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第三章消毒与灭菌教学目的：掌握常见消毒药品；熟练掌握消毒、灭菌技术；教学重点：消毒、灭菌技术在制种过程中，消毒与灭菌是不可缺少的环节。消毒是指采用物理或化学的方法杀死物体表面或环境中的部分有害微生物；灭菌是指用物理或化学的方法杀死物体中或环境中的一切微生物，也就是说灭菌的物体不再有任何活的微生物存在。消毒一、常用消毒药剂及使用方法1.高锰酸钾强氧化杀菌剂，常用0.1－0.2%的溶液（取高锰酸钾1g,加水1000ml）对床架、器皿、用具和皮肤表面消毒。随用随配2.过氧化氢氧化型消毒剂。市售品为30%或3%水溶液，常用1%浓度消毒器皿、用具和皮肤。组织分离时用20%溶液浸种菇1－3分钟。3.漂白粉常用2－5%的漂白粉溶液（取2－5g漂白粉加水100ml）洗刷菇房的墙壁、床架、地面和用具等表面消毒4.甲醛强还原性杀菌剂。市售品含量为37－41%喷雾：按1：5的比例配成水溶液。5.石炭酸5%水溶液消毒，配制时先用热水溶化再加入所需水量。6.来苏儿（煤酚皂）常用1－3%的溶液擦洗或用于手、用具的浸泡（2分钟）或空间喷雾。7.乙醇70－75%手、接种工具等表面消毒8.新洁尔灭原溶液为5%，常用0.25%浓度对手和器具作表面消毒。9.石灰（Cao)，熟石灰Ca(OH)2压盖10.多菌灵产品多为5%或25%可湿性粉剂，常用于培养基拌料消毒，添加量因品种而异。11.甲基托布津常见剂型为50%、70%可湿性粉剂，生产上用70%甲基托布津稀释1000－1500倍喷雾菇床消毒。二、消毒方法（一）空间消毒法1.化学药剂喷雾消毒法：2%－3%的来苏水、2－5%漂白粉、0.25%多菌灵或新洁尔灭、5%石炭酸、1000－1500mg/L甲基托布津、10%澄清石灰水等2.化学药剂熏蒸消毒法：A.甲醛－高锰酸钾氧化熏蒸法1m3空间用10ml甲醛加7g高锰酸钾熏蒸.B.气雾焚烧熏蒸消毒法：1m3空间用2g菇保1号等气雾消毒剂熏蒸3.物理消毒法A.紫外线消毒一般用30－40W的紫外灯管，有效作用距离为1.5－2m照射20-30分钟以上。B.臭氧发生器把空气中的O2变成O3，O3具有强氧化作用。（二）物体表面消毒法：1－3%的来苏儿溶液擦洗或用于手、用具的浸泡（2分钟）。70－75%酒精手、接种工具、菇体表面等表面擦拭消毒0.1－0.2%的高锰酸钾溶液对床架、器皿、用具和皮肤表面消毒。0.25%浓度对手和器具作表面消毒。（三）培养料消毒1.药物消毒0.2%多菌灵、0.1%克霉灵拌料消毒2.生、熟石灰2-5%石灰拌料3.巴氏消毒法国微生物学家、化学家路易士、巴斯德首创的低温消毒法。加热到62℃，经过30分钟，以杀死不耐高温的物质中的微生物的消毒法。灭菌一、灭菌方法(一)火焰灭菌法利用酒精灯火焰外焰球形区域烧灼灭菌适用于能耐高温而不被破坏的器物如接种工具、培养皿、试管口或菌种玻璃瓶口，也可用于菇体等。（二）干热灭菌利用加热的高温（160－170℃，维持2小时）空气使菌体蛋白变性从而达到灭菌。适用于玻璃器皿、器械、棉塞、滤纸等（三）高压湿热蒸汽灭菌：适用于培养基、玻璃器皿及用具等的灭菌手提式高压蒸汽灭菌锅的构造和使用：1.构造：（1）锅体：一般以2KW电热管作内热源，直接浸在锅内水中，通电后产生蒸汽。另附有支架，以承受内锅体。（2）内锅：由铝楹嵌接而成，用于承放待灭物品。底附有活动的栅格板，以防回流冷凝水将物品弄湿。其边上还有一用于插排气管的槽。（3）锅盖：上有木把手、安全阀、放气阀、压力表（4）其它：橡皮垫圈、旋钮等2.使用方法：（1）加水：往锅里加水与支架齐平或稍高出支架。（2）装锅：往锅中放入培养基试管。（3）封锅、接通电源：盖好锅盖，对角线拧紧螺旋。关闭放气阀和安全阀，接通电源，加热。（4）排冷空气：当压力达到0.5Kg/cm2（0.05Mpa)时，打开放气阀放冷气。（5）升温升压：压力回零后，关闭放气阀，继续加热加压。（6）保温保压：当压力达到0.1Mpa时计时，使压力保持在0.1－0.15Mpa之间，维持20-30min。（7）断电降温、出锅：灭菌完毕后，撤掉电源，压力自然降到“0”时打开锅盖，取出试管。（四）常压湿热灭菌：用土蒸锅等进行灭菌适用于原种、栽培种的培养基和熟料栽培的培养料的灭菌操作方法：a加水至八分满b装锅，要留有空隙。瓶呈品字形，袋呈井字形c关闭锅门，关严。d点火升温e加热到大气从气孔上冒出时开始计时。8-10时。f闷一夜，待物料降温后出锅。g夏季装锅，装料要迅速，以防培养料酸败，影响灭菌效果