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2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体知识回顾：植物体细胞杂交的过程能不能用类似的方法，让不同种动物的体细胞杂交呢？物理法：化学法：生物法：离心、振动、电刺激聚乙二醇（PEG）灭活的病毒(一)动物细胞融合（细胞杂交）1.动物细胞融合：也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2.杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。3.动物细胞融合的方法：用灭活病毒诱导动物细胞融合的过程：用灭活病毒诱导动物细胞融合的原理：P52（生物技术资料卡）4.动物细胞融合技术的优点：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。5.动物细胞融合技术的用途：用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育以及制造单克隆抗体。总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、生物方法获得部分或完整植株主要用于制备单克隆抗体回顾1、抗体的化学本质？2、抗体由什么细胞产生？3、抗体的作用特点？（二）单克隆抗体的制备思考：如何获取某种特定抗体？1、抗体的传统生产方法再从动物血清中分离抗体该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。输入浆细胞动物体内某抗体某抗原思考与探究：如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖杂交瘤细胞既能分泌一种特异性抗体又能无限增殖1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想：2、单克隆抗体的制备过程思考与探究：如何获得能产生特异抗体的杂交瘤细胞呢？2、单克隆抗体的制备过程自学与思考：1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？为什么要这样处理？2）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？3）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？4）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交瘤细胞具有什么特点？5）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？多种杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体单抗的制备过程要点：1.分离B淋巴细胞（B）；培养骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列（B1,B2,B3,---Bn）。每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。2.细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）3.第一次筛选：在“特定的选择培养基”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）4.第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。5.选择所需要的杂交瘤细胞克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。6.提取单克隆抗体。单克隆抗体：特异性强、纯度高、灵敏度高，产量大、容易标准化生产。3、单克隆抗体的优点4、单克隆抗体的应用１、可用于作为诊断试剂：有准确，高效，简易、快速的优点２、可用于疾病治疗３、可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹”。）“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞灭活病毒杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势细胞工程植物细胞工程动物细胞工程植物组织培养技术植物体细胞杂交技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合单克隆抗体的制备例题1：1975年，英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细胞，实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图所示。(1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“融合”在一起，说明细胞膜。(2)单克隆抗体的准确定义应为()A．一类特殊抗体B．无性繁殖系C．单一抗体细胞的无性繁殖系产生的抗体D．单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体(3)杂交瘤细胞繁殖进行的是_______分裂，其遗传性状__________。(4)单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(病原体或癌变细胞等)并与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“生物导弹”这是利用了_____________。具有一定的流动性C有丝不变抗体能与抗原发生特异性结合的特点[变式练习]右图为细胞融合的简略过程，请据图回答：⑴若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用处理，除去了；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是。⑵若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株。⑶若A、B是动物细胞，一般取自，然后用，使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的手段是，所形成的D称为。⑷若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了。注射后小鼠身体产生了相应的。图中B为。⑸若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D细胞应该是。从中选择出它的方法是培养。获得D后，常用的培养方法是。纤维素酶和果胶酶细胞壁离心、振动、电激植物组织培养胚胎或幼龄动物胰蛋白酶或胶原蛋白酶用灭活的病毒诱导杂交细胞抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞3种能产生专一抗体的杂交瘤细胞选择性体内培养或体外培养已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：（1）试管中除融合的杂种细胞外，还有种融合细胞。（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。方法：。原理：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞加入氨基嘌呤后,使D合成的途径阻断,所以仅D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