中药质量控制方法概况及发展.

6、1985、1990、1995、2000年版《中国药典》每五年修订一次，逐步增加收载附录要求与品种。●2000年版《中国药典》二部将以往几版药典中的“作用”、“用途”、“用法”、“用量”及“注意”项内容移到配套的《临床用药须知》。●2005年版《中国药典》分为一、二、三部一部（中药）首次单列并增加了植物油脂与提取物，编制了《临床用药须知》（中成卷）收载1400多个品种。●2010年版2、定性指标—鉴别●显微鉴别2、定性指标—鉴别●化学反应鉴别2、定性指标—鉴别●光谱鉴别2、定性指标—鉴别●色谱鉴别●薄层1：CoptischinensisFranch（味连）2:CoptisteetaWall（云连）3:Coptisdeltoidea（雅连）4:Berberinehydrochloride2、定性指标—鉴别●色谱鉴别●液相min01020304050mAU-75-50-250255075100125min01020304050mAU-75-50-250255075100125112、定性指标—鉴别●色谱鉴别●气相min0510152025pA50100150200250300350FID1B,(EZ080225\08022603.D)4.6595.6666.0136.7978.0228.2889.54710.74011.49511.72514.03814.91516.93617.98119.39819.91120.86523.2182、定性指标—鉴别●色谱-质谱联用●LC-MS●GC-MS3、与质量有关的控制指标—检查●杂质检查●水分●灰分●浸出物●酸败度（酸值、羰基值、过氧化值）4、与制剂质量有关的控制指标—检查●丸剂：溶散时限；●颗粒剂：溶化性、粒度；●贴膏剂：耐热性、赋形性、含膏量、黏附性；●分散片：分散均匀性、溶出度；●合剂（口服液）：pH值、相对密度；●注射剂：相关物质；●气雾剂：喷射速率：5、与安全性相关的控制指标—检查●有机溶剂残留●毒性成分检查●过敏试验●刺激试验●杂质检查●重金属、砷盐●农药残留●微生物污染●非法添加●妇科制剂的pH检查毒性成分检查马兜铃酸、银杏酸、乌头碱、吗啡、东莨菪碱、秋水仙碱、雷公藤甲素、华蟾酥毒基及脂蟾毒配基、士的宁、朱砂、雄黄。min0510152025mAU00.20.40.60.81VWD1A,Wavelength=400nm(Z:\DATA\GEN_037\GEN_0011.D)アリストロキア酸Ⅰ马兜铃酸6、含量测定●重量法（地奥心血康）●容量法（矿物药、总糖、有机酸、总生物碱等）●光谱法（比色法、紫外法）●色谱法（HPLC、GC)二、中药质量控制的现状3.思考●安全性控制比有效性控制重要●评价控制方法比建立控制方法重要●继承比发扬重要“老祖宗认可，老中医认可，老百姓认可”二、中药质量控制的现状4.对策（怎么办？）●中药的特点原药材来源多样性药材生长环境多样性化学成分多样性加工炮制多样性复方配伍多样性生产工艺多样性在体内吸收、代谢多样性功效多样性中药的复杂性—复杂系统社会主义初级阶段半殖民地半封建社会社会主义高级阶段中国社会制度发展大跃进药物评价模式发展感官评价模式生物评价模式化学评价模式化学药模式生物药模式中药模式●世界药物质控模式和方法发展历程提示：中药质量评价体系:生物测定是不可或缺的中药与生物药、化学药中药与生物药、化学药生产质量控制模式的差异性和合理性生产质量控制模式的差异性和合理性••原料、半成品和成品非一原料、半成品和成品非一体化管理体化管理••质量标准与工艺不链合质量标准与工艺不链合••定性鉴别定性鉴别++含量测定含量测定••难以保证安全有效性难以保证安全有效性影响大影响大一类至一类至多类化多类化合物合物中中药药••原料、半成品和成品一体原料、半成品和成品一体化管理化管理••质量标准与制备工艺链合质量标准与制备工艺链合••生物效价生物效价++化学含测化学含测••可保证安全性有效性可保证安全性有效性影响大影响大一类一类化合物化合