室内空气中细菌的测定

室内空气中细菌的测定——平皿暴露沉降法目的：学习和掌握平皿暴露沉降法测定公共场所空气中细菌的总数。评价居室的卫生状况理论依据和实际应用：室内空气中的微生物主要来源是人们在室内的生活和活动，使微生物随飞沫与悬浮颗粒物飞扬于空气中。所以室内空气中的微生物数量的多少取决于室内卫生状况、居住密度、居民健康情况、人们的活动情况、室内通风效果等。居住密度大、活动频繁、通风不良时，细菌总数就多。所以它可以代表居室一般卫生状况的意义；理论依据和实际应用：附着于室内悬浮颗粒物和唾液与痰液飞沫的微生物中含有一定数量的致病微生物（溶血性链球菌、结核杆菌、白喉杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌、流感病菌等），可对人致病（在空气湿度大、通风不良、阳光不足的情况下，可保持较长的生存时间和致病性），因此，有必要对室内空气中的微生物数量作出限制。以病原体作为直接的评价指标，在技术上还有一定难度，所以目前仍多用细菌总数作为居室空气细菌学的评价指标。三、原理：空气中附着于尘埃或飞沫小滴上的细菌，经过一段时间，可自然沉降于培养基的表面上，经培养后，计数其生长的菌落数，再按公式推算出每立方米空气中的细菌数。四、实验准备：（一）仪器与设备：高压蒸汽灭菌器电热恒温干燥箱恒温培养箱电冰箱玻璃平皿及制备培养基用的一般设备（二）试剂与材料：营养琼脂培养基：（1）成份：蛋白胨10克牛肉浸膏3克氯化钠5克磷酸二氢钠1克琼脂15～20克蒸馏水1000毫升（二）试剂与材料：营养琼脂培养基：（2）制法：将上述成分混合后，加热溶解。调节PH值7.8～8.0。过滤除去沉渣，分装于三角烧瓶中，经121℃（103kPa）高压蒸气灭菌20分钟，然后倾注适量（15～20毫升）于已灭菌处理的平皿内，制成营养琼脂平板备用。若当天不用，应置冰箱内保存。五、操作步骤：（一）制作营养琼脂平板（无菌操作）操作者面前点燃酒精灯打开已灭菌处理的平皿倾注适量营养琼脂培养基（15～20毫升）冷凝（大约15分钟）（二）选择采样点的要求：1．采样点的数量根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于50㎡的房间应设（1～3）个点；50㎡～100㎡设（3～5）个点；100㎡以上至少设5个点。在对角线上或梅花式均匀分布。2．采样点应避开通风口，离墙壁距离应大于0.5m。3．采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一致。相对高度0.5m～1.5m之间。（三）采样方法1.选择好采样点后，将营养琼脂平板置于这些选测的部位，并将皿盖揭开，使平皿内营养琼脂培养基表面暴露于空气中5分钟。盖上皿盖，将平板倒转，置于37℃恒温培养箱中培养24小时后计数菌落数。2.计数营养琼脂培养基表面上所生长的菌落数，并求出全部采样点的平均菌落数。六、结果与计算：1、奥梅梁斯基公式：100cm2的培养皿让空气沉降5分钟，培养出的细菌数相当于10升空气中的细菌数。X=（N×100×100）/лR2式中：X——每立方米空气中的细菌数N——平板直接计数的平均菌落数R——平皿的底面积半径（cm）：9cm2、直接计数：CFU（菌落形成单位/皿），注明（沉降法，皿径9cm）3、将五个采样点的菌落数平均计算出室内平均的菌落数。12345平均细菌数（CFU/皿）感应式菌落计数仪九、评价：室内空气中细菌总数规定撞击法≤4000cfu/m3;沉降法≤45cfu/皿。（室内空气中细菌总数卫生标准GB/T17093-1997）旅店业卫生标准GB9663-1996医院空气消毒效果和污染状况的评价：空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3,且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细菌总数≤500cfu/m3,且未检出致病菌为消毒合格。Ⅰ类环境包括层流洁净手术室和层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。Ⅱ类环境包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房、采用循环风紫外线空气消毒器或静电吸附式空气消毒器，这类均为有人房间，必须采用对人无毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生物减到此标准以下。Ⅲ类环境包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房室和房间，采用紫外线消毒，化学消毒剂熏蒸或喷雾消毒。十、注意事项：1.若测定空气中的溶血性链球菌及绿色链球菌，则用血琼脂平板，其他操作及计算方法与细菌总数测定方法相同。2.平皿的底面积直径不宜小于9cm。3.选择采样点时，应尽量避开空调、门窗等气流变化较大处。整个采样过程中，应动作轻缓，避免扬起灰尘，并要注意无菌操作。4.采样中打开皿盖时，可将皿盖向下，切忌血盖向上而暴露于空气中，影响采样结果。暴露5分钟后，应按打开皿盖的顺序，盖上皿盖，带回实验室置培养箱，37℃、24小时培养后计数菌落。补充：1.撞击式空气采样法：用空气动力泵抽气进入狭缝，使气流速度加快，撞击于正在转动的平皿上。并粘附其上，培养。CFU/m32.吸收法：气流经过一定的吸收液，培养。3.暴露法：CFU/皿。缺点：颗粒物质运动符合stokes定律，由于人流、季节、白天细菌数晚上，且技术定量不同等可造成误差。