-宫颈癌基因E6、E7mRNA检测

欢迎各位妇产科专家科蒂亚生物孙宝珍科蒂亚生物HPVE6、E7mRNA检测--新一代宫颈癌风险评估方法内部学习资料科蒂亚生物主题一、宫颈癌简介→二、宫颈癌-E6、E7mRNA→三、宫颈癌筛查指南及临床问题→四、癌基因E6、E7mRNA检测临床应用→内部学习资料科蒂亚生物哈拉尔德·楚尔·豪森•哈拉尔德·楚尔·豪森（德国）：•确定：•“人乳头瘤病毒（HumanPapillomavirus，简称HPV）感染导致宫颈癌”•获得2008年诺贝尔医学和生理学奖。一、宫颈癌简介内部学习资料科蒂亚生物HPV16L1:主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分L2:次要衣壳蛋白，是市售抗体的主要识别位点E4：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空细胞的外观E2：负性调节E6和E7，维持凋亡和细胞周期的调控。通常在病毒发生整合（病毒整合时会破坏E2基因的结构）时失活HPV的主要致癌基因E6通过抑制p53而阻断凋亡E7通过抑制pRB使细胞周期失控XHPV的基因片段及功能内部学习资料科蒂亚生物高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：E6和E7蛋白。癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生癌变。（人民卫生出版社、妇产科学、2004年1月第6版）E6、E7癌蛋白→→E6、E7癌基因DNAE6、E7mRNA癌细胞→结合抑癌蛋白P53、RB等细胞周期失控→→致癌机理内部学习资料科蒂亚生物感染发病情况内部学习资料科蒂亚生物2003-2008年，在我国大型宫颈癌筛查中，我国城市、农村妇女高危型HPV感染率分别为15.2%和14.6%，但宫颈癌的发病率为50/10万（0.05%）99.7%的宫颈癌和HPV感染有关，但80%HPV感染者2年内会自行消退，最后不到1％的进展为CIN3+。感染发病情况内部学习资料科蒂亚生物正常宫颈感染HPV宫颈上皮内轻度癌前病变(CINⅠ)宫颈上皮内中度癌前病变(CINⅡ)宫颈上皮内高度癌前病变(CINⅢ)原位癌浸润癌依靠免疫力80%自行消退06-18个月至少2年后5-10年后一过性感染持续性感染62%转为正常16%进一步进展22%维持原状54%转为正常30%进一步进展16%维持原状100%20%3.2%1%0.35%二、HPV——宫颈癌二、HPV——宫颈癌HPV感染致宫颈癌模式图内部学习资料科蒂亚生物宫颈癌的真正病因是高危HPV的持续性/整合感染。HPV感染是宫颈癌的必要条件，但非充分条件。如果没有mRNA,即使有高危HPV，仍不会有宫颈癌。正确看待HPV感染的危害性，不可轻视,亦不可过度夸大。小结返回内部学习资料科蒂亚生物高危HPV感染宫颈上皮细胞HPVL1L2DNAHPVL1L2mRNAHPVL1L2蛋白HPV复制繁殖HPV癌基因E6/E7DNAE6/E7癌蛋白与抑癌蛋白P53、RB等结合E6/E7mRNA宫颈细胞CIN或癌变HPV病毒学检测细胞形态或组织学检测癌基因学检测E6/E7癌蛋白E6/E7mRNA二、宫颈癌-E6、E7mRNA内部学习资料科蒂亚生物二、宫颈癌-E6、E7mRNAHPV病毒学检测癌基因学检测内部学习资料科蒂亚生物检测方法意义特点巴氏染色法直接看到病变的程度五级分类液基细胞学TBS分类；基本的筛查方法HPV病毒检测是否有病毒感染（潜在风险）1、ASCUS分流2、分型，16、183、持续感染4、病毒载量E6/E7mRNA检测E6/E7癌基因表达情况检测致癌活动产物，预测病变趋势！阴道镜检宫颈表面病变程度直观、清晰宫颈活检宫颈上皮剖面病变程度病变分级；确诊的金标准宫颈病变检测方法内部学习资料科蒂亚生物E6/E7mRNA检测结果：不仅观察是否感染了HPV病毒；而且观察病毒致癌基因E6、E7是否在活动及活动程度。