第二章 中药制剂的鉴别3

pyh2014第二章鉴别pyh2014鉴别：用一定的分析方法和技术确定中药制剂的真伪。性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别pyh2014第一节性状鉴别性状是指去除包装后的性状，对药品颜色和外表的感官描述。包括外观形状、大小、颜色、表面特征、质地、气味等性状与原料质量、工艺有关pyh2014一、性状鉴别的内容颜色：与所含成分、制备工艺有关形态：物理聚集态如：固态、液态等形状：与设备模具有关气：香、芳香、清香、腥臭、特异味：甜、酸、苦、涩、辛、凉、咸、辣、麻表面特征：表面光滑、粗糙其他：触感、光泽第一节性状鉴别pyh2014丸剂：外观应圆整均匀、色泽一致，大蜜丸和小蜜丸应细腻滋润、软硬适中。蜡丸表面应光滑无裂纹，丸内不得有蜡点和颗粒。二、各种剂型的性状描述pyh2014第一节性状鉴别水丸沉香化气丸：本品为灰棕色至黄棕色的水丸；气香，味微甜、苦。梅花点舌丸：本品为朱红色的包衣水丸，除去包衣后棕黄色至棕色；气香，味苦、麻舌。蜜丸艾附暖宫丸：本品为深褐色至黑色的小蜜丸或大蜜丸；气微，味甘而后苦、辛。散剂玉真散：本品为黄白色至淡黄色的粉末；气香，味麻辣。pyh2014三、物理常数溶解度、折光度、比旋度、熔点、凝点、相对密度、黏度等第一节性状鉴别例如：薄荷油相对密度在25℃时为0.888-0.908旋光度在25℃时为－17˚～－24˚，折光率为1.456－1.466pyh2014第二节显微鉴别利用显微镜观察中药制剂中原药材的组织构造、细胞形状或内含物的特征，从而鉴别中药制剂的处方组成。操作简便，准确可靠，耗费少pyh2014第二节显微鉴别原理：药材组织构造具有专属性和稳定性一、特点：与单味药材的显微鉴别相比要复杂得多。各原药材与辅料之间的显微特征相互干扰。要对处方中各味药材逐一分析比较，选取制成制剂后的可以重现的各味药材的主要特征作为该制剂的定性鉴别特征。pyh2014第二节显微鉴别例如：蛇胆川贝散川贝母用淀粉粒作指标牛黄解毒片大黄用草酸钙簇晶作鉴别特征制片方法：一般取少量粉末置载玻片上，摊平，用适当试剂（甘油醋酸、水合氯醛）分散。pyh2014制片方法散剂、胶囊剂—直接制片片剂—刮取或研磨后制片水丸—研磨后制片蜜丸解离组织制片pyh2014【处方】熟地黄160g山茱萸(制)80g牡丹皮60g山药80g茯苓60g泽泻60g【鉴别】(1)取本品，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm,脐点短缝状或人字状。不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色，直径4～6μm。薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群。第二节显微鉴别六味地黄丸pyh2014第三节理化鉴别法理化鉴别法：利用物理的、化学的或物理化学的方法对制剂中所含的化学成分或化学成分群进行定性鉴别，从而判断制剂的真伪。一般化学反应升华法光谱法色谱法薄层色谱法指纹图谱和特征图谱pyh2014要点：1.分析前对样品进行分离精制，除去干扰鉴别反应的物质，改善鉴别反应的专属性。2.慎重使用专属性不好的反应，如：泡沫反应三氯化铁的显色反应3.利用阳性对照、阴性对照，防止出现假阳性。第三节理化鉴别法pyh2014【鉴别】取本品1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液1～2滴,即生成黄棕色沉淀。马钱子散中马钱子的鉴别pyh2014二、升华法利用中药制剂中具有升华性质的化学物质，在一定温度下能升华而与其他物质分离，再通过一定的方法鉴别升华物。显微镜颜色反应可见光紫外光化学试剂pyh2014pyh2014三、光谱法荧光法可见－紫外光谱法红外光谱法其他（如X-射线衍射）pyh20141、荧光法一些中药材中能产生荧光的物质，经可见、紫外光照射后，或经试剂处理可发出荧光。