酶免疫技术原理

酶免疫检测原理组员：龚希韩翌罗勋李婧李慧常用酶标仪及洗板机Bio-Rad680全波长酶标仪MultiskanSpectrumBIO-RAD1575伯乐洗板机美国贝克曼库尔特有限公司MW96酶免疫技术的原理及特点原理：酶免疫技术是利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高特异性抗原－抗体免疫学反应检测敏感性的一种标记免疫技术。结合了抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性。特点：灵敏度高、特异性强、准确性好酶标记试剂能够较长时间保持稳定操作简便、对环境没有污染。易与其它技术偶联衍生出适用范围更广的新方法。底物显色定性或定量的分析原理包被，封闭反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离1234一、基本原理1.ELISA检测抗原的方法①双抗体夹心法测抗原+-EEEEEEEEE②竞争法测抗原+-EEEEEEE2、加待检物抗原与酶标抗原竞争与抗体结合3、加酶作用的底物不显色或显色弱3、加酶作用的底物显色1、已知抗体包被于载体表面1、已知抗体包被于载体表面2、加待测物和酶标抗原，酶标抗原与抗体结合E2.ELISA检测抗体的方法①间接法测抗体-EEEEEEEEE+②双抗原夹心法类似双抗体夹心法③竞争法类似检测抗原的竞争法④捕获法原理：抗人IgM抗体包被捕获待测标本中IgM类抗体加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体底物显色酶免疫检测仪基本原理酶联免疫检测仪的基本工作原理：分光光度计法其主要结构和光电比色仪相似酶免疫检测仪基本原理光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,最后由显示器和打印机显示结果.ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250ul以下，用一般的光电比色计无法完成测试。酶免疫检测仪基本原理酶标仪和普通的光电比色计有以下几点差异:1.盛装待测比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,故用它作为固相载体.2.由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可从上到下,也可以从下到上穿过比色液.3.酶标仪通常不仅用A,有时也使用光密度OD来表示吸光度.