陈纭老师第七章苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析

第七章苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析安徽医科大学陈纭QQ:29583133手机：[phone]具有收缩血管、升高血压、舒张支气管等药理作用，临床用于升压、平喘、充血治疗等，应用广泛。具有碱性的脂肪乙胺侧链，易被氧化结构特点苯环上有活泼的酚羟基取代代表药物：拟肾上腺素类药物第一节结构与性质R1CHCHNHR2OHR3*拟肾上腺素类药物常见的苯乙胺类药物HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOHOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素常见的苯乙胺类药物H2SO42HOCH2OHCHOHCH2NHC(CH3)3硫酸沙丁胺醇常见的苯乙胺类药物ClH2NClCHOHCH2NHC(CH3)3HCl盐酸克仑特罗(瘦肉精)主要性质1、酚羟基特性多数药物苯环上有酚羟基；肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素等分子结构中苯环的3，4位上都有2个邻位酚羟基◆与重金属离子络合呈色◆置空气中或遇光易氧化变色◆在碱性溶液中更易变色◆发生三氯化铁反应2、弱碱性烃氨基侧链，氮为仲胺氮，显弱碱性，游离碱溶于有机溶剂，难溶于水；而盐能溶于水3、具手性碳原子，旋光性4、苯环上的取代基可供分析用5、有紫外吸收与红外吸收特征第二节鉴别试验一、与铁盐的反应药物与三氯化铁反应显色肾上腺素翠绿色，加氨试液，显紫色紫红色重酒石酸去甲肾上腺素翠绿色，加碳酸氢钠试液，显蓝色红色盐酸去氧肾上腺素紫色盐酸异丙肾上腺素深绿色，滴加新制的5％碳酸氢钠试液，显蓝色红色硫酸沙丁胺醇紫色，加碳酸氢钠试液，橙黄色混浊二、与甲醛-硫酸反应与甲醛-硫酸试液反应，形成具有醌式结构的有色化合物。可用于区别同类药物。药物与甲醛－硫酸试液反应肾上腺素红色重酒石酸去甲肾上腺素淡红色盐酸去氧肾上腺素玫瑰红橙红深棕红盐酸异丙肾上腺素棕色至暗紫色三、氧化反应呈不同颜色加氧化剂氧化药物H碘、过氧化氢、铁氰化钾具有酚羟基例：盐酸异丙肾上腺素加硫代硫酸钠使过量碘的棕色消失溶液显淡红色H+例:肾上腺素例:重酒石酸去甲肾上腺素(与异丙肾上腺素和肾上腺素区别)无色或微红色或淡紫色重酒石酸去甲肾上腺素256.3IpH肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧化产生明显的红棕色或紫色在pH为6.5的条件下，是无法区分H2O2肾上腺素红显血红色H+棕色多聚体是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱（盐酸伪麻黄碱）、盐酸去氧肾上腺素鉴别：四、氨基醇的双缩脲反应盐酸麻黄碱显蓝紫色乙醚醚层紫红色水层蓝色CuSO4+NaOH•盐酸去氧肾上腺素溶液CuSO4试液NaOH试液显紫色加乙醚振摇醚层不显色与盐酸麻黄碱区别五、脂肪伯胺的Rimini实验分子结构中含有脂肪伯氨基的化合物，显脂肪族伯胺专属的Rimini显色反应例：显红紫色重酒石酸间羟胺、碳酸氢钠亚硝基铁氰化钠、丙酮丙酮中不能含有甲醛六、紫外特征吸收与红外吸收光谱中国药典规定利用紫外特征吸收与红外吸收光谱可以用来鉴别苯乙胺类药物。例：盐酸异丙肾上腺素可采用其水溶液(浓度为0.O5mg/ml)在280nm处的吸收度为0.50，进行鉴别;盐酸异丙肾上腺素亦采用红外吸收光谱进行鉴别。第三节特殊杂质的检查一、酮体检查杂质来源：原料残存（氢化不完全）检查范围：肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素等药检查原理：利用酮体在310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收。检查方法吸收度法例：以重酒石酸去甲肾上腺素为例。