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OLYMPUSIX71倒置荧光显微镜使用与维护SOPXB-YQ-10.010.02第1页/共4页起草：李敏惠日期：2007.10.24审核：邹强日期：2007.11.07批准：王伦安日期：2007.11.15生效日期：2007.12.01签字：修订号生效日期制定（变更）原因及目的：012007.12.01开始按SOP管理0203分子生物学[]份组织病理学[]份细胞培养室[1]份天然产物[]份抄送SPF级动物[]份精密仪器室[]份准备室[]份技术档案室[1]份OLYMPUSIX71倒置荧光显微镜使用与维护SOP1适用范围¾本SOP适用于OLYMPUSIX71倒置荧光显微镜的使用及维护保养。2职责¾操作人员：认真执行本SOP的内容，并作好相关记录。¾设备管理员：培训、指导操作人员正确执行本SOP，同时需按本SOP对设备进行定期维护保养并作好相应记录。3主要性能参数物镜转换器六孔，带有简易防水装置聚焦行程9mm（从载物台表面起，向上7mm，向下2mm），同轴粗/微调节钮（微调精度1μm，微调每圈行程100μm），上限位锁定机构，粗调扭力矩调节器初始图像光口上光口，更换内置1×/1.6×变倍器显微镜镜体前置操作光路选择钮，透射光强调节钮和灯开关，TTL脉冲控制钮。100W透射光照明柱IX2-ILL100照明支柱倾斜装置（30度倾角，带有减震装置）；聚光镜架（行程50mm，带有摆动装置）；可调视场光阑，4个滤色片架（直径45毫米，厚度=6mm或更小）透射光照明器外接电源装置TH4-200200V，TH4-HS手动控制器，重量2.2kg观察筒双目观察筒U-BI90瞳间距调焦范围：50～76mm，带有屈光度调节功能，视场数22载物台右手控制旋钮载物台IX2-SFR行程：50mm（X）×50mm（Y），载物台插入板可更换（直径110mm）聚光镜长工作距离聚光镜IX2-LWUCD5孔转盘（其中3孔直径30mm，2孔直径38mm），孔径光阑可调，N.A.0.55，W.D.27mm目镜WHN10×-H高眼点，带屈光度调节功能，视场数22荧光照明器IX2-RFA直型设计，带有视场光阑模块，有滤色片滑板（2个位置，直径32mm，厚度或更小）反射光荧光装置荧光滤色镜转盘IX2-RFAC转盘上有6个位置，内置光闸OLYMPUSIX71倒置荧光显微镜使用与维护SOPXB-YQ-10.010.02第2页/共4页光源100W汞灯室和变压器4主要应用范围¾透射光明场、透射光相差、反射光荧光显微观察5启动5.15.25.36.16.26.36.46.56.66.76.8将光强调节钮调节到最小；打开显微镜电源，将主开关拨到“I”（开）；荧光观察时，开荧光汞灯光源，将主开关拨到“I”（开）；¾汞灯是高压激发，其内是高压，切忌频繁开关，可能的话，需观察的样本请集中在一个时间段观察，在开灯10~15分钟后开始观察效果较好。¾注意：开灯后15分钟内勿关，最好25~30分钟再关闭。¾关闭高压汞灯后，要再次启动，必须等高压汞灯内的水银蒸气冷却下来液化后，才能开启，关灯后再开灯的间隔时间至少为10分钟，最好为20min以上。¾荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用SHUTTER而不要关闭电源。¾当电源上的计时器到200小时以后，汞灯可能出现不稳定，如开电源后需要很长时间灯才亮，或者观察时发现光线忽然强忽然弱，这时需要更换汞灯。请通知相关技术人员。6观察转动荧光分光镜组件转盘选择光路。¾透射光观察时，转动未装激发块的荧光转盘部位进入光路，使透射光接入光路。¾根据样品的荧光指示剂选择与之匹配的荧光组件（荧光转盘）。荧光转盘的选择：在物镜下方的荧光转盘里装有不同的滤色块，对应的标记在机架前方可以看见，针对不一样的荧光染料选用不一样的滤色镜块。NIBA：蓝色激发/绿色荧光（例：FITC、EGFP等）；WIG：绿色激发/红色荧光（例：Rhodamine、DsRed等）。选择放大倍率，拉出变倍钮放大倍率1.6X，推进变倍钮放大倍率为1X。