组蛋白去乙酰化酶

组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)是一类蛋白酶,对染色体的结构修饰和基因表达调控发挥着重要的作用。一般情况下,组蛋白的乙酰化有利于DNA与组蛋白八聚体的解离，核小体结构松弛，从而使各种转录因子和协同转录因子能与DNA结合位点特异性结合，激活基因的转录。在细胞核内，组蛋白乙酰化与组蛋白去乙酰化过程处于动态平衡，并由组蛋白乙酰化转移酶（histoneacetyltransferase,HAT）和组蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylase,HDAC）共同调控。HAT将乙酰辅酶A的乙酰基转移到组蛋白氨基末端特定的赖氨酸残基上，HDAC使组蛋白去乙酰化，与带负电荷的DNA紧密结合，染色质致密卷曲，基因的转录受到抑制。在癌细胞中,HDAC的过度表达导致乙酰化作用的增强，通过恢复组蛋白正电荷,从而增加DNA与组蛋白之间的引力,使松弛的核小体变得十分紧密,不利于特定基因的表达,包括一些肿瘤抑制基因。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histonedeacetylaseinhibitors，HDACi）则可通过提高染色质特定区域组蛋白乙酰化，从而调控细胞凋亡及分化相关蛋白的表达和稳定性，诱导细胞凋亡及分化，成为一类新的抗肿瘤药物。HDACi不仅对多种血液系统肿瘤和实体瘤具有良好的治疗作用，而且具有肿瘤细胞相对较高选择性和低毒的优点。已有几种HDACi进入临床试验阶段。然而，由于缺乏分析HDAC活性的方便工具，筛选HDACi复合物是较难的。艾美捷向您推荐美国著名品牌BioVison的HDAC(HistoneDeacetylase)组蛋白去乙酰化酶活性测定及药物筛选全系列方案：中英文品名品牌货号规格详情HDAC组蛋白去乙酰化酶活性荧光分析试剂盒-HDACFluorometricAssayKitBiovisionK330-100100次分析详情HDAC组蛋白去乙酰化酶活性比色分析试剂盒-HDACColorimetricAssayKitBiovisionK331-100100次分析详情HDAC组蛋白去乙酰化酶抑制剂药物筛选试剂盒-HDACInhibitorDrugScreeningKitBiovisionK340-100100次分析详情其中，艾美捷推荐的HDAC组蛋白去乙酰化酶活性荧光分析试剂盒-HDACFluorometricAssayKit（货号K330-100）和HDAC组蛋白去乙酰化酶活性比色分析试剂盒-HDACColorimetricAssayKit（K331-100）主要用于检测样本哺乳动物组织细胞粗提液、细胞培养上清、尿液、血浆、血清、纯化的蛋白液等生物样本溶液内HDAC的活性，前者采用的是荧光法，后者采用的是底物显色法。试剂盒内分别提供了荧光团或显色团标记的底物，经样本内HDAC酶脱乙酰后被激活，随后，赖氨酸显象剂作用后产生荧光团或发光团。最终的发光团可以用ELISA读板仪或酶标仪读取分析，荧光团则可以通过荧光读板仪或荧光计分析。试剂盒里也提供了Hela细胞核提取物（HeLaNuclearExtract）作为阳性对照，以TrichostatinA作为阴性对照。此分析很适合用于高流通量筛选。而HDACi（组蛋白去乙酰化酶抑制剂）药物筛选试剂盒-HDACInhibitorDrugScreeningKit（K340-100）采用了与HDACFluorometricAssayKit（货号K330-100）类似的原理，在试剂盒内提供了Hela细胞核提取物作为常规检测环境，通过添加待测样品，使用荧光团标记底物，通过测定HDAC的酶活性，分析待测样本内HDAC抑制剂的含量。该HDAC活性抑制剂药物筛选试剂盒可用于哺乳动物组织细胞粗提液、细胞培养上清、尿液、血浆、血清、纯化的蛋白液等生物样本溶液内HDAC的抑制剂药物筛选，非常适合用于高流通量药物筛选。BioVision位于美国加州的PaloAlto，是世界上首屈一指专著于凋亡和细胞信号研究的公司。其产品覆盖细胞凋亡研究、能量代谢、细胞/组织蛋白提取、氧化应激与损伤、代谢与肥胖症、细胞增殖与毒性、信号转导、干细胞研究等。作为多家知名品牌的代理，艾美捷与BioVision一起为研究者们提供最好、最新的细胞生物学研究工具而不断扩大产品及服务质量。如果您对上述HDAC(HistoneDeacetylase)活性测定及药物筛选产品和方案感兴趣，请致电全国免费电话400-6800-868转801/802/803或者027-84454412/4876到艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。免疫组化编辑词条添加义项名B添加义项?所属类别:词条暂无分类免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。基本信息中文名称免疫组化外文名称immunocytochemistry应用免疫学基本原理称为免疫组织化学技术目录1基本简介2分类3作用4操作步骤5判定分析折叠编辑本段基本简介免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，免疫组化即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。折叠编辑本段分类免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。折叠编辑本段作用实验所用的标本实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。实验所用的抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。常用的染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。操作步骤一免疫组化（LP法）操作步骤1．切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行⒉缓冲液洗3min/2次。⒊为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10-15分钟。⒋缓冲液洗5min/2次。⒌滴加UltraVBlock，在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。（注：孵育不要超过10分钟，否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有5－10%正常羊血清，这一步可以省略。）⒍缓冲液洗5min/2次。⒎滴加一抗工作液37℃孵育1－2小时。（具体孵育时间和温度由试验者最终决定）⒏缓冲液洗5min/2次。9．滴加PrimaryAntibodyEnhancer（增强子），在室温下孵育20分钟。10．缓冲液洗5min/2次。11．滴加HRPPolymer（酶标二抗），在室温下孵育30分钟。（注：HRPPolymer对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。）12．缓冲液洗5min/2次。13．向1mlDABPlusSubstrate（或AECPlusSubstrate)中滴加1-2滴DABPlusChromogen（或AECPlusChromogen），混匀后滴加到切片上，孵育3－15分钟。（具体时间由染色深浅决定。）14．自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。二．免疫组化操作步骤⑴、石蜡切片脱蜡至水。⑵、3%H2O2室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。⑶、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟x2（如需抗原修复，可在此步后进行）。⑷、5-10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟，倾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。⑸、PBS冲洗，5分钟x3次。⑹、滴加适量生物素标记二抗工作液，37℃孵育10-30分钟。⑺、PBS冲洗，5分钟x3次。⑻、滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液，37℃孵育10-30分钟。⑼、PBS冲洗，5分钟x3次。⑽、显色剂显色3-15分钟（DAB或NBT/BCIP）⑾、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。三.免疫组化染色步骤冰冻切片4-8um，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟x3，用过氧化氢孵育5-10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。判定分析免疫组化染色（IHC）从实验结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析，图片的确定与选取，相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容，只有严格的实验设计，标准的实验操作，专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求，这点对于形式为腹水，上清，培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确，一般而言，客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析，例如是简要还是详细的描述实验结果，需要实验数据否，图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与，则事先申明。