E6/E7mRNA检测内部学习资料科蒂亚生物2006年欧洲生殖器感染及肿瘤研究组织(theEuropeanResearchOrganizationonGenitalInfectionandNeoplasia)已取得共识，认为今后HPVE6/E7mRNA检测应作为一个重点研究对象。E6/E7mRNA检测——共识内部学习资料科蒂亚生物数量越来越多；应用范围越来越广，涉及到到筛查、诊治、随后随访、特殊人群的使用等E6/E7mRNA检测—文章内部学习资料科蒂亚生物公共卫生研究结果证实可靠性以上三个大样本的对比实验采的结果显示，以HC2和罗氏公司的DNA检测为对比对象，分析结果显示效果良好。通过对多个文献中数据的比对分析，公共卫生研究结果显示E6、E7mRNA与DNA检测一样可靠，并和宫颈病变有着良好的相关性。内部学习资料科蒂亚生物作者年代国别DNA敏感性mRNA敏感性DNA特异性mRNA特异性DNA阳性预测值mRNA阳性预测值DNA阴性预测值mRNA阴性预测值[1]Molden2005挪威90%86%53%85%35%62%95%96%[2]Lie2005挪威95%77%36%78%82%92%67%52%[3]Andersson2006瑞典70%61%39%66%55%59%56%48%[4]Castle2007美国92%90%47%61%30%36%96%96%[5]Szarewski2008英国100%74%28%73%36%52%96%87%[6]Dockter2009法国95%91%47%56%29%32%98%96%[7]Cattani2009意大利86%81%56%73%49%59%89%89%[8]Halfon2010法国95%76%49%63%48%50%95%84%[9]Hovland2010刚果100%81%86%97%28%57%100%99%[10]Ratnam2010加拿大96%78%40%76%36%53%96%76%[11]王华2011中国79%63%61%78%总计（平均值）90.7%76.2%49.2%73.3%42.8%55.2%88.8%82.3%阳性判定对照标准为：活检标本组织病理CIN2+E6/E7mRNA检测与HPVDNA检测比较内部学习资料科蒂亚生物如何解决宫颈癌风险评估既敏感又特异？-是临床诊断难点、也是发展方向。E6、E7mRNA检测特异性和阳性预测值高HPVDNA检测敏感性和阴性预测值高。E6/E7mRNA检测与HPVDNA检测比较E6、E7mRNA与液基细胞学联合检测共用一份标本，达到高敏感性的临床要求。E6、E7mRNA与液基细胞学联合内部学习资料科蒂亚生物三、宫颈筛查指南及临床问题不建议此年龄阶段人，单独用HPV检测作为筛查方法。不用HPV检测，作为此年龄阶段ASC-US的筛查管理。不用HPV检测，作为此年龄阶段人群的筛查。内部学习资料科蒂亚生物中国宫颈癌筛查指南（2011版）：ASCUSASCUS普通人群HPV检测与分流（AI）间隔6个月连续2次重复细胞学检查（AI）单独使用阴道镜（AI）对ASCUS常规使用LEEP是不可接受的（EIII）特殊人群青春期女性每年细胞学随访（BII），连续2年，12个月随访出现≥HSIL考虑阴道镜检查，24月随访出现≥ASCUS考虑阴道镜检查（AII），随后常规筛查妊娠妇女不主张阴道镜常规检查Q:HPV（+）（-）后的处理？特殊人群：青春期女性和妊娠妇女的评估？内部学习资料科蒂亚生物LSILLSIL通常表明是HPV感染，其高危HPVDNA阳性率为76.8%，在LSIL人群中，初次阴道镜检查发现的CIN2及更高级的宫颈病变的发生率为12%-16%。美国ALTS的数据表明，在高危HPVDNA阳性的LSIL和ASCUS的女性中，CIN2、3的患病风险是相同的。这些证据支持对上述两个人群采用相同的管理方式，除了特殊人群如绝经后女性。