高速逆流色谱法及其在天然药物研究中的应用进展

高速逆流色谱法及其在天然药物研究中的应用进展作者：姜宁，陈执中作者单位：姜宁(上海朗斯生物工程有限公司,上海,201023)，陈执中(复旦大学药学院,上海,200032)刊名：中国民族民间医药杂志英文刊名：CHINESEJOURNALOFETHNOMEDICINEANDETHNOPHARMACY年，卷(期)：2004，(4)被引用次数：3次参考文献(21条)1.陈执中灌注色谱法及其在民族药分析研究中的应用2000(05)2.陈桂良.陈执中液相色谱-大气压离子化质谱联用技术及其在天然药和民族药研究中的应用[期刊论文]-中国民族民间医药杂志2000(02)3.陈执中新的色谱工艺开拓系统及其在天然药物活性成分研究中的应用[期刊论文]-中国民族民间医药杂志2003(02)4.ItoYHigh-speedcountercurrentchromatography1986(01)5.ItoY.N.B.;ItoYIncountercurrentchromatography.TheoryandPracticeMondava19886.MaY.ItoYAffintitycountercurrentchromatographyusingaligandinstationaryphase1996(07)7.MaY.ItoYSeparationofpeptidederivativesbyPH-zone-refiningcountercurrentchromatography19958.ItoY.MaYPH-zone-refiningcountercurrentchromatography1996(01)9.AgnelyM.ThiebautDDual-modehigh-speedcountrecurrentchromatography:retention,resolutionandexamples199710.东晓杰东北红豆杉枝叶化学成分研究199411.Vanhaelen-FastreRHighspeedcountercurrentchromatographyseparationoftaxolandrelativediterpenoidefromTaxusbaccata199212.蔡定国应用高速逆流色谱分离防己主要生物碱1993(07)13.ChenGCHighperforamancecountercurrentchromatographyforquantitativeanalysisforfiveflovonoids199214.KapadiaGJ.etalHigh-speedcountercurrentchromatographyseparationofbiflavonidsfromGarciniakolaseeds199415.Recia-IglesiasMCXanthonesandsecoiridoidglucosideofHaleniacampanulata199216.PotteratSaponinewithanunsualsecourseneskettonfromsesamumalatumTHONN199217.MarstonA.etalSomenewdevelopmentsincentifugalpartitionchromatographyandapplicationstheseparationofnaturalproducts199018.NitaoJKBioactiveneolignansfromtheleavesofMagnoliavirginiana199119.YangFSemi-preparativeseparationoftarxeryl-acetateandcoumarinsfromArtemisicdekaukamaseKraschenbyhighspeedcountercurrentchromatography199520.SpraulMHCrispaneandCrisponone,twocompoundsfromperoselinumcrispumwithanewcarbounskeleton199221.FoucaultAPCountercurrentchromatography1991(10)相似文献(9条)1.学位论文曹晓莹高速逆流色谱法对玉米须及废次烟草有效成分的分离纯化2008玉米须是一种常用的中药材，临床上主要应用于糖尿病、黄疸、肾炎等的治疗。大量研究显示，黄酮化合物显著性质之一是具有清除自由基的作用，还具有抑制大量酶的活性作用。黄酮类化合物作为一些中草药的主要有效成分，一直是天然药物的开发对象。目前测定食品及中草药中黄酮的常用方法之一是以芦丁为标样的硝酸铝显色法。而目前常用的黄酮类物质的分离方法主要有各种柱层析法、离心薄层层析法、制备型薄层层析法和纸层析法等。我国是烟草生产大国，每年有大量的烟叶、烟末等废次烟草被废弃。茄呢醇是一种很重要的医药中间体，医药上茄尼醇显示了较强的抗癌生物活性，是药物合成的重要原料和泛醌类药物不可替代的关键中间体。茄尼醇由于其独特的结构，除由植物叶中提取之外，其他方法难以取代。目前国内精制茄尼醇的方法主要有柱层析、离心液液层析、HPLC等。本文针对玉米须中黄酮化合物和废次烟草中茄尼醇的高速逆流色谱法分离做了一系列研究。通过正交实验设计，确定了提取玉米须中异鼠李素的最佳条件：80％乙醇溶液，1：8的料液比，每次3h，共提取2次。总黄酮含量9.07％，异鼠李素含量为1.53％。建立半制备型高速逆流色谱分离异鼠李素的实验方法。首先通过正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：5：5)体系的实验，得到含有异鼠李素65.64％的物质，再利用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：6：4)体系对上述物质进行二次逆流分离，最终700mg乙酸乙酯提取物得到11.8mg纯度达98％的异鼠李素。建立了采用高速逆流色谱法分离纯化废次烟草茄尼醇粗品中的茄尼醇，在氯仿：正己烷：乙腈(3：10：7)体系的条件下，纯化所得样品茄尼醇经高效液相色谱分析测定纯度为96％(峰面积百分比)。