通常的操作方法：取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外灯下（365nm或254nm)观察，有时是加一定试剂后进行观察pyh2014pyh20142.可见－紫外分光光度法中药材中有些化学成分在可见紫外光区有选择性吸收注意：各成分间干扰大，专属性差，需先将样品纯化pyh2014鉴别方法：规定吸收波长法最常用对照品对比法规定吸收波长和吸收值法规定吸收波长和吸收度比值多溶剂光谱pyh2014鉴别：取本品15丸，加少量水，搅拌使溶解后用水稀释至100ml，摇匀，取2ml,加水至25ml，摇匀，照分光光度法（附录ⅤA）测定，在283nm的波长处有最大吸收。例：复方丹参滴丸pyh2014UV-Vis例1白头翁汤及混有伪品药材的紫外吸收谱线白头翁汤白头翁λmax276nm333nm萎陵菜λmax279nm320nm例2天麻与其易混品种的λmax（50%乙醇提取）天麻263、225、274nm紫茉莉根206、282nm大丽菊根250、267、280、294、305、334nmpyh2014多溶剂光谱：选用不同极性的溶剂按一定次序提取样品，将样品分为若干溶剂组，然后测若干吸收光谱。条件：处方和工艺固定、原料药品质恒定、具有可靠的对照物或对照图谱pyh20143.红外分光光度法（特点：快速简单准确样品量少）固体：溴化钾压片液体：夹片法与标准红外光谱图对照中药制剂成分复杂，药材产地不同所含成分有差异，但只要所含成分的质和量大致相同，红外光谱就应呈现很大的相似性。混合物的红外光谱图（机械叠加，分子间作用除外）pyh2014不同厂家丹参配方颗粒4000.03000200015001000400.0cm-1A3392292816081521141613541266114810721028869799779691590339029291606152014151287114610718707985903390293016061520141612871144107087179959134282927164414171384115610801021848762707577Wavenumbers/cm-1Absorbance丹参喷雾粉末厂家A产品厂家B产品糊精pyh2014近红外光谱法：不破坏样品、分析重现性好、可在线分析（结合聚类分析）4.x-射线衍射法：物质结构和成分分析的一种现代科学分析方法。物质组成、晶型、分子内成键方式、分子构型、构象决定其特有的衍射图x-射线衍射傅立叶指纹图谱法p33pyh2014四、质谱法：真空系统中将样品分子理解成带电的离子，对生成的离子质量和强度测定，形成m/z大小依次排列的图谱。联用HPLC、GC如HPLC-MS鉴别保健品中非法添加物pyh20144.色谱法：•纸色谱法以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质作固定相，以展开剂展开的分配色谱。供试品所显主斑点的位置、颜色（或荧光）应与对照品相同。pyh2014•薄层色谱法：最常用1.样品供试液的制备：提取－－净化单一溶剂萃取分段萃取各自成分不同的溶解度液液萃取固液萃取pyh20142、薄层色谱法所用材料：薄层板吸附剂或载体涂布器点样器展开缸显色或检测仪器pyh20143、操作方法薄层板制备－－点样－－展开－－检测铺板饱和晾干预平衡活化pyh2014一般操作步骤为：薄层板制备（制板）→点样→展开→检测pyh2014pyh2014pyh2014原点起始线≥5mm≥8mm8~15cm1~1.5cm溶剂前沿展开剂液面原点（展开距离）(点样位置)pyh20144、薄层色谱图的记录与保存5、影响薄层色谱分析的主要因素（1）样品的预处理及供试液的制备（2）展开剂的优选（3）吸附剂活性和相对湿度的影响（4）温度的影响pyh2014不同相对湿度下苍术的TLC图pyh201410℃26℃不同温度下人参的TLC图pyh20146、对照物的选择（1）对照品对照（2）阴阳对照阳性对照液制剂中要鉴别的某种药材，按制剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