近五年丹参生药鉴定和质量评价研究进展定稿

近五年丹参生药鉴定和质量评价研究进展丰睿周凤琴*郭庆梅（山东中医药大学药学院，山东济南250355）摘要：查阅近五年的相关文献，对其进行分类、整理并归纳。对丹参的生药鉴定和质量评价研究概况进行了综述。关键词：丹参；生药鉴定；质量评价；研究进展AreviewonidentificationandqualityevaluationofSaviaemiltiorrhizaradixetrhizomainrecentfiveyearsFENGRui,ZhouFeng-qin*,GUOQing-mei(CollegeofPharmacy,ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250355)Abstract：ThisarticlepresentsareviewonidentificationandqualityevaluationofSalviamiltiorrhizaBge.inrecentfiveyears.byliteratureclassificationorganizeandsummarize.Keywords：Salviaemiltiorrhizaradixetrhizoma；identification；qualityevaluation；review唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎，是历版《中国药典》丹参的唯一来源。丹参是目前心脑血管疾病的首选药材，药材需求量和药材真伪优劣均受到人们的极大关注。但在部分地方药材标准以及民间用药中，同属多种植物亦被混作丹参药用[2]。由于丹参产地广、家种丹参与野生丹参均药用、丹参种质资源不明确，丹参属植物种类多，变异大。种种原因对市售丹参药材的品质鉴定和质量控制均带来一定的影响。不同产地、不同生境、不同来源丹参药材的成———————基金项目：山东省高等学校科技计划项目（项目编号：J09LF03）；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金项目（2006BS03047）作者简介：丰睿（1986-），女，汉族，山东济南人，硕士研究生；Tel：[phone]，Email：[e-mail]；主要从事中药质量与资源研究。*通讯作者：周凤琴（1951-），女，汉族，山东临沂人，教授，博士生导师，长期致力于中药鉴定学、中药商品学和中药资源学的教学与科研工作。Tel：[phone]，Email：[e-mail].分组成以及比例具有较大差异，必然会直接影响临床用药疗效及安全。为了准确鉴别丹参药材以及合理评价丹参药材质量，作者将近五年来丹参生药鉴定以及质量评价的文献进行了综述。1生药研究进展1.1药材性状付桂芳等[3]研究了丹参栽培品、野生品及其不同产地丹参药材的性状特征。其中野生品根茎短粗，根有数条，长圆柱形，表面棕红色或暗棕红色，粗糙，老根紫棕色，常呈鳞片状剥落，断面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕红色，木部灰黄色或紫褐色。栽培品根粗壮，多分枝，表面砖红色或红棕色，具纵皱纹，外皮紧贴不易剥落。质坚实，断面黄白色。其中四川产栽培品根粗壮肥实，少分枝，断面黄褐色，略呈角质样。1.2药材显微野生与栽培丹参横切面有显著差异[3-4]：野生丹参根的周皮细胞层数多、色重；皮层宽，部分产地的样品有石细胞；维管束4~12个，韧皮部与木质部比值大，木质部由直径较大与直径小的导管束相间排列而成。栽培丹参周皮细胞层数少，色淡；一般无石细胞；维管束8~12个，韧皮部与木质部比值小，导管周围有众多木纤维，导管束非大小相间排列；其中四川产栽培丹参维管束多达19~24束，导管稀疏径向排列，木纤维少。王萌等[5]通过横切面比较，发现不同产地丹参显微结构上存在许多共性，但在落皮层的有无、木栓层厚度及木栓化程度、木质部导管多少、孔径大小及排列方式上存在不同程度的差异。