物生物药生物药••原料、半成品和成品非一原料、半成品和成品非一体化管理体化管理••只载标准，不收工艺只载标准，不收工艺••含量测定含量测定••可保证安全性有效性可保证安全性有效性不影响不影响单一单一成分成分化学药化学药《《中国药典中国药典》》生产质量管理模式生产质量管理模式内在质量控制内在质量控制模式和效果模式和效果工艺对组工艺对组分的影响分的影响药物药物组分组分药物药物类型类型提示：（1）中药≈生物药；中药≠化学药（2)中药产品可借鉴生物药质控模式(3）生物测定可提供与安全有效直接相关的信息三、中药质量控制发展趋势1.国家科技重大专项“十一五”计划项目—中药标准研究平台中药材、饮片、提取物、中成药质量标准研究平台中药质量标准研究平台种子种苗系统评价方法标准物质生产过程控制有害残留物中药材、饮片、提取物、中成药质量标准研究平台方法、技术研究规范与指导原则、技术要求标准制定与标准化示范研究信息系统样品与前处理鉴别检查含量测定检测SOP标准制定技术要求方法应用指导原则饮片提取物中药材成方制剂标准信息国际互认安全、有效、稳定、可控中药材质量控制中药材系统化学成分研究阐明其化学成分生物活性筛选或文献调研究确定有效成分或指标性成分化学对照品的制备与对照品的质量标准研究化学对照品以对照药材、对照提取物或对照品作对照，进行TLC鉴别方法研究浸出物测定方法研究多成分含量测定研究色谱、色谱-质谱联用指纹图谱研究建立专属性的TLC鉴别建立浸出物标准建立多成分含量测定标准建立指纹图谱检测标准水分、灰分、重金属、农残、有毒有害物质检查建立水分、杂质和有毒有害物质检查性状、组织、粉末鉴别建立性状、组织、粉末鉴别起草药材质量标准药品检验所复核国家药品标准中药饮片质量控制中药饮片饮片性状鉴别有效成份检查中药饮片质量标准建立水分、灰分、浸出物、杂质、重金属、农残、有毒有害物质标准建立饮片外观、质地、气味标准建立在组织、粉末鉴别建立指纹图谱、含量测定检测标准建立包装材料、贮藏方式标准生物活性质量评价功能指纹图谱包装、储藏外观、质地、性味组织、粉末鉴别水分、灰分、杂质浸出物、重金属、农残、有毒有害物质检查包装材料、贮藏环境、贮藏时间中药提取物质量控制中药提取物性状鉴别有效成份检查中药提取物质量标准建立水分、灰分、浸出物、杂质、重金属、农残、有毒有害物质标准建立外观、性味标准建立TLC、HPLC鉴别标准建立指纹图谱、含量测定检测标准生物活性质量评价功能指纹图谱外观、性味水分、灰分、杂质浸出物、重金属、农残、有毒有害物质检查TLC/HPLC建立卫生学检查标准卫生学包装、储藏建立包装材料、贮藏方式标准细菌、霉菌、大肠杆菌等包装材料、贮藏环境、贮藏时间中成药质量控制中成药性状鉴别有效成份检查中成药质量标准建立水分、灰分、浸出物、杂质、重金属、农残、有毒有害物质标准建立外观、性味标准建立TLC、HPLC鉴别标准建立指纹图谱、含量测定检测标准生物活性质量评价指纹图谱外观、性味水分、灰分、杂质浸出物、重金属、农残、有毒有害物质检查TLC/HPLC建立卫生学检查标准卫生学检查细菌、霉菌、大肠杆菌等包装、贮藏建立包装、贮藏标准包装材料、贮藏环境、贮藏时间2.国内学者的研究工作●基于生物测定和药效支撑的中药质量控制方法解放军302医院，全军中药研究所—肖小河研究思路和方法●借鉴生物制剂质量控制管理模式●建立基于道地药材（对照药材）和生物测定的中药质量评价模式和方法●从常规、化学和生物多重角度，共同把关中药质量补充和完善现行的中药质量控制和评价方法体系中药生物测定：两大关键问题中药生物效价检测方法的选择和标化？中药生物效价检测参照物的选择与标化？中药生物测定方法的选择与验证生物测定=定量药理学∪药物分析可供参考的检测方法客观可定量的常规药理学方法生物制剂活性/效价检测方法抗生素生物效价检测方法生物热动力学方法●DNA分子标记鉴别DNA分子标记鉴别是指通过比较药材间DNA分子遗传多样性差异来鉴别药材基源、确定学名的方法。适用于应用性状、显微以及理化鉴别等方法难以鉴定的样品的鉴别，如同属多基源物种、动物药等的鉴别。