本文提出的利用高速逆流色谱分离纯化玉米须中异鼠李素和废次烟草茄尼醇粗品中的茄尼醇的分离方法，前处理过程比较简单，分离过程与常用方法相比具有快速、回收率高、分离效果好等优点。2.学位论文李艳贯叶金丝桃活性成分的高速逆流色谱分离纯化方法研究2008中药贯叶金丝桃是极具开发潜力的天然药物，具有清热解毒、抗菌消炎、消肿止血、利湿止痛等中医功效，以及抗抑郁、抗病毒、抗癌、抗菌、镇痛等药理活性。其化学成分金丝桃素、贯叶金丝桃素、金丝桃苷等被认为是发挥药理活性的主要成分，其中，贯叶金丝桃素被认为是抗抑郁的主要活性成分；金丝桃素在抗病毒和抗肿瘤等方面作用显著；金丝桃苷具有明显的抗炎、止咳、镇痛等作用。这些化学成分被用于相关药物的质量控制和进一步的新药开发，具有重要的研究价值。贯叶金丝桃活性成分的提取纯化难度很大。虽然贯叶金丝桃中有效成分的活性较高，但在植物中甚至是市售的粗提物中含量都很低，这给活性成分的进一步分离纯化带来很大的困难；另外，贯叶金丝桃素和金丝桃素都属于光敏性、热不稳定物质，在遇光和遇热情况下较易发生变化而氧化及失活，这也是这些成分提取困难，提取物中含量较低的原因之一。目前国内外对贯叶金丝桃分离提取，尤其是精制高纯度单体的研究很少。本论文采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化贯叶金丝桃中的贯叶金丝桃素、贯叶金丝桃素氧化物、金丝桃素、黄酮类物质(包括金丝桃苷和一种未知物质)等五种活性成分，研究内容主要包括以下方面：1．建立五种成分的HPLC分析方法。对于金丝桃素的分析难度较大，实验时购买了金丝桃素对照品；对于没有对照品的贯叶金丝桃素、黄酮类物质等，主要利用HPLC—DAD、HPLC—MS、UV等方法，最终确定了其HPLC分析方法。所建立五种物质的HPLC分析方法包括等比例洗脱和梯度洗脱方式，用到的试剂主要包括甲醇、乙腈、四氢呋喃、水等。这就为为贯叶金丝桃活性成分分离提取和质量控制提供了基础。2．建立了贯叶金丝桃的粗提取方法。根据相似相溶原理，选择不同极性的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶剂依次对市购粗提物粉末进行提取，通过单因素考察法对萃取法、溶剂加热回流法、溶剂超声提取法进行考察，最后选择了选择最适合的粗提取方法即溶剂超声提取法。3．分别建立五种成分高纯度单体的HSCCC分离纯化方法，包括溶剂体系的筛选、分离条件的选择优化和样品的分离。使用逆流色谱的方法，从石油醚超声提取物A中纯化出贯叶金丝桃素(HF)单体和贯叶金丝桃素氧化产物(HF')单体；从乙酸乙酯超声提取物B中纯化出金丝桃素(HR)单体；从正丁醇超声提取物C中纯化出金丝桃苷(HS)单体和一种未知单体成分(HS—5)单体。4．对分离所得五种单体成分进行了进一步的结构鉴定，采用了包括紫外可见光谱分析、液质联用分析、核磁共振分析等方法。5．用已建立的方法制备出一定量高纯度的五种成分单体，以便进一步结构鉴定和进行稳定性研究。本课题所建立的高速逆流色谱分离纯化贯叶金丝桃活性成分的方法，填补了目前国内外相关领域研究的空白；经国内外文献检索，其中只有金丝桃苷有1篇相关报道，其它成分的HSCCC分离均属首次报道。用高速逆流色谱制备出贯叶金丝桃活性成分的高纯度对照品，即可用于相关产品的质量控制，也可用于药理活性的进一步研究，因此，本课题的研究工作具有一定的学术和实用价值。3.期刊论文王巧娥.吴澄玉.王文慎.王小如高速逆流色谱法分离制备甘草黄酮化合物-广西师范大学学报（自然科学版）2003,21(z5)甘草黄酮是中药甘草中重要的有教成分,具有抗肿瘤和溃疡、消炎保肝、解痉挛、抗病原微生物和病毒活性等药理作用[1],分离制备甘草黄酮化合物对进一步揭示甘草药效的物质基础和开发新的天然药物具有十分重要的意义.高速逆流色谱(High-speedCounter-currentChromatography,HSCCC)不需固相裁体,克服了固相载体带来的样品吸附、损失、污染、峰形拖尾等缺点,样品的回收率高,预处理简单[2,3],已被广泛应用于天然药物成分的分离制备和中药的分析鉴定中[4].本文用HSCCC分离、纯化、制备中药甘草中的黄酮组分,得到两个甘草黄酮化合物A和B(其纯度分别为95%和98%,结构待鉴定),为甘草的药理研究、质量控制提供化学对照品.4.学位论文刘政波三种鹅绒藤属植物中苯乙酮类化合物的高速逆流色谱法分离(白首乌、牛皮消、徐长卿)2009白首乌(CynanchumbungeiDecne)，牛皮消(CynanchumauriculatumRoyleexWight)和徐长卿(CynanchumpaniculatumBunge)是三种常见的萝藦科(Asclepiadaceae)鹅绒藤属(Cynanchum)植物。三者药用范围广泛，越来越成为天然药物研究的的热点。高速逆流色谱(highspeedcounter-currentchromatography，HSCCC)是一种新的液液分配分离技术。它消除了对样品的不可逆吸附和变性等影响，分离度高、重现性好、分离量大，尤其适用于植物成分等方面的分离和制备。本文主要采用HSCCC或结合二氧化碳超临界(CO2-SFE)萃取技术对三种植物的化学成分进行提取分离研究。并用得到的标准物质对白首乌化学成分进行了含量测定。此外还对牛皮消和白首乌的五种提取部位进行了谱学对比分析，从化学成分角度解释了二者的异同，为其开发应用提供理论依据。1.HSCCC分离白首乌中的化学成分溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:3:3:3，v/v)，上相作为固定相，120min前的流动相为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:3:3:3，v/v)的下相，120min后的流动相为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:3:3，v/v)的下相，流速为1.7mL/min，检测波长为254nm，转数为850rmp/min，分离时间为270nun。从600mg白首乌的正丁醇提取物中分离出白首乌二苯酮6