与丹参比较，同属近缘种植物根横切面[5]：甘西鼠尾草(S.przewalskii)有落皮层，木栓层相对较厚，次生皮层、韧皮部中偶见红色物质，韧皮部相对较宽，导管成束；峨眉鼠尾草(S.omeiana)形成层不明显，导管数量较少；血盆草(S.cavalerieivar.somplicifolia)有落皮层，皮层窄，仅约占切面的1/9，中央初生木质部主要为纤维束；三叶鼠尾草(S.trijuga)木栓形成层明显，木射线不明显；短唇鼠尾草(S.brevilabra)有落皮层，韧皮部相对较宽；云南鼠尾草(S.yunnanensis)皮层较宽。1.3红外鉴别吴婧[6]采用红外三级宏观指纹分析方法，对6个产地的丹参进行了鉴别。二维相关红外谱图表明，山东、山西、河南和四川丹参谱图相似度较高，浙江、云南丹参二维相关红外谱图最强峰出峰位置及1500～1800cm-1范围的峰数和相对峰强度都具有个体差异，表明所含芳香族化合物种类及含量区别于其它产地。经过对丹参对照药材、丹参酮IIA、丹酚酸B的谱图解析，可找到丹参有效化学成分的特征吸收峰，可作为鉴别丹参药材的依据。丹参二阶导数谱特征吸收为1746、1730、1691、1670cm-1（酮和酸C=O伸缩振动），1610、1580、1543、1509、1489、1453cm-1（芳香族化合物骨架振动）。王凌等[7]采集了来自4个产地（陕西、四川、河南、山东）的40批丹参药材的红外光谱信息，分析后发现其二阶导数谱中某些与丹酚酸B对应的特征峰(组)出现与否可以用作不同产地丹参药材的初步判定依据。原谱1262cm－1峰的吸收峰峰高基本不受其他成分的影响，能反映丹酚酸B含量且与HPLC含量测定结果呈正相关，可以用于丹酚酸B的快速半定量，为中成药生产和投料丹参药材的快速评价提供一种新的备选方法。1.4生物鉴别邓科君等[8]以生物信息学方法对GenBank的dbEST数据库中公开的10288条丹参EST（表达序列标签）进行整理，从中搜索到159个SSR（简单重复序列）位点。针对这些序列，设计开发了83对EST-SSR引物，对13个不同居群丹参样品及10种鼠尾草属物种进行了扩增效率、多态性及通用性检测。发现其中72对引物在供试材料中可进行特异性扩增，共产生279个位点，平均每对引物产生3.88个位点，且所有引物均显示多态性扩增。可有效扩增引物在鼠尾草属10个异源物种中的可转移率为60%～100%，平均85%。依据扩增结果进行遗传相似性分析，结果表明EST-SSR分析可揭示供试样品不同水平的遗传多样性，并将丹参与同属其他植物明确区分。王维婷等[9]采用SRAP分子标记技术对48个不同来源的丹参种质进行了遗传多态性分析，利用筛选后的15对SRAP引物组合从材料中检测到了120个等位位点，聚类分析结果显示，全部样品可分为两大类群，每一类群包含三个亚群。表明不同丹参种群间遗传距离与空间距离之间的关系较为复杂，不同地区间丹参种质的遗传分化不均衡。随着丹参种质驯化程度的增加，种质间的遗传距离有所增加。徐红等[10]采用PAPD和ISSR标记对4个产地的野生丹参、6个产地的栽培丹参共计50个样本进行分析，用筛选的6个RAPD引物与2个ISSR引物进行PCR扩增,共扩增出102条重复性高、清晰的条带，其中多态性条带97条。该结果表明不同产地的丹参供试材料的遗传背景不同，存在丰富的遗传多样性，且多态条带比率与基因多样性指数表现出的变化趋势一致；用RAPD与ISSR进行PCR扩增，可以清晰、有效地分辨出不同居群样本的基因型，其中ISSR引物UBC835与UBC856可以将不同产地的丹参区分鉴别。2药材纯净度研究进展潘英妮等[11]按照2005年版《中国药典》方法测定了30批丹参药材的水分、总灰分和酸不溶性灰分，其中2批药材的含水量超标。采用相同的方法，王仲焕[12]对16批丹参和白花丹参药材进行了水分、总灰分、酸不溶性灰分测定。结果，全部样品的水分含量符合国家标准，但不同产地和不同生长年限药材中水分含量差异显著；有1个样品的总灰分和4个样品的酸不溶灰分含量超出国家标准。结果也提示在丹参药材加工过程中需要规范化管理，改进丹参采收加工方法，以提高药材纯净度，保证药材质量。3药材质量研究进展3.1浸出物含量研究进展邵林等[13]采用2005年版《中国药典》附录方法测定了山东不同产地、不同加工方法及不同生长年限丹参药材的水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量。