取阴性对照液从制剂处方中减去要鉴别的某种药材，剩下的各味药按制剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取pyh2014（3）采用对照药材和对照品同时对照准确检验出制剂的药材投料的真实性对照品只是药材中的一个成分pyh2014导赤丸pyh2014（4）薄层扫描法一定波长的光扫描在薄层板上，薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱用于中药制剂的鉴别测含量用得多，鉴别用得少pyh2014步骤：薄层板制备－－样品和对照液制备－－点样－－展开－－显色（定位）－－上机扫描－－色谱峰确认pyh2014pyh2014四、气相色谱法主要用于含挥发油或挥发性成分的制剂用tR进行鉴别对照品可用有效成分，也可用原药材的提取液pyh2014pyh2014五、高效液相色谱法•用tR进行鉴别•对于复杂的未知成分，还可在样品中加对照品观察峰是否增高•至少用两种不同的固定相和分离条件与对照品比较保留时间pyh2014中药指纹图谱概念：系指某种（或某产地）中药材或中药制剂经适当处理后，采用现代分析技术，得到的能够标示其特性的共有峰的色谱或光谱图。主要用于鉴别真伪和评价其质量的稳定性和均一性pyh2014属性：整体性模糊性整体性在辩认指纹图谱时首先是辨认图谱或图像的完整的“面貌”模糊性诸峰的峰位有一定的游移，各峰之间的百分比也会此消彼长，不同实验室或样品之间完全重复的难度较大，一般允许有20％的波动，pyh2014意义：中药作用的特点－－多成分、多途径、多靶点中药指纹图谱较全面地反应中药中所含内在化学成分的种类与数量进而有效地表征其质量。对于规范药材及中药制剂生产，进一步研究中药的作用机理、物质基础和量效关系，提高质量都具有重要意义。pyh2014中药指纹图谱的分类1.TLC2.HPLC3.GC4.PHCE(高效毛细管电泳)5.UV专属性较差，辅助方法6.IR7.NMR(核磁共振)反应有机分子中氢或碳的类型8.MS（质谱）9.X－射线衍射10.DNA特征、专属pyh2014中药指纹图谱建立的方法与步骤建立的原则1.系统性是指指纹图谱中所反映的化学成分应包括中药有效部位所含大部分成分的种类，或指标性成分的全部。2.特征性是指指纹图谱中所反映的化学成分信息应具有较强的选择性，特征地区分中药地真伪和优劣峰位的顺序、比值在一定范围固定，随药材品种不同而产生差异，以区分药材来源、产地pyh2014稳定性是指所建立的指纹图谱在规定的方法、条件下的耐用程度，即不同操作者、不同实验室所重复做出的指纹图谱应在所允许的误差范围之内。要求规范操作、建立评价系统pyh2014方法与步骤1.样品收集：样品具有代表性不同产地、不同采收加工方式的样品pyh20142.试验方法与条件选择：根据分析试样中所含化学成分的理化性质、选择适宜的测定方法。通过比较试验，优选条件，获得具有代表样品特征的指纹图谱。3.数据分析、样品评价和方法检验pyh2014注意：1.样品制备：化学成分的提取、富集，是其成分较多地在指纹图谱中反映出来2.非共有峰面积应控制在一定范围内3.中药材、有效部位、中间体和注射剂指纹图谱的相关性保证制备工艺的科学性和稳定性pyh2014指纹图谱方法认证1.需要证明获取的指纹图谱能够表征该中药产品的化学组成。2.各原药材的化学组成特征应该在中药产品的谱图中得到体现。pyh2014中药指纹图谱实验方法验证所包括的项目有：专属性精密度（重复性和重现性）耐用性pyh2014总之：中药的指纹特征必须具有“共性”又具有“个性”共性是指能体现出不同产地、不同产收期的同种药材（或不同批号的同一种成药）共同具有的某些特征。pyh2014“个性”包含两层含义：（1）必须反映出该药材（或成药）有别于其它任何药材（或成药）；（2）对于中药材指纹特征还能反映出产地和采收期、加工、炮制不同而造成的差异；对于中成药则能反映出同一产品不同批次间的质量差异，差异越小，说明药材（或成药）的质量稳定性越好