例：重酒石酸去甲肾上腺素2.0mg/ml，310nm处测定，A≤0.05，酮体的限量0.05%药物检查杂质溶剂样品浓度测定波长A肾上腺素肾上腺酮HCL2.0（mg/ml)310nm0.05盐酸去氧肾上腺素酮体水0.2重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺酮0.05盐酸异丙肾上腺素酮体0.15二、光学纯度的检查中国药典采用比旋度法进行光学纯度检查。（表7-5）目前常用的方法：液相色谱法和毛细管法三、有关物质的检查盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇－TLC盐酸苯乙双胍-PC盐酸氨溴索－HPLC采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查盐酸氨溴索的检查方法对照样品制备：本品→供试品溶液→对照溶液供试样品制备：本品→甲醇溶解→加甲醛溶液→加热→吹干溶剂→用水和流动相溶解→HPLC分析色谱条件：RP-HPLC0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN(50:50);248nm分析：对照溶液主成分峰为满量程的20％~25%，记录至主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。Mainpeak主峰杂质AA31第四节含量测定原料药:非水溶液滴定法、溴量法、亚硝酸钠法制剂:紫外分光光度法、比色法和高效液相色谱法等。(一)非水溶液滴定法原料药,脂烃胺基侧链，显弱碱性测定条件:用冰醋酸做溶剂，加入醋酸汞试液消除氢卤酸的干扰，并以结晶紫指示液指示终点，0.1mol/L的高氯酸作滴定液。同时作空白试验。（一）酸碱滴定的局限酸碱滴定是在水溶液中进行的溶剂--水局限性：(1)许多弱酸或弱碱,Ka或Kb小于10-8，不能直接滴定(2)有些有机酸或有机碱在水中溶解度小，使滴定不能直接准确进行(3)-些多元酸或碱，混合酸或碱由于Ka(Kb)值较接近，不能分步或分别滴定。非水滴定法：非水酸碱滴定，氧化还原滴定，配位滴定及沉淀滴定等（二）非水溶剂1、溶剂分类（1）质子溶剂能给出质子或接受质子的溶剂，称为质子溶剂。酸性溶剂按接受质子的能力大小，可分为碱性溶剂两性溶剂①酸性溶剂给出质子的能力较强的溶剂，称为酸性溶剂。如甲酸、冰醋酸、丙酸等是常用的酸性溶剂。适于作滴定弱碱性物质的介质。②碱性溶剂能接受质子的溶剂称为碱性溶剂。如乙二胺、乙醇胺、丁胺等为常用的碱性溶剂。碱性溶剂适于作滴定弱酸性物质的介质。③两性溶剂既易接受质子又易给出质子的溶剂称为两性溶剂。★特点：溶质是较强的酸时，溶剂显碱性溶质是较强的碱时，溶剂显酸性★种类有：醇类;如甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇等★两性溶剂(或与极性小的溶剂混合)适于作滴定不太弱的酸、碱的介质（2）无质子溶剂分子中无转移性质子的溶剂称为无质子溶剂①偶极亲质子溶剂★溶剂分子中无转移性质子，与水比较几乎无酸性亦无两性，但却有较弱的接受质子的倾向和程度不同的成氢键的能力。★种类：酰胺类、酮类、乙腈、二甲基亚砜、吡啶等皆是。其中二甲基甲酰胺、吡啶和二甲基亚砜的碱性较明显，成氢键的能力较丙酮、乙腈强。★适于作弱酸或酸强度不同的混合物的滴定介★二甲基酰胺和吡啶也常被认为是碱性溶剂。②惰性溶剂★溶剂分子本身几乎无酸碱性，不参与溶质酸碱反应，也无成氢键的能力，这种溶剂称为惰性溶剂★种类：苯、甲苯、氯仿等★惰性溶剂常与质子溶剂混合使用，以改善样品的溶解性能，增大滴定突跃，从而使终点时指示剂变色敏锐（三）溶剂的选择(1)对供试品的溶解能力要大，并能溶解滴定产物(2)能增强供试品的酸碱性，而又不引起副反应(3)溶剂应能使滴定突跃明显。降低溶剂的介电常数(ε)，能使滴定突跃明显。溶剂的极性大小是以介电常数为判断的，介电常数大的极性大，介电常数小的极性小。(4)考虑使用完全、价廉、粘度小、挥发性低、易于回收和精制等。（四）基本原理——非水碱量法(五)一般方法具弱碱性，在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。