结果，按水溶性浸出物含量考察，所有丹参样品均符合国家标准，含量为43.19~61.13%；而按照醇溶性浸出物含量考察，仅有31%的药材达到标准，含量为13.24~30.64%；最低者与最高者相差17.4%。潘英妮等[11]也对30批丹参药材进行了测定，其中所有样品均未达到“水溶性浸出物含量不得少于35%”的国家限量标准，而醇溶性浸出物含量仅有7批样品达标，作者认为，应通过增加实验药材样品数目，以制定合适的浸出物限度值。3.2化学成分测定研究进展3.2.1单一指标性成分的含量研究代云桃等[14]采用薄层扫描法测定了不同产地丹参药材中丹参酮ⅡA的含量结果：陕西山东≈山西四川。赵磊磊等[15]采用TLC和HPLC法分别测定了10个不同产地的丹参药材中丹参酮ⅡA的含量。结果均显示，不同产地丹参的成分不一，含量也有一定差异。其中丹参酮ⅡA的含量山东省河南省陕西省，山东省内样品则呈自西向东含量逐渐增大趋势。这可能与山东省的暖温带季风气候适合丹参生长有关。冉蓉等[16]采用HPLC法比较了不同种源、不同产地、不同采收期丹参中丹参酮ⅡA的含量。结果显示以丹参酮ⅡA含量为指标，白花丹参质量优于丹参；道地产区蒙阴为丹参的最佳产地；丹参的最适宜种植区域应选择山区及丘陵地，而平原地区不适宜种植丹参；9月中旬为丹参的最佳采收期。王仲焕[12]采用HPLC法对道地及非道地产区丹参的丹酚酸B含量进行了比较，结果道地产区药材含量显著高于非道地产区。平邑、蒙阴、莱芜、济南、曲阜产丹参丹酚酸B的含量在8.01~11.21%，均远高于《中国药典》中3.0%的标准。说明若以丹酚酸B为标准，山东产丹参属于优质药材。从丹酚酸B的动态积累情况看，8月中旬达到最高，11月出现另一较高值。3.2.2化学成分群的含量研究潘英妮等[11]以甲醇-水为流动相，对不同产地的30批丹参样品中丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮含量同时进行分析，结果，以丹参酮ⅡA含量计，仅有10批药材符合药典规定，经“发汗”处理的川丹参含量低于直接干燥的丹参；水溶性成分群包括丹酚酸B、丹参素、迷迭香酸及原儿茶醛等的含量，以丹酚酸B计，有24个样品达到国家标准。武为宝等[17]采用UPLC法同时测得丹参中二氢丹参酮Ⅰ、降鼠尾草氧化物、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA等5种脂溶性成分含量分别为0.273、0.675、0.177、0.328、1.138μg/g，被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系；平均回收率良好，该法具有良好分离效果及重复性且快速、简便，可作为丹参的质量控制方法。赵希贤[18]测定了30批不同产地的野生或栽培品丹参药材及饮片丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸含量，结果丹参素、原儿茶醛、咖啡酸的含量在不同产地间存在显著性差异，而丹酚酸B含量在不同产地间无显著性差异；4种成分的含量在栽培品和野生品间存在显著性差异，其中栽培品丹参中丹酚酸B的含量较高，而野生品丹参中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸的含量较高。王莉等[19]采用高分离度快速液相色谱(RRLC)法以3,4-二羟基苯乙酸为内标，0.1%甲酸-水为流动相梯度洗脱，同时测定了丹参中9种酚酸类成分，该法可以使样品在9min内达到良好分离，与常规HPLC相比节省了近6倍的时间，且精密度重现性良好，适用于丹参药材的质量控制。侯双[20]对11个无性系材料55份丹参样品中的5个主要有效成分（丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA）同时进行含量测定，结果显示全部批次的样品丹酚酸B的含量均远高于国家标准，而丹参酮ⅡA的含量为0.18~1.88mg/g，几乎均未达到药典规定的0.2%的水平。在排