药理学实验的基础知识

1第一章药理学实验的基础知识一、药理学实验课的目的和要求药理学实验课的目的在于通过实验，使学生掌握进行药理学实验的基本方法，了解获得药理学知识的科学途径，验证药理学中的重要基本理论，更牢固地掌握药理学的基本概念。在实验课中还应培养学生科学工作的严肃的态度、严格的要求、严密的工作方法和实事求是的作风，并初步具备客观地对事物进行观察、比较、分析、综合和解决实际问题的能力。为了达到上述目的，要求做到下列事项：实验前（1）仔细阅读实验指导，了解实验目的、要求、方法和操作步骤，领会其设计原理；（2）结合实验内容，复习有关药理学和生理学、生化学等方面理论知识达到充分理解；（3）估计实验中可能出现的情况和发生的问题。实验中（1）将实验器材妥善安排，正确装置；（2）严格按照实验指导书上的步骤进行操作，准确计算给药量，防止出现差错意外；（3）认真、细致地观察实验过程中出现的现象，随时记录药物反应的出时间、表现以及最后转归，联系课堂讲授内容进行思考；（4）注意节约实验材料。实验后（1）整理实验结果，经过分析思考，写出实验报告，按时交给指导教师；（2）整理实验器材，洗净擦干，妥为安放。将存活和死亡动物分别送至指定处所。做好实验室的清洁卫生工作。二、实验动物的捉持和给药法实验1.1蛙和蟾蜍的捉持和给药法[目的]学习蛙和蟾蜍的捉持和淋巴囊给药法。[材料]蛙或蟾蜍；注射器、针头、生理盐水。[方法]1.捉持法通常以左手握持，用食指和中指夹住左前肢，用拇指压住右前肢，将下肢拉直，用无名指及小指夹住。2.淋巴囊内注射法蛙及蟾蜍皮下有多个淋巴囊，注入药物后易于吸收。通常将药物注射于胸、腹或股淋巴囊。蛙及蟾蜍的皮肤很薄，缺乏弹性，注射后药物易自针眼漏出，故作2胸部淋巴囊注射时应将针头插入口腔，由口腔底部穿过下颌肌层而达胸部皮下；作股淋巴囊注射时，应由小腿皮肤剌入，通过膝关节而达大腿部皮下。这样才可避免药液外漏。注入药液量一般为0.25ml∽0.50ml试以生理盐水作胸淋巴囊和股淋巴囊注射练习。3实验1.2小鼠的捉持和给药法[目的]学习小鼠的捉持和各种给药法。[材料]小鼠3∽4只；鼠笼、天平、注射器、针头、灌胃针头、小鼠尾静脉注射用固定筒、生理盐水。[方法]１.捉持法以右手提鼠尾，将小鼠放于鼠笼或其它粗糙面上，将鼠尾向后轻拉，使小鼠固定在粗糙面上，以左手的拇指及屈成“V”状的食指捏其双耳及头颈部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤和尾部，这样便可将小鼠完全固定，并可保持头颈部平直。2.灌胃法以左手捉持小鼠，使其头部朝上，颈部拉直。右手持配有灌胃针头（以16号输血针头磨去针尖后制成）的注射器，自口角插入口腔，再从舌面紧沿上腭进入食道。如手法正确，不难成功。若遇阻力，应退出后再插，不能用力强插，以免刺破食道或误入气管，使动物致死。灌胃的药液量一般为0.1∽0.3ml/10g。试以生理盐水作灌胃练习。3.皮下注射可由两人合作。一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾。另一人左手捏起背部皮肤，右手持注射器（5号或6号针头），将针头刺入背部皮下。如由一人操作，可按前法捉持小鼠，右手持注射器，针尖从右侧肋缘上穿入皮下，向前推至右前肢腋下部位，将药液推入即可。小鼠皮下注射的药液量一般为0.05∽0.2ml/10g。试以生理盐水进行练习。4．肌内注射可由两人合作。一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾。另一人持注射器（4号或5号针头），将针头刺入后肢外侧部肌肉。如一人单独操作，以左手拇指和食指抓住小鼠头部皮肤，小指、无名指和掌部夹住鼠尾及一侧后肢，右手持注射器刺入后肢肌肉给药。注射器每腿不宜超过0.1ml。试以生理盐水进行练习。5．腹腔注射以左手抓住小鼠，使腹部在上面，头部下倾，右手持注射器（5号或6号针头），取30度角将针头从一侧下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜太高，刺入不能太深，以免伤及内脏。