●多指标评价—色谱指纹图谱技术大黄质量控制方法—北京大学中药材系统化学成分研究阐明其化学成分文献调研或生物活性筛选确定有效成分或指标性成分化学对照品的快速制备工艺和质量标准研究制备有效成分或指标性成分的化学对照品TLC鉴别方法研究多成分含量测定研究HPLC指纹图谱检测方法研究建立专属性TLC鉴别建立多成分含量测定建立指纹图谱检测标准水分、灰分、酸不溶性灰分、炽灼残渣、重金属、农残分析建立水分、杂质和有害物质的检查构建中药材质量标准体系性状组织、粉末鉴别建立性状、组织、粉末鉴别制备柱色谱HSCCC整体化学成分控制唐古特大黄的化学成分研究化学成分研究大黄中14个成分的含量测定游离蒽醌类：大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚番泻苷类：番泻苷A、番泻苷B苯丁酮类：异莲花掌苷、4-4’-羟基苯基-2-丁酮、莲花掌苷、4’-羟基苯基-2-丁酮-4’-O-β-D-(2´´-O-桂皮酰基-6´´-O-没食子酰基)-葡萄糖苷鞣质类：没食子酸、儿茶素、(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯色谱条件色谱柱为AgilentZorbaxSB-C18(150×4.6mmI.D.,5µm)，预柱为AgilentZorbaxExtendC18(10×4.6mmI.D.,5µm)。进样量10µl，检测波长268nm.流速1.0ml/min，柱温40◦C，流动相由00.5%的磷酸水(A)和乙腈(B)组成，梯度程序如下：0–5min，2–10%(B)in；5–13min，10–15%(B)；13–26min，15–17%(B)；26–38min，17–22%(B)；38–54min，22–36%(B；54–60min，36–60%(B)；60–80min，60%(B)。混合对照品样品大黄药材14个成分同时含量测定的HPLC色谱图采用一标多测(OneforM)方法建立大黄中7个主要有效成分的含量化学对照品的缺乏方法学研究计算测定化合物与对照品之间的校正因子f优势：解决对照品缺乏问题；节省对照品；节省测定时间问题：色谱峰的确认；不同吸收波长的测定误差OOOHOHR1R2NoCompoundsR1R21EmodinCH3OH2RheinCOOHH3ChrysophanolCH3H4PhyscionCH3OCH35Aloe-emodinCH2OHHOOHO-glcCOOHCOOHOOHO-glcR2R1glc=β-D-glucose6R1=R2=HSennosideA7R2=HR2=HSennosideBH混合对照品溶剂样品色谱图大黄药材HPLC指纹图谱分析三种大黄指纹图谱的比较掌叶大黄唐古特大黄药用大黄JournalofchromatographyA,2006(1132):320-32436批掌叶大黄的指纹图谱比较分析42批唐古特大黄指纹图谱比较分析大黄药材液质(HPLC/MS/MS)指纹图谱分析标准品的LC/MS/MS分析对20个标准品逐一进行LC/MS/MS分析。其中蒽醌衍生物类9个、苯丁酮苷类4个、二苯乙烯类4个、单宁类2个、萘类1个。根据各类化合物的质谱碎片特征，归纳总结它们的质谱裂解途径。掌叶大黄HPLC/MS/MS指纹图谱药用大黄HPLC/MS/MS指纹图谱●中药的质量控制要逐步由单一指标成分定性定量测定，向多指标活性有效成分及生物测定的综合检测过渡。3.安全性评价（1）.含朱砂、雄黄中药的质量控制朱砂、雄黄在人体内的毒性程度可能与以下因素相关：●在体内产生的可溶性砷、汞量●可溶性的砷、汞在体内的存在价态●朱砂、雄黄通过体内后排出的砷、汞的量朱砂、雄黄及其制剂的研究思路总砷、汞的含量测定模拟人体胃肠道环境的可溶性砷、汞的检测可溶性成分中不同价态砷、汞的分析朱砂雄黄的体内代谢研究拟订安全限量，指导用药安全1.总As、总Hg的研究结果：方法：王水微波消解，ICP-MS检测结果：朱