色。2.鉴别方法钠盐：（1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。（2）取供试品的中性溶液，加醋酸氧铀锌试液，即生成黄色沉淀。钾盐：（1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显紫色；但有少量的钠盐混存时，须隔蓝色玻璃透视，方能辨认。（2）取供试品，加热炽灼除去可能杂有的铵盐，放冷后，加水溶解，再加0.1％四苯硼钠溶液与醋酸，即生成白色沉淀。六、铁盐亚铁盐1．亚铁盐(1)取供试品溶液，加铁氰化钾试液，即生成深蓝色沉淀；分离，沉淀在稀盐酸中不溶，但加氢氧化钠试液，即分解成棕色沉淀。(2)取供试品溶液，加1％邻二氮菲的乙醇溶液数滴，即显深红色。2．铁盐(1)取供试品溶液，加亚铁氰化钾试液，即生成深蓝色沉淀；分离，沉淀在稀盐酸中不溶，但加氢氧化钠试液，即分解成棕色沉淀。(2)取供试品溶液，加硫氰酸铵试液，即显血红色。七、硫酸盐、亚硫酸盐或亚硫酸氢盐1．硫酸盐（1）取供试品溶液，加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。（2）取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。（3）取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别)。2．亚硫酸盐或亚硫酸氢盐（1）取供试品，加盐酸，即发生二氧化硫的气体，有刺激性特臭，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。（2）取供试品溶液，滴加碘试液，碘的颜色即消褪八、醋酸盐、硝酸盐、磷酸盐1．醋酸盐（1）取供试品，加硫酸和乙醇后，加热，即分解发生醋酸乙酯的香气。（2）取供试品的中性溶液，加三氯化铁试液1滴,溶液呈深红色，加稀无机酸，红色即褪去。2．硝酸盐（1）取供试品溶液，置试管中