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第5课时有机化合物鉴定实验2020/2/172一、验证鉴定类实验1．实验目的针对已知的生物学事实进行验证，巩固和加强有关知识内容，培养实验操作能力。2．常用方法和技术(1)研磨、过滤：如生物组织样液制备。(2)颜色反应：如生物组织中有机物的鉴定。(3)纸层析法：如叶绿体中色素的分离。(4)同位素示踪法：如噬菌体侵染细菌实验。2020/2/1733．特定化学物质的检测方法常用指示剂或指示物作用现象碘液检测淀粉变蓝斐林试剂检测还原糖砖红色沉淀双缩脲试剂检测蛋白质紫色苏丹Ⅲ/Ⅳ染液检测脂肪橘黄色/红色Ca(OH)2溶液检测CO2石灰水变浑浊二苯胺鉴定DNA蓝色余烬木条检测O2木条复燃2020/2/174二、还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定基础梳理1某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应还原糖+斐林试剂镜检脂肪+苏丹Ⅲ染液橘黄色苏丹Ⅳ染液镜检红色蛋白质+双缩脲试剂→紫色沸水浴鉴定物质试剂颜色注意事项还原糖砖红色沉淀现配现用,加热淀粉碘液若检验有色组织或器官,如绿叶,则需脱色处理脂肪苏丹Ⅲ染液做切片观察脂肪颗粒需苏丹Ⅳ染液蛋白质紫色CuSO4不能过量斐林试剂水浴蓝色橘黄色红色双缩脲试剂显微镜酒精2.实验流程（1）还原糖的鉴定2020/2/177（2）脂肪的鉴定取材：花生种子浸泡3～4h，去皮，将子叶削成薄片↓制片（1（2）在薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ染色2~3min（3）去浮色（体积分数为50%（4）制成临时装片↓观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒↓结论：花生种子中含有脂肪2020/2/178（3）蛋白质的鉴定组织样液中有蛋白质。练一练在蛋白质的鉴定实验之前，还要留出一部分样液的作用是。斐林试剂的甲液和乙液应混合后方可使用，双缩脲试剂呢？。加入双缩脲试剂的顺序应是。蛋白质和还原糖的鉴定实验中谁需加热？。如何加热？。答案留作对照分别加入先加NaOH，后加CuSO4还原糖水浴加热2020/2/1710升华提高一、实验材料的选择（1）还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含还原糖量较高的生物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，易于观察。可选用苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。不能选用甜菜、甘蔗，因为它们所含的蔗糖是一种非还原糖;马铃薯因含淀粉较多也不能做实验材料；不能选西瓜、血液（含葡萄糖）、含还原糖的绿色叶片等做实验材料,以避免颜色的干扰。思考：能不能选用甜菜、甘蔗、马铃薯、西瓜、血液、韭菜？2020/2/1711（2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选富含脂肪且体积比较大的种子，才有利于徒手切片，如花生种子。（3）蛋白质的鉴定实验中，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋的蛋清（一定要稀释）。4)做鉴定蛋白质的实验时，在鉴定之前，可以留出一部分样液，以便与鉴定时样液的颜色变化作对比，这样可以增强说服力。(5)蛋白质要稀释主要是防止蛋白质与双缩脲反应后粘固在试管壁上，使反应不彻底，也不易洗刷试管。2020/2/1712课堂练习1：（2007年江苏生物，19）若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管壁上。下列关于这一现象形成原因的描述中，正确的是（）A.B.只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩脲试剂BC.D.A2020/2/1713思考：斐林试剂与双缩脲试剂在使用时能相互替代吗？为什么？