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评价细胞毒活性的两周六日药物的细胞毒实验•对正常细胞，是药物的毒理实验•对肿瘤细胞，是药物的抗癌活性筛选实验•关键词：细胞、细胞培养技术、细胞实验细胞培养室的安全防护•紫外线的防护•细胞污染物的防护•有毒试剂的防护•液氮的防护星期一一细胞房的清洁无菌室和隔离间—新洁尔灭/75%乙醇超净台—擦洗，紫外灯照射30min以上CO2孵箱的调试—擦洗后高温消毒二实验器材的清洗与消毒进口：离心管、培养瓶、冻存管玻璃仪器：滴管、储液瓶滤器：蔡氏过滤器、滤膜枪头、EP管一孵育箱调试、烧制新鲜三蒸水二培养液的配制培养液—维持体外细胞生存和生长天然培养基：血清、血浆、组织提取液优点：培养效果好缺点：成分复杂、不易控制、价格昂贵合成培养基：DMEM、RPMI-1640优点：标准化生产、组分和含量固定、成本低缺点：培养效果不好星期二目前常用的培养基合成培养基：80%-95%碳酸氢钠：2.0g青、链霉素：各100万单位/毫升血清：100ml三蒸水：定容至1000ml培养液的灭菌：蔡氏过滤器（0.22-0.45μm滤膜）培养液的保存：4℃，30天三缓冲液的配制和灭菌缓冲液：保持细胞存活，但不使其生长NaCl:8.0gKCl:0.2gNa2HPO4·H2O:1.56gKH2PO4:0.2g三蒸水：定容至1000ml缓冲液的灭菌：高压消毒，加针头星期五一细胞的选择贴壁细胞：形状不规则，铺展开悬浮细胞：球形培养液的选择：原细胞生存的培养液环境二细胞的复苏37℃迅速解冻：稀释DMSO换液：去除死细胞星期日一细胞的传代贴壁型：0.25%胰酶消化液，吹打悬浮型：分瓶二细胞的冻存冻存液的配制：10%DMSO+90%培养液冻存液的灭菌：过滤冻存的细胞数：1*106个/ml，1ml冻存的操作：离心后加培养基，缓慢冻存—4℃半小时、-20℃3-5小时、-80℃过夜、液氮1年第二个星期三—细胞毒实验一细胞悬液的制备贴壁型细胞-消化悬浮型细胞-染色（胎盘蓝，苏丹红）二细胞悬液的计数1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个大格子细胞数/4)×n×104三细胞悬液的稀释合适的接种浓度（5*104—50*104个/ml）四种板：加入细胞悬100μl,每孔3000-10000个细胞五给药：给药体积25μl，计算浓度时注意稀释倍数培养基、PBS缓冲液、三蒸水、助溶剂（损伤大）悬浮型细胞：直接给药贴壁型细胞：4小时后观察基本已贴壁后给药Cell+drugCell+controlblankMTT法原理：MTT噻唑蓝。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下生成蓝色结晶，结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的结晶可在DMSO中溶解，利用酶标仪测定490nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。溶解多-颜色深-活细胞多-药效不好第二个星期五—检测药物活性MTT配制：5mg/ml,PBS，避光，用铝箔纸包好MTT加入操作：25μl贴壁型细胞-弃上清悬浮型细胞-直接加4小时后加DMSO操作：100μl贴壁型细胞-弃上清，加后摇床上摇匀悬浮型细胞-离心后吸出液体再加，摇匀统计数据—酶标仪抑制率=×100%加药组-空白对照组-空白1-使用细胞培养室须知遵守《细胞培养室使用规则》读懂《细胞培养从头学》做好《细胞培养室预约登记》填好《细胞培养室使用登记》细胞培养理论阶段—到此细胞培养实践阶段—任重而道远希望在今后工作过程中，大家相互配合，努力营造干净、整洁、运作良好的细胞培养环境。祝愿每个人实验顺利。