普通人群推荐使用阴道镜检测与多点活检（AII）对于没有发现病变（BII）和不满意阴道镜检查（AII）的女性，采集宫颈管样本是更好的办法对于满意的阴道镜检查且转化区发现病变的女性采集宫颈管样本也是可接受的（AII）对于阴道镜检查和活检均未发现CIN2、3的LSIL女性，可接受的阴道镜后管理方案是，12个月时HPVDNA检测或6个月和12个月时充分细胞学检查（AII）如果HPVDNA检测阳性或重复细胞学报告≥ASCUS，推荐使用阴道镜（AI），发现CIN，应根据CIN指南处理。对于LSIL患者的治疗，缺少组织学证据的诊断学切除或者消融治疗都是不可接受的（EII）中国宫颈癌筛查指南（2011版）：LSILQ：LSIL的病人要不要做HPV检测？风险如何评估？内部学习资料科蒂亚生物中国宫颈癌筛查指南（2011版）：LSIL青春期女性推荐每年细胞学随访（AII）在12个月随访时，重复细胞学结果≥LSIL，应考虑阴道镜检查。在24个月随访时，细胞学出现≥ASCUS结果，应考虑阴道镜检查（AII）对LSIL青春期女性，HPVDNA检测是不可接受的（EII），如果已做了HPVDNA检查，其结果不影响管理。绝经期女性应较少采用侵入性的管理方法，采用HPV检测和分流可能更为合理。可接受方案包括：“反馈性”HPVDNA检测，6个月到12个月重复细胞学、和阴道镜（CIII）如果HPVDNA检测阴性或阴道镜检查未发现CIN，12个月时重复细胞学是推荐的方法。如果HPVDNA检测阳性或重复细胞学≥ASCUS，推荐使用阴道镜（AII）如果HPVDNA检测阴性或重复细胞学结果为“无CIN或恶性病变”，推荐患者返回常规宫颈细胞学筛查。妊娠期妇女LSIL非青春期妇女，阴道镜检查是推荐的管理办法（BII）患者推迟至产后6周行阴道镜检查也是可接受的办法（BIII）对于细胞学、组织学或阴道镜检查未发现可疑的CIN2、3及癌症的妊娠期女性，产后随访时推荐的方法（BIII）尽量避免宫颈管搔刮（EIII），不应进行额外的阴道镜和细胞学检查（DIII）Q：青春期感染HPV女性的罹患宫颈癌风险如何评估？Q：绝经和妊娠期妇女的罹患宫颈癌风险如何评估？内部学习资料科蒂亚生物中国宫颈癌筛查指南（2011版）：HSIL20-29岁女性HSIL发生率为0.6%，40-49岁发生率为0.2%，50-59岁发生率为0.1%HSIL单次阴道镜检查发现≥CIN2病变占53%-56%，LEEP术后的HSIL女性中，≥CIN2的病变约占53%-56%，大约2%的HSIL女性是浸润宫颈癌HSIL女性具有相当高的CIN2及以上病变风险及HPV感染率，用HPV检测作为细胞学分流工具是不合适的阴道镜检查也会漏检相当数量的CIN2、3病变，HSIL女性阴道镜检查和活检没有检出CIN2、3并不意味着不存在CIN2、3许多人提议采用即诊断即治疗的方案管理HSIL女性，LEEP作为初始手段，由于许多青春期和年轻女性CIN2/3可以自发消退，该方案可能治疗过度或治疗不足。Q：细胞学HSIL以上，病理学≤CIN2患者如何进行风险评估？内部学习资料科蒂亚生物中国宫颈癌筛查指南（2011版）：HSIL普通人群即诊即治的LEEP或阴道镜检查加宫颈管评估都是可接受的管理办法（BII）组织学未发现CIN2、3,阴道镜检查满意且宫颈管样本阴性的病例进行诊断性切除或在1年内以6个月为间隔进行阴道镜和细胞学检查是可接受的（BIII）第二条下，重新复习细胞学、组织学和阴道镜也是可接受的管理方案；如果复习的结果有修订，根据修订结果处理（BII）如果选择细胞学和阴道镜观察，对6个月或12个月就诊时细胞学结果为HSIL的女性行诊断性切除是推荐的（CIII）观察一年后，连续2次细胞学结果为“无CIN或恶性病变”的女性，可以返回常规筛查诊断为CIN2、3的女性，应根据CIN指南进行处理，下列情况下，消融术是不可接受的（EII）未进行阴道镜检查未经组织学证明为CIN2、3宫颈管评估出任何级别的CIN对于HSIL女性采用重复细胞学检查或者HPVDNA检测分流都是不可接受的管理方式（BII）Q：这部分病人如何评估她们的风