第二讲 免疫器官的观察与免疫细胞的分离

DepartmentofImmunology医学免疫学实验免疫学教研室[e-mail]:3831939DepartmentofImmunology第二讲免疫器官的观察与免疫细胞的分离DepartmentofImmunology实验目的掌握小白鼠的捉拿与处死方法掌握免疫细胞分离的方法及其效果的判断熟悉血细胞计数板的构造及使用方法DepartmentofImmunology免疫器官的观察DepartmentofImmunology免疫细胞种类DepartmentofImmunology免疫细胞分离技术密度梯度离心法免疫吸附分离法荧光激活细胞分选仪分离法磁珠分离法抗原肽-MHC分子四聚体技术花环沉降法DepartmentofImmunology外周血单核细胞的分离离心前离心后稀释抗凝血淋巴细胞分离液血浆单个核细胞粒细胞红细胞密度梯度离心法DepartmentofImmunology淋巴细胞及其亚群的分离DepartmentofImmunology抗原肽-MHC分子四聚体技术DepartmentofImmunology小白鼠的抓取和固定通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，翻转后将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。DepartmentofImmunology小白鼠的抓取和固定DepartmentofImmunology小白鼠的抓取和固定DepartmentofImmunology小白鼠的处死方法颈椎脱臼法：用拇指和食指用力往下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓断离，动物立即死亡。DepartmentofImmunology小白鼠的处死法（颈椎脱臼法）DepartmentofImmunology倒T字开腹DepartmentofImmunology小白鼠脾脏DepartmentofImmunology小白鼠脾脏DepartmentofImmunology小白鼠脾脏DepartmentofImmunology小白鼠胸腺DepartmentofImmunology小白鼠胸腺DepartmentofImmunology【实验器材】小白鼠手术器械，解剖台,血细胞计数板,显微镜0.2％的台盼蓝染液DepartmentofImmunology【实验步骤】1.颈椎脱臼法处死小白鼠，取其脾脏2.将脾脏放入适量（约15ml）生理盐水中，除去筋膜3.取绿豆大小的脾脏，用玻片研磨制成10ml细胞悬液4.取１ml细胞悬液于试管中，加入１滴台盼蓝染液5.混匀后静置3分钟，低倍镜观察DepartmentofImmunology【台盼兰拒染法原理】通透性着色颜色体积死细胞高易蓝大活细胞低难无色小活细胞死细胞DepartmentofImmunology注意事项脾脏去净筋膜，弃边缘，取其中间部分研磨时不可用力过大，时间不宜过长染色时间不宜过长或过短血细胞计数板的使用方法（10倍镜、暗视野）DepartmentofImmunology血细胞记数板细胞计数池DepartmentofImmunology血细胞计数池的构造白细胞计数区：红细胞计数区：无效计数区DepartmentofImmunology【计数原则】1、2、“”形随机计数S计左不计右，计上不计下√×√√DepartmentofImmunology【实验结果】细胞计数•随机计数100个细胞，并数出其中活细胞数结果计算•细胞活力＝活细胞数／细胞总数×100%实验操作录像DepartmentofImmunology实验报告实验原理实验方法实验结果及分析DepartmentofImmunology参考书籍及网站://