七年制-实验课01-加强免疫

医学免疫学实验付海英[e-mail]免疫学实验课要求•不许迟到、早退，请假必须由系办签字。•不允许擅自窜教室，最后无成绩者后果自负。•穿白大衣。•爱护实验器材（使用后用水冲洗，然后放到指定地点），损坏者按价赔偿。•课后认真打扫教室卫生（擦地面和桌面）。•关掉手机。实验课考核内容及分数分配•实验课总成绩为：20分•分数分配：自讲与讨论5分实验设计5分论文10分LOGO课次自讲内容及讲解时间备注一1.多克隆抗体制备。（15min）讲解内容：技术的分类、原理、检测方法与应用。不讲解：具体实验材料及实验步骤。2.免疫细胞功能检测。（15min）三3.单克隆抗体制备技术。（15min）4.抗原抗体反应检测技术。(15min)四5.酶免疫测定技术。（15min）6.免疫标记技术（不包括酶免疫测定）。（15min）五7.免疫细胞分离技术。（15min）六8.细胞因子检测技术。（15min）9.细胞毒实验。（15min)论文格式一、题目：二、作者、单位：三、摘要：1.中文摘要：目的、方法、结果、结论2.Abstract：Objective，Methods，Results，Conclusion四、关键词：五、正文：1.引言2.材料与方法3.结果4.讨论六、参考文献第一次实验实验内容:1.自讲内容：1）多克隆抗体制备。（15min）2)免疫细胞功能检测。（15min）。2.实验设计（讨论）。3.卵清蛋白(OVA)强化免疫小鼠（学生操作）。免疫学实验课学生自讲评估细则评估细则分值积极参与，注重个性发挥0.5备课充分1.0讲授内容准确、清楚1.0板书(或幻灯)工整、清晰0.5注重联系相关知识0.5熟练运用专业词汇0.5形式多样，启发诱导0.5教态大方，语言文雅、生动0.5总计5.0自学自讲自评内容1.多克隆抗体制备。（15min）2.免疫细胞功能检测。（15min）实验设计提出问题解决问题ABO(H)血型的发现166516671818187519001665166718181875年6份健康的血液：1、2、3、4、5、6分别混合其红细胞和血清KarlLandsteiner（奥地利内科医生）免疫抑制模型的建立免疫抑制模型的建立•WHAT？•WHY？•HOW？•什么是免疫抑制模型？•为什么要建立免疫抑制模型？•怎样建立免疫抑制模型？•怎样判断免疫抑制模型建立是否成功？采用的检验指标检测的技术手段实验设计（讨论）•抗原进入机体可刺激免疫细胞发生何种反应？•体液免疫产生的抗体可通过何种实验方法进行检测？•细胞免疫可用何种实验方法测定？抗原进入机体可刺激免疫细胞发生何种反应？AgAPCTh1TcBAbPMNNKTh2ComplementTargetcellsMHCCKMHCCKCKsCKs•吞噬细胞：吞噬功能•NK：细胞毒试验天然免疫系统细胞功能可通过何种实验方法进行检测？•沉淀反应•凝集反应•免疫标记技术体液免疫产生的抗体可通过何种实验方法进行检测？•淋巴细胞转化试验•细胞毒实验•结核菌素试验细胞免疫可用何实验方法测定？建立系统实验体系免疫抑制模型的建立及其免疫功能检测：取脾/胸腺—检测细胞增殖功能—淋巴细胞转化试验（细胞免疫）取血—测定抗体效价—双向琼脂扩散试验（体液免疫）取血—测定抗体效价—酶联免疫吸附试验（ELISA）（体液免疫）取腹腔液—检测吞噬细胞功能—吞噬实验（天然免疫）OVAMTh1TcBAbTh2抗原进入机体可刺激免疫细胞发生何种反应？MHCCKMHCCKCKsCKs淋巴细胞转化试验双向免疫扩散试验酶联免疫吸附试验吞噬试验免疫抑制组小鼠吞噬细胞功能细胞免疫功能体液免疫功能酶联免疫吸附试验双向免疫扩散试验淋巴细胞转化试验小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验天然免疫功能获得免疫功能对照组小鼠动物模型制备初次免疫：OVA-AL(OH)3（0.4ml/只）Day1CTX：100mg/kgday8、10、12、14NSday8、10、12、14加强免疫：NS（0.4ml/只）day15加强免疫：OVA-AL(OH)3（0.4ml/只）day15免疫功能检测Day22初次免疫：NS（0.4ml/只）day1免疫佐剂•是一些先于抗原或同时与抗原混合注射动物，可增强抗原的免疫原性，即起辅佐抗原作用的物质。•主要佐剂有：*油性乳剂：弗氏佐剂*无机化合物：氢氧化铝*微生物及其产物：细菌内毒素*脂质体*其他：细胞因子等AL(OH)3佐剂的制备1.KAL(SO4)2.12H2O(12g)+蒸馏水（144ml）NaOH（2.4g）+蒸馏水（60ml）2.将上述NaOH溶液缓慢加入KAL(SO4)2溶液中，边加边混匀。3.离心（1500rpm，10min）后去除上清液。4.生理盐水洗涤沉淀2次，去除上清液。5.加生理盐水72ml制成氢氧化铝凝胶佐剂。取等体积的卵清蛋白（OVA，2mg/ml)和氢氧化铝胶体混合。免疫抗原的制备实验操作动物免疫（加强免疫）实验分组及材料•动物：小鼠4只/组对照小鼠:NS-NSOVA-NS免疫抑制小鼠:NS-CTXOVA-CTX•器材：1ml注射器2支/组碘酒、棉签•试剂：1.盐水（NS）6ml/室2.OVA+AL（OH）310ml/室3.5%苦味酸20ml/室分组：每组8人实验步骤注射生理盐水（NS）：先用碘酒消毒小鼠头颈部，然后用1ml注射器吸取生理盐水0.4ml，在头颈部皮下注射生理盐水0.2ml，分3点注射；剩余的0.2ml进行腹腔注射。注射OVA：先用碘酒消毒小鼠头颈部，将(OVA+AL(OH)3)混合物0.4ml吸入1ml注射器中，注射方法同上。注意事项1.避免注射器伤人。2.同一注射器先注射生理盐水，再注射抗原（OVA）。3.注射完毕用棉签蘸取苦味酸给小鼠做好标记，标记方法见后页。4.将注射器盖好针帽，放在指定位置。小鼠标记12345678910实验步骤注射生理盐水（NS）：先用碘酒消毒小鼠头颈部，然后用1ml注射器吸取生理盐水0.4ml，在头颈部皮下注射生理盐水0.2ml，分3点注射；剩余的0.2ml进行腹腔注射。注射OVA：先用碘酒消毒小鼠头颈部，将(OVA+AL(OH)3)混合物0.4ml吸入1ml注射器中，注射方法同上。