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农药残留试剂盒评测方案1.评测项目：农药残留2.判定标准：2.1检测酶的活力：吸光度在≥0.3之间。2.2假阳性率≤152.3假阴性率≤52.4重复性：cv，批间差异≤10%。2.5最低检出限：最低检测出样品中农药残留量的抑制率越接近≥50%范围的能力。2.6样品适用范围：样本中的色素和次生物质对试剂本身影响最低。3.评测方法：3.1样品准备：将洗净和浸泡20min的白菜，韭菜，菠菜剪成碎片，备用。3.2仪器耗材准备：多通道IQMC，恒温箱，电子天平，容量瓶（500ml），比色皿（10个），移液枪（5ml，200ul），枪头（5ml，200ul），样品杯，离心管（50ml）。3.3实验原理：酶抑制率法。在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类的农药对胆碱酯酶有抑制作用，其抑制率和农药的浓度呈正相关。正常情况下，胆碱酯酶催化底物水解，其水解产物和显色剂反应，生成黄色物质。用分光光度计在412nm处一定时间的吸光度变化，计算出抑制率。抑制率≥50%，说明样本中农药超标。抑制率=[（△A0-△At）/△A0]X100%，△A0：空白溶液3min的吸光度变化值。△At：样品溶液3min的吸光度的变化值。3.4配置试剂：3.4.1配置缓冲液：取一包缓冲液粉末放入三角烧瓶中，取一定量去离子水将缓冲液粉末包冲洗干净，然后定容到500ml，充分溶解，备用。3.4.2配置显色剂：取配置好的缓冲液10ml加入到显色剂的瓶中，混匀。3.4.2配置酶制剂：取去离子水10ml加入到酶制剂的瓶中，混匀。3.5步骤说明：3.5.1测试酶活力：取去离子水2.5ml到比色皿中，分别加入酶溶液，显色剂100ul，放入相应的通道内，然后调零。然后放入恒温箱温育15min。然后加入底物100ul放入通道内，测试吸光度。3.5.2实验步骤：3.5.2.1空白调零：取缓冲液2.5ml到比色皿中，分别加入100ul的酶制剂和显色剂后，放入恒温箱中温育15min。将温育好的比色皿，放入100ul底物放入仪器的相应通道里，点击点击调零。3.5.2.2样品检测：取3.1中白菜样品2g到5oml离心管中，加入10ml缓冲液浸泡2min。取浸泡好的样品液2.5ml到比色皿中，分别加入100ul的酶制剂和显色剂后，放入恒温箱中温育15min。将温育好的比色皿，放入100ul底物放入仪器的相应通道里，点击检测。3.5.3实验具体方案：3.5.3.1假阴性率，假阳性率，重复性的判断：分别制备3.1中浓度为0.5ppm丙溴磷，0.2ppm的灭多威，0.02ppm的克百威，0.2ppm的敌敌畏，0.1ppm的敌百虫的白菜样品。按照3.5.2.2的步骤分别做10次重复实验，观察结果。（表一）表一丙溴磷加标量0ppm0.5ppm次数1234567891012345678910灭多威加标量0ppm0.2ppm次数1234567891012345678910克百威加标量0ppm0.02ppm次数1234567891012345678910敌敌畏加标量0ppm0.2ppm次数1234567891012345678910敌百虫加标量0ppm0.1ppm次数12345678910123456789103.5.3.2最低检测限：别制备3.1中浓度为0.5ppm的丙溴磷，敌敌畏的灭多威，0.02ppm的克百威的白菜样品。按照3.5.2.2的步骤分别做5次重复实验，观察结果。（表二）表二丙溴磷0ppm0.25ppm0.25ppm11234512345敌敌畏0ppm0.1ppm0.2ppm11234512345克百威0ppm0.01ppm0.02ppm112345123453.5.3.2样品适用范围：根据国家发布的指导意见，以白菜为对比，取相对应对农残试剂产生假阳性的样品，以0.5ppm的丙溴磷为例，按照3.5.2.2的步骤分别做5次重复实验，观察结果。（表三）表三浓度样品白菜韭菜菠菜0ppm1112223334445550.5ppm1112223334445554结论综上所述：①表格一通过计算可以得出假阳性率和假阴性率，以及试剂盒的批间差CV空白样品中假阳性率=阳性个数/总阴性数X100%加标样品中假阴性率=阴性个数/总阳性数X100%CV=标准偏差/平均数②表格二可以看出，1/2检测限能否检测出阳性。③表格三通过结果可以看出样品本身会不会对试剂本身产生假阳性的结果。注意事项：1.当酶制剂如果无法达到要求，本实验的实验数据无法验证各项指标。2.实验过程中，一定要注意时间和温度的控制。3.准备样品时，清洗之后开始实验是为了去除本底对试剂的干扰。