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Sporozoans孢子虫.Plasmodiumvivax(P.v)间日疟原虫.Plasmodiumfalciparum(P.f)恶性疟原虫.Toxoplasmagondii(T.gondii)刚地弓形虫.Cryptosporidium隐孢子虫.Sarcocystissuihominis猪人肉孢子虫.Blastocystishominis人芽囊原虫PurposeandRequirements.Mastermorphologicalcharacteristicsoferythrocyticcycleofplasmodiumvivax;.Mastermorphologicalcharacteristicsofearlytrophozoiteandgametocyteofplasmodiumfalciparum;.Familiarwithmorphologicalcharacteristicsofexoerythrocyticstageandthephasesinthemosquito;.Familiarwithpreparationofbloodfilmandstain;.FamiliarwithmorphologicalcharacteristicsoftrophozoiteandcystofToxoplasma;1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8拿到玻片标本后请马上检查核对是否有漏、重复或破损，有问题的请马上举手报告老师！No.原-5:间日疟原虫,R,T,S,GP.vivax,R,T,S,GNo.原-6:恶性疟原虫,环状体P.falciparum,RingNo.原-7:恶性疟原虫,配子体P.falciparum,GametocyteNo.原-8:刚地弓形虫滋养体T.gondiitrophozoite注意：①在观察玻片标本前，先将显微镜光线调到最强！②本次课只使用10倍镜和油镜；No.原-8:刚地弓形虫滋养体T.gondiitrophozoiteOvaltocrescent-shaped,and1nucleus1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8要求拍照No.原-7:恶性疟原虫,配子体falciparum,GametocyteGametocyte,GMaleG/Microgametocyte.Sausageshape腊肠形.ChromatinisdiffuseFemaleG/Macrogametocyte.Cescentshape新月形.Chromatiniscompact1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8要求拍照,不分雌雄Observation:glassslideNo.原-6to原-8No.原-6:恶性疟原虫,环状体P.falciparum,Ring.Chromatinisadot-like;.Cytoplasmisthedelicatering,blue-stained;.Occupyone-fifthofRBCindiameter.multipleinfection早期滋养体/环状体Theearlytrophozoit/ringform，R要求拍照No.原-5:间日疟原虫,R,T,S,G1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8早期滋养体/环状体Theearlytrophozoit/ringform，R.核1个,点状.胞质环形,胞质与核之间有空泡,呈戒指状,.大小约为红细胞直径的1/3.被寄生红细胞无改变No.原-5:间日疟原虫,R,T,S,G1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8晚期滋养体/大滋养体thelargetrophozoit,T被寄生红细胞体积稍增大,色淡,出现鲜红薛氏小点.核1个,.胞质增多变形,形状不规则，有空泡，.胞质内出现棕褐色烟丝状的疟色素.要求拍照之一No.原-5:间日疟原虫,R,T,S,G1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8未成熟裂殖体Immatureschizont,IMS.被寄生红细胞体积增大,色淡,出现鲜红薛氏小点..核分裂,数目12个,.胞质渐变圆，空泡消失,.疟色素分散在胞质中.要求拍照之一No.原-5:间日疟原虫,R,T,S,G1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8成熟裂殖体Matureschizont,MS被寄生红细胞体积增大,色淡,出现鲜红薛氏小点.核分裂,数目12个,.胞质分裂,围绕核,形成裂殖子,数目12-24个,.疟色素集中成1-2团，位于虫体中央或一侧.要求拍照之一No.原-5:间日疟原虫,R,T,S,G1.ObservationofglassslideNo.原-5至No.原-8MaleG/MicrogametocyteNucleusisdiffuseandcentric疏松,近中央FemaleG/MacrogametocyteNucleusiscompactandeccentric致密,偏向一侧Gametocyte,G.Cytoplasmisroundtooval,maybealmostfillRBC;.Pigmentarescattered.疟色素均匀分布于其中要求拍照之一2.示教内容学习:1）图片及视频示教：Oocystlocatedonthemidgutwallofmosquito蚊胃壁上囊合子(卵囊)2.示教内容学习:1）图片及视频示教：Sporozoite子孢子2.示教内容学习:1）图片及视频示教：Exoerythrocyticstage红外期裂殖体2.