并用空白试验校正（六）问题讨论1、适用范围：主要用于Kb﹤10-8的有机碱盐例：▼Kb在10-8～10-10时，选用冰醋酸做溶剂▼Kb在10-10～10-12时，选用冰醋酸和醋酐的混合溶液做溶剂▼Kb在﹤10-12时，选用醋酐做溶剂2、酸根的影响在醋酸介质中的酸性排序为：高氯酸〉氢溴酸〉硫酸〉盐酸〉硝酸例：氢卤酸盐结论：加入的醋酸汞量不足时，会影响滴定终点而使结果偏低过量的醋酸汞(理论量的1～3倍)并不影响测定的结果磷酸盐：直接滴定硫酸盐：硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为HSO4－，目视终点灵敏度较差，电位突跃也不明显，用大量醋酐代替冰醋酸，为溶剂，可以提高终点的灵敏度硝酸盐：硝酸会使指示剂退色，用电位滴定法指示终点3、标准溶液的稳定性（1）配制和标定注意：★冰醋酸和高氯酸的除水★标定——用邻苯二甲酸氢钾作基准，以结晶紫为指示剂（2）温度的校正水的体积膨胀系数较小，0.21*10-3/℃冰醋酸的体积膨胀系数为1.1*10-3/℃要求：温差超过10℃，重新标定温差未超过10℃，按公式校正4、终点指示法电位法和指示剂法在以冰醋酸作溶剂，用高氯酸酸滴定弱碱时，最常用的指示剂是结晶紫，其酸式色为黄色，碱式色为紫色。特点：▼在不同的酸度下，变色较为复杂，由碱区到酸区的颜色变化为紫、蓝紫、蓝绿、绿、黄▼在滴定不同强度的碱时，终点颜色不同滴定较强碱时，以蓝色或蓝绿色为终点滴定较弱碱时，以黄绿色或黄色为终点(二)溴量法盐酸去氧肾上腺素、重酒石酸间羟胺原料药采用溴量法测定含量。例：以盐酸去氧肾上腺素为例讨论溴量法原理：操作要点(1)操作过程中必须防止逸失(2)溴液不能太过量:过量：溴代反应中会引起酚羟基的氧化或溴化一般加入的溴液以过量2%为宜(3)进行空白试验：校正操作中溴及碘的可能逸失■盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂标准酸直接滴定提取液蒸干游离碱药物残渣用中性乙醇溶解有机溶剂提取碱性试剂碱化三、提取酸碱滴定法依据性质■游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂方法一：终点酸（过量）提取液游离碱药物滴定甲基红、低温蒸去乙醚定量过量的酸有机溶剂提取碱性试剂碱化NaOH方法二：硫酸苯丙胺的含量测定：［B］H2SO4+NaOH+NaCl乙醚提取［B］+H2SO4蒸去乙醚NaOH标准液滴定终点四、紫外分光光度法和比色法利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化－偶合反应，以及分子结构中的Ar-OH与Fe3＋络合显色，进行比色测定。分之结构中的苯乙胺结构采用紫外法测定分子结构中的酚羟基可与亚铁离子络合显色分子结构中的芳伯氨基进行重氮化反应显色用于制剂的含量测定五、高效液相色谱法例：重酒石酸去甲肾上腺素注射液■离子对反相高效液相色谱法■内标法定量■调节溶液pH为3.8，加入离子对试剂十二烷基磺酸钠六、亚硝酸钠法例：盐酸克伦特罗原料药含量测定其它分析技术与方法高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗与沙丁胺醇含量的测定毛细管：75m(i.d)×50cm，有效长度39cm，未涂层石英毛细管柱(河北永年锐沣色谱器件有限公司)；缓冲液：60mmol／L的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲溶液，pH为6.32；分离温度25℃；分离电压12kV；检测波长200nm；压力进样：3.4kPa,20s．实验前，依次用0.1mol／L的NaOH溶液、水和缓冲溶液冲洗毛细管5、2、2min，两次进样间用缓冲溶液冲洗2min．空白饲料盐酸克伦特罗沙丁胺醇练习与思考[A型题]1．盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.水杨酸D.对氨基苯甲酸E.氨基酚2．对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.苯甲酸E.苯酚3．肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.酮体E.苯甲酸[B型题]A。硫酸铜反应B.氧化反应C.还原反应D.水解后重氮化-偶合反应E.重氮化-偶合反应1.盐酸利多卡因2.肾上腺素3.盐酸普鲁卡因4．对乙酰氨基酚ABED练习与思考