搜索
B.35.第二代毒副作用检测1.测定方法1.1.引言见描述部份B.1.2.定义见描述部份B.1.3.参考物质无。1.4.测定方法原则测定物质按梯度剂量提供给雄性和雌性的一些个体。父母亲(P)代的雄性应该在生长期间或至少一个完整的精子发生周期内服药：（大约小鼠56天，大鼠70天）以便得出测定物质引起的精子发生的任何不利作用。父母亲的(P)代的雌性应该在至少二个完整的发情周期服药以便得出测定物质引起的发情的任何不利作用。然后动物交配。测定物质在交配期间和其后仅对雌性而言的怀孕期间和看护持续期间对两性提供。在断奶期物质的提供持续到F1代子孙的生长至成年，交配并繁殖F2代，直到F2代断奶。通过吸入提供的方法将需要修正。1.5.质量标准无。1.6.测定方法的描述准备在测定之前，健康的动物被随机分配到被处理和对照组的团体。父母亲的(P)动物饲养在实验房里并且在测定之前喂养条件持续至少五天。据推荐的测定物质是在饮食或饮用水中被提供。其他的提供路径也是可接受的。所有的动物应该在整个实验期间用相同的方法服药。如果媒介物或其他添加剂被用于促进服药，它们应该被确认不含毒效。服药应该在每星期七天的基础上进行。动物样品：物种选择大鼠或小鼠是首选的物种。健康的P动物，不受早先实验步骤的影响，应被采用。低产率的应变不应被采用。测定动物应根据物种，应变，性别，重量和/或年龄表示其特点。对于生产率进行合适的评估，雄性和雌性应该均被研究。所有的测定和对照组动物应该在服药前断奶。数目和性别每个处理和对照组团体应该包含动物足够的数目需要大约20怀孕的雌性在或者在此期间附近。目的是要产生足够的怀孕和子孙以便确保有意义的对影响生产率，怀孕和母亲的行为和哺乳,生长和F1代子孙从怀孕到成熟的发展,和它们的子孙(F2)的发展到断奶的物质潜力的评估。测定条件食物和水应该被提供并添加性激素。在分娩将近时，怀孕的雌性应该是单独运到笼子里关起来或运到孕妇笼内或许可能被提供筑巢材料。剂量水平至少三个测试组和一个对照组应被采用。如果媒介物被用于提供测定物质,对照组应收到使用过的最大体积的媒介物。如果测定物质引起饮食吸入或利用的减少，然后使用成对喂养的对照组团体可能被认为是必须的。理想地,除非测定物质的物理/化学特性或生物学作用被限制，最高剂量水平应当引起毒性而不至于引起父母亲的(P)动物样品的必死命运。中间剂量(s)应该引起归属于测定物质的最小毒效，和低剂量应该不引起在父母或子孙上的任何观察得出的不利作用。当以填喂或胶囊提供给每只动物样品的药量的时候应该以个别动物样品的体重为基础并且每周调整。对怀孕期间的雌性，药量应以怀孕0天或6天的体重为基础，如果需要。极限测定对低毒性物质的情况，如果至少1000毫克/公斤的剂量水平给出和生殖表现没有冲突的证据，对其他剂量水平研究可能被认为是必须的。如果高剂量水平的初步研究，具明母性毒性的明确证据，表明无生产率方面的不利作用，其他剂量水平的研究不可能被认为是必须的。测定的实施实验时间表当它们在大约五到九个星期大时，父母亲的(P)雄性的每日服药开始，在它们已经断奶而适应新环境至少五天后。在小鼠中，服药是在交配期前持续10个星期之久(小鼠，八个星期)。雄性应该被杀并且在交配时期结束时被检查或，二选一地，雄性可能为了另一窝的可能繁殖的测定饮食而被留住或应该被杀或在实验结束前的一些时间内被调查。对于父母亲的(P)雌性定量给料应该在环境适应至少五天之后开始并且在交配前持续至少二个星期。P雌性的服药应持续三周的交配，怀孕和决定于Fl子孙的断奶期。应当考虑修正基于关于测定物质的其他可获信息的定量给料时间表，像是新陈代谢或生物体内积累的感应。F1代动物样品的服药始于断奶并结束于宰杀它们时。交配步骤1:1(一雄性到一雌性)或1:2(一雄性对二雌性)的交配可能被用于繁殖毒性研究。