注射量一般为0.1∽0.2ml/10g。试以生理盐水进行练习。6．尾静脉注射将小鼠置特制的固定筒内（或倒置的大漏斗、乳钵下），使鼠尾露出在外。用酒精（或二甲苯）棉球涂擦尾部，或将鼠尾在50℃热水中浸泡半分钟，使血管扩张。用左手拉住尾尖，从左右两侧尾静脉中，选择一条扩张最明显的尾静脉，右手持注射器（4号针头），将针头刺入血管，推入药液。如推注时有阻力，且局部肿胀变白，表明针头没有刺入血管，应拨出后重新穿刺。穿刺血管时宜从鼠尾末端开始，以便失败后可在第一次穿刺点的近心端重新进行。小鼠尾静脉注射的药液量一般为0.1∽0.2ml/10g。试以生理盐水作尾静脉注射练习。45实验1.3家兔的捉持和给药法[目的]学习家兔的捉持和各种给药法。[材料]家兔1∽2只；兔固定箱、兔开口器、磅称、导尿管、注射器、生理盐水[方法]1．捉持法用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。2．灌胃需由两人合作进行。一人取坐位，用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢，另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头，并固定之。取8号导尿管，从开口器中部小孔插入食道，深约15∽18cm。插管时易误入气管。区别方法主要在于谨慎观察插管后动物的反应。插入气管时将引起剧烈挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示已误入气管内，此时应拨出重插。在判明导尿管确定插在食道内以后，取注射器接在导尿管上，将药液推入。再推注少量空气，使导尿管中不致有药液残留。然后抽出导尿管，取出开口器。如用兔固定箱，亦可一人操作。左手将开口器固定于兔口内，右手将导尿管插入食道。家兔灌胃给药时的药液容量一般为5∽20ml/kg。试以生理盐水进行练习。3．皮下、肌内及腹腔注射给药方法基本上同小白鼠，唯针头可稍大（6号或7号），给药量可稍多（皮下与肌内0.5∽1.0ml/kg，腹腔1.0∽5.0ml/kg）。4．静脉注射将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖，以食指垫在兔耳拟进针部位的下面，右手持注射器（6号），从近耳尖处将针头刺入血管。如见到针头确在血管内，即以左手将针头固定在兔耳上，将药液推入。推注时如有阻力，局部出现肿胀，表明针头不在血管内，应立即拨针重新穿刺。家兔的静脉注射量，一般药液为0.2∽2.0ml/kg，等渗药液可达10ml/kg。试以生理盐水进行练习。6附：其他动物的给药法大鼠的捉持和给药法捉持法将大鼠放于粗糙面上，用右手拉其尾部，左手戴保护手套，以拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背部腹部。对于身体特大或凶狠易咬人的大鼠，可先以布巾包裹全身（露出口、鼻），然后进行操作。给药法大鼠的各种给药法基本上同小鼠，唯所用的给药工具可稍大，给药量也可稍多。豚鼠的捉持和给药法捉持法豚鼠性温和，一般不咬人，用手握住身体即可。皮下、肌内及腹腔注射方法基本上同小鼠，给药量可稍多。静脉注射可选用后脚掌外侧的静脉或外颈静脉进行注射。作后脚掌外侧静脉注射时，可由一人捉豚鼠并固定一条后腿，另一人剪去注射部位的毛，用酒精棉球涂擦后脚掌外侧的皮肤使血管显露，再将连在注射器上的小儿头皮静脉输液针头刺入血管。作外颈静脉注射时需先剪去一点皮肤，使血管暴露，然后将连在注射器上的小儿头皮静脉输液针头刺入。豚鼠的静脉管壁脆弱易破，操作时需特别小心。猫的给药法皮下、肌内及腹腔注射方法基本上同家兔。给性情暴躁的猫注射麻醉药时，可先将猫装在布袋内，然后逐渐收缩布袋，将猫推到袋角，按住头部和躯体，隔着布层作腹腔内注射。狗的给药法给药前处置对于未经驯服的狗，需先以特制铁钳夹住颈部，将其按倒，以绳索捆扎狗嘴，然后才可作给药操作。但是对于已经驯养，用于慢性实验的狗，切不可用铁钳夹颈。7否则狗的性情将由此变得暴躁而难以操作。灌胃、皮下、肌内和腹腔注射方法上基本上同家兔，用具和给药量应相应增大。