示教内容学习:1）图片及视频示教：T.gondiioocyst弓形虫卵囊Sporocystand4sporozoite孢子囊和4个子孢子2.示教内容学习:1）图片及视频示教：Cryptosporidiumoocyst隐孢子虫卵囊Sporozoite子孢子Residualbody残留体Modifiedacid-faststain2.示教内容学习:1）图片及视频示教：Sarcocystissuihominis猪人肉孢子虫Oocyst卵囊Sporocyst孢子囊Sarcocyst肉孢子囊2.示教内容学习:1）图片及视频示教：Blastocystishominis人芽囊原虫：Cyst包囊：Vacuolatedform空泡型：Granuiarform颗粒型：分裂状态2）镜下示教：请拿上实验指导移步到示教显微镜，观察时请勿移动视野！.间日疟早期滋养体/环状体P.vivax,R.间日疟晚期滋养体/大滋养体P.vivax,T.间日疟未成熟裂殖体P.vivax,IMS.间日疟成熟裂殖体P.vivax,MS.恶性疟原虫,配子体P.falciparum,G.恶性疟原虫,环状体P.falciparum,R.红外期裂殖体Exoerythrocyticstageschizont.蚊胃壁上囊合子(卵囊).疟原虫子孢子Sporozoite.弓形虫卵囊T.gondiioocyst.刚地弓形虫滋养体T.gondiitrophozoite2.示教内容学习:Preparationofbloodfilmandstain血涂片制作和染色3.Operationandobservation操作和观察1.推血片：用剪刀剪去鼠尾未端少许，取洁净玻片一张，从鼠尾取血一小滴置玻片中部，另取一张玻片作推片，将推片的短边接触血滴，待血液向两侧扩散后，以两玻片呈30-40°角，将推片自右向左匀速快捷向前推进，即成薄血膜。理想的薄血膜应是血量和宽度适中，平滑不起波浪，未端成舌形。薄血膜制作和染色3.Operationandobservation操作和观察玻璃板橡皮筋滴加染液2.固定：待血片阴干后，用甲醇固定薄血膜，自然晾干。薄血膜片制作和染色3.Operationandobservation操作和观察3.染色：将玻片血膜面朝下，一端搁在铁丝上(如右图)，用吸管滴注染液于玻板与血片之间，使染液与血膜完全接触，染色20min。染液按1毫升水加4滴吉氏原液的比例(1∶4)配制。4.冲洗：自来水轻轻冲洗血膜，晾干镜检。小结3.Operationandobservation操作和观察染色:20-30mins，自来水冲洗推血片Dry固定：甲醇DryDry观察完后，玻片放入指定锅内知识花絮:各种血细胞2.Eosinophilicgranulocyte3.Basophilicgranulocyte4.Neutrophilicgranulocyte5.Lymphocyte6.Mononuclearcell7.Bloodplatelet/thrombocyte1.Erythrocyte知识花絮:伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)分布于非洲扎伊尔的加丹山区森林中，自然宿主为丛林鼠，蚊媒为杜氏按蚊。红内期裂体增殖周期约24h，早期滋养体为典型的环状体，偶见双核型，晚期滋养体近似圆形，阿米巴样外形不典型，成熟裂殖体含裂殖子数在小鼠为6-10个，配子体形状类似人间日疟原虫。疟色素细小，黑色或金黄色。多虫寄生在同一红细胞极为普遍(注意与裂殖体鉴别)。被寄生的红细胞胀大。实验室里长期用红内期原虫转种，不易见到配子体。接种小鼠方法：取液氮保种的伯氏疟原虫，解冻后用生理盐水稀释。无菌操作，给健康小白鼠作腹腔内注射，每只1ml，感染后3-5天，外周血即可查到原虫。为避免在同一部位重复看，请有序观察！友情提醒:油镜下观察原虫时1.何谓疟疾发作？机理如何？2.试述引起疟疾病人贫血的原因？3.请运用疟原虫在人体内的发育解释疟疾的周期性发作、复发、再燃？4.人群中刚地弓形虫感染普遍的原因有哪些？5.免疫功能低下病人易感染哪些寄生虫病？如何诊断？课后思考：患者，女，47岁，因外伤入院手术。术前血常规，血红蛋白10.3g/L，红细胞3.53*1012/L，白细胞21.6*109/L。术中输血400ml，术后第9天起不规则发热，实验室检查血红蛋白8.6g/L，红细胞2.7*1012/L，白细胞21.6*109/L，晚幼红细胞30/100个白细胞。成熟红细胞易见破碎红细胞，红细胞内查见疟原虫小滋养体，确诊为恶性疟。经三联抗疟治疗后痊愈。问题：1．该患者有可能经什么方式感染恶性疟原虫？2.本病诊断依据是什么？课后讨论Case1患者，男，30岁，因头痛高热3天入院治疗，刚援非回国。血常规检查：血红蛋白15g/L，红细胞4.54*1012/L。入院后第二天出现昏迷，持续高热，反复多次镜检，于入院后第4天在红细胞内查见疟原虫小滋养体，同时在骨髓涂片中查见疟原虫小滋养体，确认为恶性疟原虫，会诊后确诊为恶性脑型疟。问题：1．从疟疾流行区(如非洲)工作、旅游、学习归国人员，如发现原因不明的高热，应考虑其可能患了什么病？应该做什么检查？2.试述脑型疟的临床表现及致病机制？课后讨论Case2患者，男，23岁，海南省某县农民。10月上旬每天寒战后发热，伴头痛、全身酸痛，当地卫生院拟诊“感冒”，给予伤风胶囊、维C银翘片、青霉素等3天，无效，收治入院。入院后体检：体温39.5℃，贫血貌，RBC2.1*1012/L，脾肋下3cm，血涂片镜检红细胞内查见恶性疟原虫小滋养体及配子体，用氯喹+伯氨喹治疗，症状很快消失，病人感觉良好，治疗三天后病人要求出院。11月下旬，患者又出现前述症状，并有恶心、呕吐、剧烈头痛，连续6天，因昏厥、神志不清、抽搐，住进乡医院抢救。入院体检：体温40℃，贫血貌，瞳孔对光反射迟钝，颈强直；RBC1.5*1012/L，WBC3.6*109/L,血涂片镜检红细胞内查见某种寄生虫，于送县医院途中死亡。问题：1．请考虑诊断是什么病？2.患者11月下旬发病是否与10月上旬的疾病有关？为什么？患者每天寒战发热是什么原因引起的？课后讨论Case3