基于1:1的交配，一雌性应该与同一雄性一起直到怀孕或三个星期后。每天早上雌性应该为精液或阴道闭塞的出现而被检查。怀孕0天被定义为一个阴道闭塞或精液被发现的日子。考虑精子形成F1代子孙直到它们成为小鼠至少11个周，大鼠13周才交配。对正在交配的F1代子孙,一个雄性和一个雌性任意地从相同剂量组的另一个窝的幼畜的交叉交配中选出以产出F2代。不被选作交配的F1代雄性和雌性在断奶后被杀。交配失败的配对应该被评估为以决定明显的不育因素。这可能与如提供附加的机会以便同其他被证明的公畜或母畜交配，生殖器官显微检查，和发情周期或精子发生检查的的步骤有关。窝的大小在生殖研究周期间服药的动物被允许正常产仔而且养育它们的后代到不需要产仔的标准化断奶阶段。在标准化被完成的处，下列各项步骤被提出。在出生后第一天和第四天之间，每个窝的大小可能被藉由排除选择生额外的幼畜进行调整，尽可能几乎，每窝四个雄性和四个雌性。每当雄性或雌性幼畜的数目避免一窝有每种性别有四个，部分调整(例如，五个雄性和三个雌性)是可接受的。调整对小于八个幼畜的窝不适用。观察在测定期间，每个动物应该被观察至少一天。相关行为变化，困难的或延长分娩的征兆和所有中毒征兆，包括应该被记录的死亡率。在前交配和交配期间，食物消耗可能每周测量。随机地，在怀孕期间，食物消耗可能每天测量。在分娩之后和在分泌乳汁期间，食物消耗测量应该在同窝的秤重一样重的同一天被做。父母亲的动物（P和F1）应该在定量给料的第一天和其后每周被称重。这些关于每个成年动物观察应当被独立的记录。妊娠期间应当从怀孕0天被计算。每个窝应该是在分娩以增加幼畜，健在的，刚出生的和共用的畸形物的出现的数目和性别后尽快地检查。死掉的幼畜和4天后被杀的幼畜应该被保存并为一些可能的发现而研究学习。当动物应该被单独称重的时候，活下的幼畜应该被点数而且窝应被称重在出生后的早上和每周星期四和星期天直到研究的结束。在母畜或子孙里观察到的生理的或行为的反常应被记录。病理学验尸所有成年的P和F1动物在不再需要评估繁殖作用时都应该被杀死.F1子孙不为交配选择，而且所有的F2子孙当使断奶的时候应该被杀死。在研究P代动物期间在宰杀或死亡的时候应该从宏观上为任何结构反常或病理变化进行检查，对生殖系统器官应特别予以注意。死的或垂死的幼畜应该在有所发现时被检查。组织病理学研究卵巢，子宫，子宫颈，阴道，睾丸，副睾，精液小囊，前列腺，凝固腺，垂体腺和所有P代动物目标器官(s)应该为显微检查保存。在这些器官没有在其他的多剂量研究中被调查的事件中，它们应该对所有的高剂量和选作繁殖的对照组P和F1代的动物和，可实行的，研究周期间死的动物进行显微检查。然后表现这些动物反常的器官应对其他的剂量组中的动物检查。在这些例证中，显微检查应对显示总的病理变化的所有组织进行。在交配步骤提出，被怀疑不育的动物生殖器官可能受制于显微检查。2.实验数据实验结果处理实验数据可以制成表的形式描述，用以显示测定开始每个测定组的动物数目，能繁殖的雄性数目，怀孕动物样品的数目，变化类型和显示每个类型变化的动物百分比。当可能时，数字结果应该被一个合适的统计方法评估。任何广泛被接受的统计方法均可用。3.实验结果报告3.1.测定结果报告如有可能测定结果报告将包含下列各实验数据项：-使用过的物种/属，-毒性显示的关于性别和剂量的实验数据，包括产子数，妊娠和生存能力指标，-在研究周期间的死亡时间或是否有动物生存到研究结束，-呈现每个窝重量，方法的表：幼畜体重和结束时个体幼畜的体重，-中毒的或其它的繁殖作用，子孙和出生后的生长，-每个反常征兆的日观察和它的后续经过，-选作繁殖的P和F1代动物样品的体重实验数据，-验尸调查结果，-所有的显微调查结果的详细描述，-结果的统计处理，合适的地方，-结果讨论，-结果解释。3.2.实验结果评估和解释见描述部份B.4.参考文献见描述部份B.