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移液器（加样枪）使用、校准及日常维护2020/2/22河北医科大学新药安全评价研究中心王勇1，移液器的基础知识2，移液器的使用方法3，移液器的使用注意事项4，移液器快速校准的方法5，移液器的日常维护保养内容简介移液器的基础知识吸头套筒容量显示窗吸头脱卸按钮体积调节旋钮移液器的基本结构排气式移液器是指移液器活塞与吸入液体上表面之间有空气柱，在操作中，被移取的液体与活塞体之间因为空气柱的存在，将无法直接接触；容积式移液器是指移液器活塞与吸入液体上表面之间没有空气柱，在操作中，被移取的液体与活塞体之间因为没有空气柱的存在，将可以直接接触。移液器的基本分类标称容量：在给定的有效量程范围内最大的容量例如标称容量为100μl的可调式移液器，其有效量程是10μl-100μl，但实际上，其最小值可调节到7μl左右，最大值可调节到110μl左右，但这个范围7μl-110μl并不是厂家所宣称的量程，也不是该移液器的有效量程。移液器的容量识别移液器的使用正向吸液：吸液时，将移液器按钮按到第一档吸液，释放按钮。放液时，先按到第一档，打出大部分液体，再按下第二档，将余液排出。移液器的移液方式反向吸液：适用于粘稠液体和易挥发液体。吸液时将按钮直接按到第二档再释放，这样会多吸入一些液体，打出液体时只要按到第一档即可。此时，吸头内部还有多余液体，可以补偿吸头内部的表面吸附。移液器的移液方式1选择量程合适的移液器移液器只能在特定量程范围内准确移取液体，如超出最低或最大量程，会损坏移液器并导致计量不准；2设定容量值2.1粗调：通过调节旋钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值；2.2细调：当容量值接近设定值以后，应将移液器刻度显示窗平行放至自己的眼前，通过调节旋钮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响；2.3设定容量值时的注意事项：在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，旋转旋钮即可。但如果要从小体积调为大体积时，则应先旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。移液器的操作方法3吸液嘴（吸头）的装配：把白套筒顶端插入吸液嘴，在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转至吸液嘴卡紧。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装。吸液嘴卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈；4预洗吸液嘴：在安装了新的吸液嘴或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，确保移液工作的精度和准度；移液器的操作方法5吸液：先将四指并拢握住移液器上部，用拇指按住塞杆顶端的按钮，向下按到第一停点，再将吸头垂直浸入液面2~3mm，缓慢平稳松开按钮，吸上液体，并停留1～2秒钟（粘性大的溶液可加长停留时间）；移液器的操作方法6移液：缓慢抬起移液器取出吸液嘴，确保吸液嘴外壁无残留液体。可用定性滤纸抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。小心勿触及吸液嘴口；7目测吸入的液体体积是否合理；8放液：将吸液嘴贴到容器内壁并保持20°-40°倾斜，平稳地把按钮压到第一停点，停1-2s（粘性大的液体要加长停留时间）后，继续按压到第二停点，排出残余液体。松开按钮，然后将吸液嘴沿着内壁向上移开；9按吸头弹射器除去吸头，吸取不同样本液体时必须更换吸头；移液器的操作方法1正确填充吸头当某一吸头的建议（标称）范围为最大吸头容量（标称容量）的10%至100%时，可在35%至100%这一较小以及优化的范围内实现最高精确度。在此范围内移液会减少对操作人员技法的要求，并可将结果准确度提高。当达到标称容量的50%时可提供最佳结果。2吸液时保持垂直入液角使入液角尽可能地接近垂直位置，否则垂直液柱较小，这样将会吸入过多样品。分液时，吸头应当与容器壁保持较小角度，从而确保良好的排液效果。