2020/2/1714二、斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析比较项目斐林试剂双缩脲试剂不同点浓度反应原理使用方法呈色反应条件颜色相同点乙液CuSO4浓度0.05g/mLB液CuSO4浓度为0.01g/mL还原糖中的醛基被Cu（OH）2氧化，Cu（OH）2被还原为Cu2O具有两个上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成络合物甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现配现用使用时先加A液摇匀后，再加B液需加热煮沸不需加热即可反应砖红色紫色都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH浓度都是0.1g/mL2020/2/1715③、鉴定蛋白质时，向匀浆中加入2mL双缩脲试剂A时摇匀，再加入3～4滴双缩脲试剂B摇匀。其中双缩脲试剂B的量不能过量，因为过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，从而掩盖生成的紫色。2020/2/1716课堂练习2：A2020/2/1717课堂练习3、下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是()A.用于鉴定还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定B.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的圆形小颗粒C.用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入到含样品的试管中，且必须现配现用D.在鉴定脂肪的实验中，苏丹Ⅳ染液染色的时间比苏丹Ⅲ染液染色的时间长B2020/2/1718课堂练习4.（2009·西安模拟）在下列四支试管中分别加入一些物质。甲试管：豆浆；乙试管：氨基酸溶液；丙试管：牛奶和蛋白酶；丁试管：人血液中的红细胞和蒸馏水。上述四支试管中加入双缩脲试剂振荡后，有紫色反应的是()A.乙、丙、丁B.甲、乙、丁C.甲、乙、丙D.甲、丙、丁【解析】。双缩脲试剂能与蛋白质或多肽发生紫色反应，甲试管中有豆浆，丙中有牛奶和蛋白酶，故甲、丙两试管均出现紫色，丁试管中红细胞在蒸馏水中会吸水涨破流出血红蛋白，血红蛋白也是蛋白质，故丁试管也出现紫色，而乙试管中是氨基酸，不发生紫色反应，故能发生紫色反应的试管是甲、丙、丁。D5.(2009·广东卷，6)对下表中所列待测物质的检测，所选用的试剂及预期结果都正确的是（）A.①③B.②③C.①④D.②④待测物质检测试剂预期显色结果①DNA甲基绿红色②脂肪苏丹Ⅲ橘黄色③淀粉斐林试剂蓝色④蛋白质双缩脲试剂紫色D解析甲基绿与DNA反应呈现绿色；苏丹Ⅲ与脂肪反应生成橘黄色物质；淀粉遇碘变蓝；蛋白质可与双缩脲试剂发生紫色的颜色反应。6.生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质三种有机物的鉴定实验中，以下操作错误的是（）A.只有脂肪的鉴定需要使用显微镜B.用双缩脲试剂检测蛋白质不需要加热C.使用斐林试剂最好是现配现用D.在还原糖的鉴定中，可用酒精灯直接加热产生砖红色沉淀解析生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定，是根据与某种试剂产生的特定的颜色反应进行的。在题目给出的选项中，还原糖的鉴定需要加斐林试剂，同时还要水浴加热，但并不能直接加热产生砖红色沉淀。D2020/2/1721课堂练习7：（2008·重庆·T30Ⅱ）在对大豆萌发种子进行定量测定之前，进行了蛋白质含量变化的预测实验，请填充实验原理；判断实验步骤中划线部分是否正确，并更正错误之处；写出实验结果。（1）实验原理：蛋白质_____________，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。（2）实验步骤：①将三份等量大豆种子分别萌发1、5、9天后取出，各加入适量蒸馏水，研碎、提取，定容后离心得到蛋白质制备液；②取3支试管，编号1、2、3，分别加入等量的萌发1、5、9天的蛋白质制备液；与双缩脲试剂作用产生紫色反应2020/2/1722③在上述试管中各加入等量的a.双缩脲试剂A和B(按比例配制)的混合液，振荡均匀后，b.在沸水浴中加热观察颜色变化。a:________________________________________。b:_______________________________________。(3)实验结果：_________________________________。×更正：先加入双缩脲试剂A混合均匀后，再加入双缩脲试剂B×更正：不加热或直接观察1、2、3号试管中颜色依次加深