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影响酶活性的因素实验三组一、实验目的通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。（以唾液淀粉酶为例）二、实验原理唾液淀粉酶可以分解淀粉二、实验原理淀粉(与碘呈蓝色)紫色糊精(与碘呈紫色)红色糊精(与碘呈红棕色)无色糊精(与碘不呈色)麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖在不同的温度、pH、及添加激活剂和抑制剂的条件下，将唾液淀粉酶加入到淀粉溶液中，作用一定时间以后，取出反应液，加入碘指示剂，比较各种条件下，反应液与碘反应后颜色的差异，由此说明淀粉酶活性的变化。二、实验原理班氏试剂：即本尼迪特试剂（Benedict），是斐林溶液的改良试剂，与醛或醛（酮）糖反应也生成Cu2O砖红色沉淀。它是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液。柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生OH-，与柠檬酸钠-碳酸钠溶液和CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH-结合，生成Cu（OH）2，Cu（OH）2与葡萄糖中的醛基反应生成红黄色沉淀。优点：可以存放备用，避免斐林溶液必须现配现用的缺点。二、实验原理三、实验试剂及器材1.试剂碘液蒸馏水班氏试剂0.1%NaCl1%淀粉溶液0.1%CuSO4溶液pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液2.器材电炉制冰机白瓷板恒温水浴锅试管、滴管四、实验流程1.唾液淀粉酶的制备取干净的水杯，盛上蒸馏水。用蒸馏水漱口。口含约20ml蒸馏水，1-2分钟后，吐入一干净烧杯中，棉花过滤。酶的特异性试剂（滴）管号1231%淀粉1%蔗糖pH6.8缓冲液稀释唾液煮沸的唾液10-105-10-10-5-10105-各管混匀后，置37℃水浴中保温10min班氏试剂2020203.将上述各管放沸水浴中煮沸3~5min，观察记录结果1.制备稀释唾液。2.取3支试管，编号，按下表操作1.制备稀释唾液。2.取4支试管，编号，按下表操作管号1%淀粉pH6.8缓冲液混匀后,预温10min蒸馏水稀释唾液保温130滴10滴室温10滴-37℃230滴10滴37℃-10滴37℃330滴10滴冰水-10滴冰水430滴10滴100℃-10滴100℃3.以2号管为标准管每隔2min做碘反应。到接近浅红时，取出各管，分别做碘反应,观察结果。4.将4只试管均放入37℃水浴中，5-10min取出各管，分别各取1滴做碘反应，观察结果。温度对酶活性影响pH对酶活性影响试剂（滴）管号123451%淀粉3030303030磷酸盐缓冲液1010101010pH6.85.06.886.81.制备稀释唾液。2.取5支试管，编号，按下表操作3.以5号管为标准管，加10滴稀释唾液放37℃水浴中，测定淀粉水解所需时间。4.1号管加10滴蒸馏水，2~4号管加10滴稀释唾液，以1min间隔，取样，做碘反应。5.观察各管颜色，确定其最适pH。激活剂和抑制剂对酶活性影响1.制备稀释唾液。2.取3支试管，编号，按下表操作管号1%淀粉pH6.8缓冲液0.1%NaCl0.1%CuSO4蒸馏水稀释唾液110滴5滴--5滴5滴210滴5滴5滴--5滴310滴5滴-5滴-5滴3.将3只试管均放入37℃水浴中，以1号管为标准管每隔2min做碘反应。到接近浅红时，取出各管，分别做碘反应,观察结果。操作注意事项：1.唾液稀释（方法）2.要求器材干净，避免杂质干扰。3.取样体积尽可能准确。4.准确计时和依次加液，各管反应时间应严格控制一致。五、实验结果根据实验结果，说明各种因素对唾液淀粉酶活性的影响情况。