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单克隆抗体单克隆抗体的简要概况1975年分子生物学家Milestein和Kohler在细胞杂交技术的基础上，创建了杂交瘤技术，把体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的小鼠脾细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又有分泌特异性抗体的特点。将这种杂交瘤做单个细胞培养，可形成单细胞系，即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能达到大量的、高滴度的、非常均一的抗体。获取B淋巴细胞与骨髓瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞单克隆抗体制备过程细胞融合分泌抗体不能无限增殖不分泌抗体能无限增殖B淋巴细胞骨髓瘤细胞分泌抗体能无限增殖杂交瘤细胞融合后产生的不同细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞脾细胞X脾细胞骨髓瘤细胞X骨髓瘤细胞脾细胞骨髓瘤细胞目标细胞怎样筛选？HAT选择培养液由黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶三种成分组成，三种成分简称HAT。氨基喋呤有阻断DNA主要合成途径的作用。脱氧尿苷酸甲基化脱氧胸苷酸四氢叶酸提供甲基二氢叶酸还原酶合成DNADNA主要合成途径氨基喋呤不可逆结合应急途径细胞中还存在着一条合成DNA的应急途径，当主要合成途径被阻断时，仍可利用次黄嘌呤合成嘌呤核苷酸，利用胸腺嘧啶核苷合成嘧啶核苷酸，从而继续合成DNA。应急途径的这两种反应分别由次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化。碱基和核苷糖+氨基酸HGPRTTK氨基嘌呤阻断（应急途径）（主要途径）核苷酸DNA用来制备杂交瘤细胞的骨髓瘤细胞为HGPRT-和TK-细胞。不含有HGPRT酶和TK酶，失去了通过应急途径合成DNA的能力。HAT选择培养液对淋巴细胞无影响，但淋巴细胞在培养条件下不能无限增殖。骨髓瘤细胞和脾细胞融合成的杂交瘤细胞，继承了脾细胞合成HGPRT酶和TK酶的能力。被淘汰生长存活上清液中检测到所需的X抗体分离单个细胞进行克隆化培养上清液中检测到所需的X抗体注入小鼠腹腔扩大培养体外培养大量单克隆抗体过程总结获得产生相应抗体的B淋巴细胞动物细胞融合技术B、BB、B瘤、瘤瘤、瘤只有杂种细胞才能活动物细胞培养培养上清液中X抗体的检测克隆化培养•1.3人源化抗体由于嵌合抗体异源性仍然很大，因此需要对鼠源抗体进行人源化改造，进一步人源化的方法很多,主要是重构抗体和表面重塑技术。重构抗体就是互补决定区(complementaritydeterminingregion,CDR)移植（抗体可变区的CDR是抗体识别和结合抗原的区域，直接决定抗体的特异性），将鼠抗体的CDR移植到人抗体的相应部位，这样人源化程度可达90%以上，目前该方法是人源化单抗最常用、最基本的方法。而表面重塑技术，即将鼠抗体框架区表面氨基酸的残基(surfaceaminoacidresidues,SAR)进行人源化改造。该方法是仅替换与人抗体SAR差别明显的区域，在维持抗体活性并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残基相似的氨基酸替换。1.4人源性抗体虽然人源化抗体解决了鼠抗体的免疫原性等问题，但生产人源化抗体仍有很大的困难；人源化过程需大量繁复、昂贵的电脑模拟，需取代不同的氨基酸以恢复选择性和亲和力，工作量非常大，并且它总还含有少量鼠源性成分。完全的人源性抗体才是用于治疗的理想抗体，目前它主要通过3种途径来研制：噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术和转基因小鼠制备人源性抗体。•1.5杂交瘤技术的拓展随着杂交瘤技术在生命学科各个领域中应用的不断深入，杂交瘤技术生产单克隆抗体的方法得到了很多改进，人们不断发现单克隆抗体的新用途。其它动物的杂交瘤技术由于人或动物不同类间抗体有排斥反应，80年代以来，人们在鼠杂交瘤技术的基础上，发展了人源杂交瘤技术，鼠与其他动物包括兔、牛、猪和绵羊的种间杂交瘤。其它动物源的杂交瘤分泌的单克隆抗体特别适合于兽医和食品检验领域中使用。如80年代中期用EB病毒转化体外培养的人B淋巴细胞建立分泌单克隆抗体的细胞系获得成功，为人源单克隆抗体的生产开辟了新的途径。抗体酶技术1986年，Schultz等和Tramontano等发现某些单克隆抗体具有酶的催化作用，从而为人工设计和生产具有特定催化活性的抗体酶开辟了道路。目前已制备出具有变位酶活性的抗体酶和水解羟基酯、羧基酯、碳酸酯和香豆素酯的酯酶活性的多种抗体酶。抗独特型抗体的单克隆抗体独特型是指存在于抗体分子可变区及淋巴细胞受体上的抗原决定簇，由独特型抗体（第一抗体）刺激机体产生的抗体（第二抗体）能识别独特型抗体的抗原决定簇，由抗独特型抗体的抗体（第二抗体）刺激机体产生的抗体（第三抗体）能与抗原结合，即与独特型抗体（第一抗体）具有类似性。抗独特型抗体作为一种探针已广泛应用于受体结构和功能的研究，还可用于鉴别和比较特异性抗体分子上的独特型抗体决定簇。我国单克隆抗体的研究进展•在淋巴细胞杂交瘤技术方面，近几年来发展的很快。至1985年底已研制成功了抗胃癌、抗肺癌、抗乙型肝炎表面抗原、抗疟疾、抗丝虫等47类单克隆抗体。其中，抗乙型肝炎病毒单克隆抗体已投入了临床应用，制造了一定的经济效应。131I-Hab18肝癌单抗用于肝癌患者放射免疫显像诊断，显像率达90.6%。肿瘤定位最小直径为0.5cm，用于导向治疗，疗效为69%。•农用单克隆抗体研究，已研制成马传染性贫血、猪瘟、鸡新城疫、草鱼出血病、马铃薯病毒等一大批单克隆试剂盒，并应用于动植物疫病的快速诊断。