3分液技法对于大多数应用而言，建议在分液时将吸头的末端贴靠容器壁。这可减少或者消除分液后残留在吸头上的样品。沿侧壁向上滑动吸头末端将移液器撤下，从而去除吸头孔处的任何残留液滴。移液器的使用注意事项4吸头入液深度正确的吸头入液深度对于微量移液器尤为重要。如果吸头入液过深，则随着压力的加大，吸液量将会增多。保留在吸头表面的液体会影响结果。如果吸头入液太浅，则会造成空气进入，从而产生气泡以及导致容量不准确。正确的入液深度可使准确度提高达5%。移液器容量入液深度2与10ul1mm20与100ul2-3mm200与1000ul3-6mm5000ul与10ML6-10mm移液器的使用注意事项5吸头入液时间在将样品吸入吸头时，在样品中的入液时间是良好移液技法中的关键因素。在平稳松开定位销按钮之后，必须进行短暂暂停，然后再从样品中取出，以确保将全量样品吸入吸头中。如果量较大以及对于粘性物质而言，必须在等候较长时间后再取出，因为移液器中的气室需要一秒钟的时间才能实现均衡。6吸液速率移液器的吸液速率不尽相同，因此会对结果的精度与准确度产生影响。用户应使用以一种平稳并且受控的方式释放移液器定位销按钮。释放过快的定位销可能出现的最常见后果是：气雾会进入移液器套柄中，从而损坏移液器的内部部件。移液器的使用注意事项使用设备及物品：电子天平（测量范围200g；分度值0.1mg）；烧杯（50ml）1个；烧杯（100ml）1个；定性滤纸若干小块；超纯水80ml1打开电子天平，空载调零；2放入小烧杯待天平显示稳定后，按下归零键归零。给移液器上安装相应的吸液嘴，对移液器的枪头进行预洗；6重复5次执行3-5条。记录完毕，将移液器的容量调至下一被检点继续。被检点遵循从小到大的原则进行调整；5待天平显示稳定后，马上读取并记录此时电子天平显示出的数值。记录完毕将电子天平复零；4使用移液器移取被检容量的超纯水至天平的小烧杯内；3将移液器的容量调至被检点。被检点一般选择最小，中间和最大容量值。也可以是某一指定的容量点；移液器快速校准的方法tKmV%100VVVEV%1001VSn移液器实际容量计算：将所测得的质量值带入以下公式，求得移液器在当前温度下的实际容量值；式中：V——在当前温度下的移液器的实际容量，μL；m——被检移液器所排出的超纯水质量，mg；K(t)——测定值m和测定时超纯水温度的比例系数；式中：V——标称容量，μL；——5次测量的算数平均值，μL移液器的容量重复性计算：将换算得到的实际容量值带入以下公式，求得移液器在当前温度下的容量重复性；式中：σn-1——标准偏差；n——测量次数；S——重复性；移液器的容量相对误差计算：将换算得到的实际容量值带入以下公式，求得移液器在当前温度下的容量相对误差；移液器快速校准的数据处理表一移液器容量允许误差和测量重复性移液器的评价标准1将移液器调整至最小量程，按照校准方法得到当前的实际容量值，根据与标示容量值的差值，通过移液器上的调准旋钮进行调整；2当调整后测得的实际容量值与标示容量值符合表1要求时，将移液器容量调整至中间量程继续测量。中间量程符合要求时，再调整至最大量程继续测量。3如果中间量程或者最大量程有一个不符合表1要求时，则需重新调整至最小量程继续修正。直到3个量程的值都符合表1要求为止。4修正完毕的移液器，需重新进行校准。5最小量程低于10μL的，不进行修正。如果最大量程和中间量程符合校准要求的，继续使用，否则返厂维修。移液器的修正方法1如长时间不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧；2定期清洁移液器外壁，可以用95%酒精或60%的异丙醇，再用蒸馏水擦拭，自然晾干；3使用时要检查是否有漏液现象。方法是吸取液体后悬空垂直放置几秒中，看看液面是否下降。如果漏液，则检查吸液嘴是否匹配和弹簧活塞是否正常；4当移液器吸嘴内有液体时，严禁将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞；5使用正确的方法安装吸头，切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装；移液器的日常维护保养带空气分界的活塞式移液器可能的误差原因相关文献ISO8655-2JJG646-2006移液器检定规程梅特勒-托利多良好的移液技法Eppendorf移液器使用宝典谢谢