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新型壳聚糖衍生物作为基因给药系统载体的研究主持人：段文佳成员：朱思艳罗芮刘倩潘晶2015年中国药科大学创新实验中期汇报项目进展情况下阶段计划实验方案实验方案案1.溶解度2.稳定性3.内涵体逃逸功能4.连接主动靶向配基，使载体具有主动靶向性两个方案方案一：以2-氯乙胺盐酸盐为连接物，修饰4-咪唑甲醛于壳聚糖季铵盐的氨基方案二：将4-咪唑甲醛直接修饰于羧甲基壳聚糖的氨基，再通过静电作用结合壳聚糖季铵盐合成方法取代度测定方法实验条件的优化载体合成项目进展情况合成方法+0.5gOCMCS溶于15ml去离子水（溶液1）0.192g4-咪唑甲醛溶于15ml去离子水（溶液2）溶液2逐滴滴入溶液1中（用时20min）加热搅拌反应4h过量无水乙醇提取将提取物过滤、洗涤、干燥用一定量水溶解，257nm下测其吸光度合成方法预实验测得吸光度值为0.427判断此方案可行，紫外分光光度法以去离子水作溶剂，配制适宜浓度的4—咪唑甲醛溶液，以去离子水做空白，在200~400nm范围扫描测定最大波长。4—咪唑甲醛水溶液在257nm处有最大吸收检测波长的选择取代度计算取代度测定方法DS=100*(m1/M1)/((m-m1)/Mcs单元)m1:测得4-咪唑甲醛含量M1:4-咪唑甲醛相对分子质量m:称取偶联物的质量Mcs单元：羧甲基壳聚糖的单元分子量标曲绘制(μg/ml)方程式:y=0.11969x+0.01898R2=0.9989线性范围：0.2~0.71.56μg/ml~6.14μg/ml配比（/OCMCS,mol/mol）124DS8.22%11.59%7.59%反应时间3h4h5hDS3.95%3.30%8.22%25°C35°C45°C55°C取代度11.59%异常11.59%19.09%最佳时间的确定最佳配比的确定最佳温度的确定实验条件的优化实验条件的优化经过实验初步确定在OCMCS：4-咪唑甲醛=1:2、在55摄氏度下反应5小时可得到最大取代度问题温度和时间设置的范围不够宽，最佳时间和最佳温度测定并不准确还需要增加实验确定这两个最佳条件纳米粒的制备QC(mg/ml)CMC(mg/ml)QC/CMC(w/w)kCountsZavePI第1组0.10.11/1323.5231.00.0734第2组0.10.251/1.2349.4196.20.1330第3组0.10.51/1.4388.2185.10.1510第4组0.250.11/1.2381.8265.10.0945第5组0.250.251/1.4266.2246.10.1520第6组0.250.51/1374.8193.00.1100第7组0.50.11/1.4338.5262.60.1320第8组0.50.251/1364.8257.50.1720第9组0.50.51/1.2206.4340.60.1660正交设计法下阶段计划继续优化新型载体的合成条件，测定合成壳聚糖衍生物的理化性质（结构确证、缓冲容量、溶解度等）将连有咪唑基的羧甲基壳聚糖（带负电）和壳聚糖季铵盐（带正电）通过静电力结合，并做成纳米粒载体小组成员合作完成主题为壳聚糖及其衍生物作为基因给药生物载体的研究进展的综述2/14/2020谢谢！