稀有血型血液的保存

稀有血型血液的保存与临床输注长沙血液中心王赤林全血保存保存方法：低温保存保存温度：4℃±2℃保养液：ACD.ACDA-A/B.CPDA-1等保存时间：ACD21天ACDA-A/B.CPDA-135天红细胞保存低温保存●保存温度：4℃±2℃●保养液：MAP等●保存时间：35天深低温保存（冷冻保存）●保存温度：-65℃以下●冷冻保护剂：甘油●保存时间：十年●解冻洗涤后保存：4℃±2℃，24小时红细胞深低温保存进展1949年发现甘油对牛精子有保护作用，接着应用甘油作保护剂冷冻红细胞获得成功，但没解决去除冷冻保护剂的问题未应用于临床。1956年应用Cohn分离器将冷冻保护剂甘油去除，使冷冻红细胞成功地用于临床，但此法比较复杂，仍未得到广泛推广。1963年发现可用糖液洗涤法去除甘油，冷冻红细胞逐渐在临床得到广泛应用。红细胞深低温保存进展1972年利用不同浓度的氯化钠溶液洗涤红细胞去除甘油。我国于20世纪70年代中期开始红细胞冷冻保存的研究，并于1975年成功应用于临床。由手工制备到半自动设备制备，再到现在的全自动设备制备。经过多年的研究与探索，方法不断改进、日益完善，开创了血液保存的另一重要途径，是现代输血工作中唯一能长期保存红细胞的方法。红细胞深低温保存机理低温损伤•盐变性学说：水结冰时使细胞内外产生的高浓度电解质作用于细胞膜，增加了细胞膜对阳离子的通透性并使细胞膜上形成一些小孔，冰融化时水进入细胞引起渗透休克；•冰晶的机械作用：冷冻时细胞内外形成冰晶，冰晶作用于细胞膜并使细胞膜产生小孔使细胞膜不可逆地丧失其半透性，解冻后即出现溶血。红细胞深低温保存机理冷冻保护•玻璃化的概念：生物材料在由液态向固态转化过程中没有晶体形成或晶体颗粒小于5-10nm。玻璃化是冷冻保存生物材料最有效的方法。•冷冻保护措施：1、添加冷冻保护剂,使细胞中水处于容易达到玻璃化状态；2、迅速冷冻和解冻,细胞中水和胶体迅速玻璃化。•冷冻保护剂：细胞内保护剂:甘油、DMSO等细胞外保护剂:羟乙基淀粉、甘露醇等。红细胞深低温保存机理冷冻保护剂的种类虽然很多，但大多是在实验室研究和应用，真正比较成熟且大量用于临床的仍然是以甘油为主的保护剂。甘油具有无毒性、中性、分子量小能渗入细胞、与水结合能力强等特点，使水溶液的结晶点明显降低，结晶过程进行缓慢或形成无结晶凝固.甘油与水结合后使电解质浓度降低，减少或避免了膜脂蛋白复合物的变性与磷脂的丢失，以防止红细胞的冷冻损伤。红细胞冷冻方法慢速冷冻法•用高浓度甘油处理红细胞，甘油在红细胞中的终浓度约为40%(W/V)；•冷冻无需严格控制冷却速率，冷冻降温速度约1-10℃/分钟；•冷冻和贮存使用-65℃以下机械冰箱即可。快速冷冻法•用低浓度甘油处理红细胞，甘油在红细胞中的终浓度约为18-20%（W/V）；•将甘油化的红细胞置于液氮中（-196℃）迅速冷冻，降温速度约100-1000℃/分钟；•然后将冷冻后的红细胞置于-120℃保存。冷冻红细胞制备（一）慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法原理：pH5.2-6.1，血浆中丙种球蛋白与红细胞的脂蛋白形成可逆性复合物，加入非电解质溶液如果糖、葡萄糖溶液时，离子强度减小，离子间引力也减小，与脂蛋白结合的球蛋白之间又互相形成可逆结合，使红细胞聚集成团沉降，当加入电解质如生理盐水或提高pH时，球蛋白之间的结合又断开，红细胞重新悬浮。甘油配方：甘油（g/v）79.2%、葡萄糖（g/v）8.0%、果糖(g/v)1.0%、EDTA.2Na0.3%制备方法：全血或悬浮红细胞离心去血浆→加入与浓缩红细胞等体积的甘油试剂，室温平衡30分钟→-65℃以下冰箱贮存→临床用血时取出于37-40℃水浴中融化→第一次洗涤：加入50%葡萄糖溶液，待红细胞沉淀后去上清→第二次洗涤：加入10%蔗糖溶液（国外用5%果糖溶液），待红细胞沉淀后去上清→第三次洗涤：加入10%蔗糖溶液，待红细胞沉淀后去上清→悬浮洗涤：加入生理盐水，离心去上清→生理盐水悬浮红细胞。冷冻红细胞制备（二）慢速冷冻盐液离心洗涤制备法原理：用不同浓度梯度的NaCl溶液由高渗过度到等渗，用大容量离心机反复离心或用连续离心机分离、洗脱去甘油。甘油配方：甘油(g/v)57.1%、乳酸钠(M)0.14、氯化钾(mM)5、磷酸氢二钠(mM)5制备方法：全血或悬浮红细胞离心去血浆→加入甘油试剂，室温平衡30分钟→-65℃以下冰箱贮存→临床用血时取出于37-40℃水浴中融化,离心去上清→第一次洗涤：加入9%NaCl和0.9%NaCl溶液(或9%NaCl溶液和羟乙基淀粉溶液)，离心去上清→第二次洗涤：加入0.9%NaCl溶液(或羟乙基淀粉溶液和0.9%NaCl溶液)，离心去上清→第三次洗涤：加入0.9%NaCl溶液，离心去上清→0.9%NaCl溶液（或血浆）悬浮红细胞。