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实验四四大类微生物菌落及个体形态观察一、实验目的：比较四大类微生物菌落特征;学习自制水浸片观察霉菌的个体形态.二、实验原理1、菌落观察微生物菌落即微生物聚集在一起的群体结构。在自然界中，我们肉眼所见到的微生物都是以菌落状态存在，不同种类的微生物有其特定的群体结构。因此，根据群体结构（菌落特征），我们可以初步把它们“分门别类”作粗略鉴定。本实验通过对细菌、放线菌、酵母菌，霉菌等四大类微生物菌落特征的观察，学习以菌落特征来区分四大类微生物的基本方法。2、放线菌观察放线菌自然生长的个体形态的观察常用盖玻片插片培养法。采用盖玻片插片培养法，能使放线菌生长在盖玻片上，然后将长菌的盖玻片用镊子取出，贴放在载玻片上，用显微镜镜检可见到放线菌自然生长的个体形态。3、霉菌观察霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线菌大得多，分为基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝中又可分化出繁殖丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。孢子的着生方式及繁殖菌丝的形态是霉菌重要的分类依据.霉菌菌丝较粗大，可以直接挑取生长在平板中的霉菌菌体制水浸片观察。三、实验器材：1、活材料：培养2天的细菌平板;培养7-15天的5406放线菌平板；培养7天的根霉（Rhizpussp.）、青霉（Penicillumsp.）、曲霉（Aspergillussp.）平板；2、器材：酒精灯、镊子、载玻片、盖玻片、解剖针、显微镜等。四、实验步骤（一）菌落特征的观察用肉眼观察生长在琼脂平板上的各种霉菌菌落，并根据下列要求对每种霉菌的菌落特征加以描述。1.菌落的大小：局限生长或蔓延生长，菌落的直径和高度。2.菌落的颜色：正面和背面的颜色，培养基的颜色变化。3.菌落的形态：棉絮状、网状、疏松或紧密、同心轮纹、放线状的皱褶等。真菌的菌落细菌的菌落真菌的菌落特征可作为分类依据之一：四大类微生物菌落比较表培养基细菌放线菌酵母菌霉菌牛肉膏高氏一号马铃薯马铃薯菌落形状小点状，多为圆形，个别呈根状，辐射状圆形辐射状多为原形大小一般较小较小比细菌大而厚大颜色多样（乳白、灰白、灰、红、荧光等）正反面颜色相同多样（灰白、白红、粉红、蓝、紫、橙等）正反面颜色不同多为乳白色多样（白，灰蓝、绿黑、粉红等）正反面一般颜色不同表面状态光滑或粗糙，湿润或干燥，较粘初期似细菌菌落，晚期为粉状干燥表面湿润粘稠绒毛状，粉状，棉絮状，蜘蛛网状，菌丝疏松生长速度一般较快慢较快快与基质结合程度不牢牢固，不易挑取不牢较牢生长范围有限有限有限多为无限气味往往有臭味有泥腥味常有酒香味往往有霉味（二）个体形态特征的观察——插片法接种和分离工具1．接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀（二）个体形态特征的观察——插片法（以放线菌为例）①接种：挑取菌种在培养基平板上密集划线接种或取0.2ml菌液涂布平板；②插片：无菌操作用镊子取灭菌盖玻片以约45°角插入平板琼脂接种线上；③培养：将平板倒置，于28℃培养3-5天；④镜检：用镊子小心取出盖玻片，用纸擦去背面培养物，有菌面朝上放在载玻片上，通过显微镜直接用低倍镜和高倍镜镜检观察（在盖玻片菌体附着部位低价0.1%吕氏碱性美蓝染色后观察效果更好）。（三）霉菌观察方法制水浸制片观察法：在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，放入载玻片上的水滴中,盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）.标本片制好后，先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。注意观察菌丝有无隔膜，有无假根、足细胞等特殊形态的菌丝。注意其无性繁殖器官的形状和构造，孢子着生的方式和孢子的形态、大小等。根霉（Rhizopus)曲霉(Aspergillus)青霉（Penicillium)五、实验作业（1）参考书本63页表描述细菌、放线菌和霉菌的菌落形态.（2）绘出根霉、青霉、曲霉的个体形态图，并注明各部位名称。第四组值日生值日