选择滤色片：¾在出光口有4个滤色片，包括2个光强调节滤色片（ND25/6，透过率25%/6%），1个绿色单色反差滤色片，1个毛玻璃，其中毛玻璃一直选用，当光强比较强的时候，可以选择不同的光强调节滤色片来减弱，在做相差观察的时候可以选择绿色滤色片（可以增加反差效果）。¾荧光观察时，使用高倍物镜长时间观察，会发生荧光衰减，导致荧光图像反差减弱，这时可以选择ND滤色片减少激发光强（本机现在无配备）。光路转换，用相差环选择（观察）光路。做明场观察的时候选用BF（旋转转盘来选择），在做相差观察的时候，低倍物镜选择PHL，10~20倍的时候选择PH1，40倍选择PH2。利用X轴Y轴调节钮调节样品位置；调节物镜转换器选择放大倍数；样品聚焦：¾调节粗/微调焦旋钮¾调节光强调节钮¾调节双目观察筒¾调节瞳间距¾调节屈光度。转动左目镜筒上的屈光度调节环，直到视场周边区域清晰可见。调节视场光阑。左右拨动视场光阑杆，关闭或打开视场光阑，“O”（开）。OLYMPUSIX71倒置荧光显微镜使用与维护SOPXB-YQ-10.010.02第3页/共4页6.96.107.17.27.37.47.58.18.28.38.48.58.68.78.88.9¾视场光阑用于根据所用物镜调节照明光束直径。为了屏蔽散射光，获得良好的图像反差，请将视场光阑调节于外切于视场。观察活细胞或荧光样品时，为了防止样品损伤或褪色，关小视场光阑是有效的。调节孔径光阑。孔径光阑可调节观察图像的亮度、对比度、反差和分辨率。¾一般来说，对于染色样品，将孔径光阑调节到物镜数值孔径的70％-80％时，可能是最佳观察位置。¾对于不染色细菌样品，根据需要，将孔径光阑向关方向转动。关机6.10.1先将将光强调节钮调节到最小，再将显微镜主电源开关拨到“O”（关）。6.10.2荧光观察时，关荧光汞灯光源，将主开关拨到“O”（关）；¾注意：开灯后15分钟内勿关，最好25~30分钟再关闭。¾荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用SHUTTER而不要关闭电源。6.10.3等待仪器（尤其是光源部分：汞灯、卤素灯）冷却后再盖上防尘罩。7注意事项使用完显微镜时，一定要把主开关拨到“O”（关）。明场相差观察时，请不要开荧光电源，荧光观察后请在登记本上记录荧光电源使用时间。荧光观察时，如果在短时间内中断观察请使用SHUTTER而不要关闭电源。开/关显微镜电源前，请首先将亮度开关调至最低。在做荧光观察的时候，在观察筒前方的咖啡色挡板请不要拆下，以防在做紫外观察的时候被紫外线灼伤。而且咖啡色遮光板能够将部分激发光遮住，只留必要数量的激发光，能够起到减少激发光强度的作用。8维护保养显微镜避免直射、高温、高湿、多尘。使用完毕，等待仪器（尤其是光源部分：汞灯、卤素灯）冷却后再盖上防尘罩。本室显微镜为专人定期维护，请不要随意用酒精等有机溶剂擦拭仪器部件，如有杂物可以用吸耳球吹净。如果外露光学部分如目镜、物镜和聚光镜被灰尘等污染，需要用擦镜液（酒精30％：乙醚70％）擦拭干净。塑料表面勿用酒精乙醚混合液，镜片表面禁用干镜头纸擦拭。物镜不可随意拆卸，且防震防摔。使用完显微镜后，请将各功能部件复位。为了保护汞灯、延长其使用寿命，其开、关间隔时间最好不要少于30分钟。汞灯关闭后，如果需要重新开机，必须等约20分钟汞灯冷却后，再打开汞灯电源。不要用手强行扳动显微镜电动部件，调节显微镜手动部件时，用力要轻，遇到阻力时不要强行调节。尽量不要用手直接触摸显微镜光学部件（如目镜、物镜、聚光镜等的镜面）。荧光观察时，使用高强度的激发光，样品的荧光容易发生衰减，首先应使用ND滤色片以减少激发光的强度，如果没有ND滤色片，就减小孔径光阑，也可以起到相同的作用。但是不要把孔径光阑关得太小，不要把孔径光阑当作光阑使用。9示意图OLYMPUSIX71倒置荧光显微镜使用与维护SOPXB-YQ-10.010.02第4页/共4页滤色片座透射光卤灯室视场光阑杆屈光度调节环孔径光阑杆聚光镜反射光汞灯室光路选择环粗/微调焦旋钮X轴Y轴调节钮变倍钮物镜转换器荧光分光镜组件10相关文件11参考文献12