冷冻红细胞制备（三）快速冷冻制备法甘油配方：甘油（w/v）28%、甘露醇（w/v）3%、氯化钠（w/v）0.65%4.3.2制备方法全血或悬浮红细胞离心去血浆→→加入甘油试剂，室温平衡30分钟→-196℃冷冻，-120℃贮存→临床用血时取出于45℃水浴中3分钟内完全融化→第一次洗涤：加入16%甘露醇生理盐水，离心去上清→第二次洗涤：加入0.9%NaCl溶液（或0.2%葡萄糖生理盐水)，离心去上清→0.9%NaCl溶液（或0.2%葡萄糖生理盐水）悬浮红细胞。冷冻红细胞的特点冷冻红细胞保存期可长达10年，适合于稀有血型红细胞长期、常规保存。对于自身输血者，可用此法预先冷冻贮存其自身红细胞，待需要时解冻洗涤输用。经冷冻洗涤的红细胞，基本去除了白细胞、血小板及血浆蛋白，其去除率要高于洗涤红细胞，减少了输血副反应，对于血液病、阵发性睡眠性血红蛋白尿、肾功能异常以及心功能不全的患者输注更为有利，特别对缺乏IgA而有抗IgA抗体的患者以及患有严重过敏性输血反应的患者是理想的血液。冷冻红细胞的2，3-DPG含量与冷冻前区别不大，接近正常，输入人体后，红细胞的放氧能力比4℃保存时间较长的库血要好，可以立即纠正缺氧，对于胸外科手术和新生儿换血有利。冷冻红细胞制备需一定设备，解冻洗涤需一定时间。成品冷冻红细胞的质量标准容量•200ml全血制备的冷冻红细胞容量为200ml±10%。•400ml全血制备的冷冻红细胞容量为400ml±10%。红细胞回收率≥80%。残留白细胞≤1%。残留血小板≤1%。残留甘油含量≤10g/L。游离血红蛋白含量≤1g/L。体外溶血试验≤50%。HBsAg、Anti-HCV、Anti-HIV均为阴性，梅毒螺旋体血清学试验阴性，ALT正常。无细菌生长。《临床输血技术规范》有关稀有血型患者输血的条款第十条对于Rh(D)阴性和其他稀有血型患者，应采用自身输血、同型输血或配合型输血。第十一条新生儿溶血病需要换血治疗的，由经治医师申请，经主治医师核准，并经患儿家属或监护人签字同意，由血站和医院输血科提供合适的血液，换血由经治医师和输血科（血库）人员共同实施。《临床输血技术规范》有关稀有血型患者输血的条款第十五条输血科（血库）要逐项核对输血申请单，受血者和供血者的血样，复查受血者和供血者的ABO血型（正反定型），并常规检查患者Rh(D)血型（急症抢救患者紧急输血时Rh(D)血型可除外），正确无误时可进行交叉配血。第十六条凡输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩白细胞、手工分离浓缩血小板等患者，应进行交叉配血试验。机器单采浓缩血小板应ABO血型同型输注。Rh(D)阴性血液临床输注Rh(D)阴性血液输给ABO同型的Rh(D)阴性患者。Rh(D)阴性全血、悬浮红细胞、冰冻血浆、浓缩血小板、冷沉淀，只要血浆中无抗D抗体，可输给ABO同型的Rh(D)阳性患者。Rh(D)阴性洗涤红细胞、冰冻红细胞可输给ABO同型的Rh(D)阳性患者。Rh(D)阴性患者输血常规情况下输血•输注全血、红细胞、手工分离浓缩血小板应输ABO同型Rh(D)阴性血。•输注单采血小板：男性和已无生育可能的女性患者可考虑输ABO同型Rh(D)阳性血小板；有生育可能的女性应输ABO同型Rh(D)阴性血小板。•输注冰冻血浆、冷沉淀可忽略Rh(D)血型，输ABO同型产品。Rh(D)阴性患者输血紧急情况下输血—以抢救患者生命为原则•输注全血、红细胞、手工分离浓缩血小板尽可能输ABO同型Rh(D)阴性血。•如无Rh(D)阴性血且患者血浆中未产生抗D抗体，可输注ABO同型Rh(D)阳性血液，患者或其家属知情同意。可输ABO配合的Rh(D)阴性红细胞。•如无Rh(D)阴性血而患者血浆中已产生抗D抗体，应设法降低患者体内抗D抗体效价，输注ABO同型Rh(D)阳性血液抢救患者生命，患者或其家属知情同意。可输ABO配合的Rh(D)阴性红细胞。其他稀有血型患者输血输注红细胞上没有针对患者血浆中抗体的相应抗原的血液。掌握一个原则：抗原抗体不碰头新生儿溶血病换血ABO新生儿溶血病换血•选择O型红细胞和AB型血浆Rh(D)新生儿溶血病换血•红细胞选择ABO同型或O型Rh(D)阴性；•血浆选择ABO同型或AB型Rh(D)阳性。其他稀有血型新生儿换血•选择红细胞上没有针对患儿血浆中抗体的相应抗原的血液。