静脉注射常用的注射部位是后肢小隐静脉，该血管由外踝前侧走向外上侧。也可选用前肢的皮下头静脉，该血管在脚爪上方背侧的正前位。注射时先局部剪毛，以酒精涂擦皮肤，一人捏紧注射肢体的上端，阻断血液回流，使静脉充盈，以便看清其走向，另一人持注射器进行静脉穿刺，将药液注入。8三、实验动物的性别鉴别、编号和处死法(一)实验动物的性别鉴别1．小鼠和大鼠两性的区别要点有三：雄鼠可见阴囊，站位时阴囊内睾丸下垂，热天尤为明显，成熟雌鼠的腹部可见乳头；雄鼠的尿道口与肛门距离较远，雌鼠的阴道口与肛门比较靠近；肛门和生殖器间有沟的为雌鼠，无沟的为雄鼠。2．豚鼠与小鼠和大鼠基本相同。3．兔雄兔可见阴囊，两侧各有一个睾丸；用拇指和食指按压生殖器部位，雄兔可露出阴茎；雌兔的腹部可见乳头。4．其它较大动物，性别特点明显，不难辨认。(二)实验动物的编号较大的动物如猫、狗、猴等，可用号码牌挂在动物颈部，或将特制的铝质标牌固定在耳壳上。小鼠、大鼠及家兔一般用1%苦味酸溶液（以稀醇配制）涂于体表不同部位的毛上。方法不尽相同，以能明显区别为原则。例如1号涂在左前肢，2号涂在左后肢，3号涂右前肢，4号涂右后肢，5号涂头部，6号涂背部，7号涂尾部，8号涂头及背部，9号涂头及尾部，10号不涂色等。(三)实验动物的处死法1．蛙和蟾蜍可以断头处死。也可用探针经枕骨大孔破坏其脑和脊髓。2．小鼠和大鼠也常以断头处死。对于小鼠，还可用颈椎脱臼法处死，即用左手的拇指和食指紧按其头部，右手捉其尾根，向后猛拉，就可使其致死。3．兔、猫及狗静脉注射空气10到30毫升，可使动物因血管气栓而死。静脉注射大剂量戊巴比妥钠等麻醉药，则更可使动物在死前免受痛苦。9四、实验动物给药量的计算在要给动物给药的时侯，常常会遇到两个问题：（1）给予多少剂量才恰当？（2）应配成何种浓度的药液，给予多少毫升才合适？现分述其处理方法。（一）给药剂量的决定药物对于某种动物的适当剂量得自实践经验，不能凭空推算。在我们为了某一目的准备给某种动物用药而需要解决剂量问题时，首先应该查阅该药的有关文献（学报、文摘、手册和专著等），了解前人的经验。如能查到为了同一目的，给相同种类动物用药的记录，那就可以直接照试。有时侯查不到治疗剂量，但能找到致死量（LD50或MLD），可先用1/5∽1/3的致死量进行尝试。如果查不到待试动物的剂量，但知道其它动物的剂量或人用剂量，这就需要加以换算。关于不同种类动物间用药剂量的换算，一般认为不能简单的按体重比例增减，而需按单位体重所占体表面积的比值来换算，其具体方法详见附录五。但换算而得的剂量仍有可能偏大或偏小，也只能当作一个参考值。（二）药液浓度的考虑与给予药液容量的计算决定了给药剂量以后，应该怎样考虑将要配制药液的适当浓度呢？这时侯就应当从在供试动物身上，以某种特定途径给药时的最适给药容量入手，现举例加以说明：例1已知戊巴比妥钠给家兔静脉注射时的适当剂量为25mg/kg，问宜将戊巴比妥钠配成何种浓度的溶液，方便于给药？解：家兔静脉注射时的药液容量以1ml/kg较较恰当。现在即已决定采用25mg/kg的剂量，这就是说每1ml药液中以含戊巴比妥钠25mg为宜。25mg/ml的浓度如用百分浓度表示，就是2.5%。因此当需要给家兔按25mg/kg静脉注射戊巴比妥钠时，宜将药液配成2.5%的浓度。在需要按照预定剂量，利用现成药液给药的时侯，又该怎样计算每个动物应当给予的毫升数呢？现再举例说明：例２盐酸吗啡给小鼠腹腔注射时的剂量为15mg/kg。现有药液的浓度为0.1%,17g体重的小鼠应注射此种药液多少毫升?解：按15mg/kg的剂量计算，17g体重的小白鼠应给药0.255mg，0.1%的药液每100ml含药100mg，即每1ml含药1mg。所以该小鼠应注射盐酸吗啡溶液0.26ml.在某些药理试验中，也按摩尔浓度配制药液，如将1摩尔质量的药物溶于溶剂中，配成1L的溶液（其它浓度依此类推），表示为1mol/L,余类推。10五、实验结果的整理和实验报告的撰写整理实验结果和撰写实验报告就是做完每项实验以后的总结工作。通过良好的总结，可使我们在实验过程中获得的感性认识提高到理性认识，明确已经取得的成果，尚未解决的问题以及工作中的优缺点。实验报告是向他人提供研究经