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ByLaura检测系统的方法学性能验证1教学目的与要求教学要求：•掌握：定性试验和定量试验方法学评价的主要指标，定量试验的性能验证方法。•熟悉：定性试验评价的内容和方法•了解：检测系统评价的基本步骤21.测量误差：测量结果减去被测量的真值的差，简称误差。2.随机误差：测量结果与在重复条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。3.系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差称为系统误差。亦称为正确度．复习基础知识34、正确度：检测结果离真值的偏移程度5、精密度：表示测量结果中随机误差大小的程度。6、准确度：准确度是测量结果中系统误差（正确度）与随机误差（精密度）的综合。4定量试验方法的验证和确认试验二.更改检测系统的确认试验准确度（EP9）精密度（EP5）可报告范围（EP6-P2）参考区间（C28-A2）分析灵敏度（EP17-A）线性范围（EP6-A）分析特异性(包括干扰物质）（EP7-P）5一.未更改检测系统的验证1、精密度（批内、批间）2、准确度（标准物质、标准方法、方法学比对）3、可报告范围（验证最大稀释倍数）4、参考区间（检测20个正常样本验证）定量试验方法的验证和确认试验6精密度评价一二三第一节定量检测系统的性能评价正确度评价线性范围和可报告范围的评价7第8页测定系统方法学操作程序校准品仪器试剂配方和来源一、测定系统的关键要素8二、评价的基本步骤1.确定方法的质量目标，总允许误差2.选定评价指标有量值溯源的配套检测系统，正确度、精密度、可报告范围、参考区间验证。不配套的检测系统：线性范围、回收和干扰试验3.收集评价的实验数据4.判断方法的临床可接收性熟悉9三、评价文件（1）EP5-A：临床化学设备操作精密度评价核准指南EP6-A：定量分析方法的线性评价：EP7-P：临床化学实验干扰，用于干扰物对检测结果影响的定性。EP9-A：用病人标本进行方法学比较和偏倚评估，主要用于检测两种临床方法或设备间的偏倚。10评价文件（2）EP10-A：定量实验室方法的初步评价EP14-A：基质效应的评价EP15-A：精密度和准确度性能的应用EP21-P（NEW）：临床实验方法总分析误差的评估111.批内方案2.批间方案3.EP方案（EP5-Ａ，EP15－A）四、评价方法（一）精密度评价试验12ＥＰ5－Ａ方案1.试验样品一般选择2个，一个在参考区间附近，另一个为异常值2.批内精密度评价：即一个样品重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数。3.总精密度评价：用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h，每批平行测定2份，至少共测定20天，80个数据。每对结果间的差（共40个）代表批内差；2批均值之间的差（共20个）代表批间差；每天4个结果的均值（共20个）代表日间差。每批测定至少做一个质控。131.用有量值溯源的参考物质进行测定2.使用决定性方法或参考方法3.与具有量值溯源检测系统进行比对（1）EP方案（EP9-Ａ，EP15－A）（2）简易比对方案（二）正确度评价试验14(1)EP15－A方案应来源于健康人或患者，无明显干扰因素。全部标本在整个线性范围内均匀分布，标本至少20例。标本要求15测定方法注意：1，可一天，但不超过4小时内。2.可3-4天（但尽可能短）。3.每个标本只需测定1。4.二种方法都有室内质控16计算偏移1.偏移2.相对偏移3.平均偏移4.相对平均偏移5.与质量要求比较171.选择高、中、低浓度五份样本同时用各台仪器按常规样本测定的方法，测定其各项参数，每份样本测定2次，求其均值。(2)简易比对方法18•3.计算与核对标准•[1]计算：按PT计算方法计算偏倚。•PT计算公式：（确定仪器测定值-比对仪器测定值）/确定仪器测定值×100•[2]标准：•偏移偏倚保持所有标本结果差异在CLIA88允许误差的1/4内19检验科比对记录201.确定测量的线性范围和临床上可能出现的范围。2.取线性范围内的高值标本，用稀释液稀释，最低预期值在线性低限。3.计算回收率：在可接受范。（三）临床可报告范围21最大稀释倍数测定稀释倍数预期值实测值回收率％1：51：101：201：40224.可报告范围计算：（1）上限为线性范围上线×稀释倍数（2）下限为线性范围低限23第二节定性检测系统的性能验证一、验证的内容（掌握）:（1）敏感性（2）特异性（3）正确度（4）符合性（5）精密度(Precision)（6）CUTOFF值验证24二、定性临床应用与分类1、定性测定的临床应用免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志物核酸和基因检测微生物检验细胞学检验寄生虫检验验252、定性实验的临床分类筛查实验：如便潜血、TP诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定确认实验：对以上已做出的检验结果进行验证和确认26三、验证目的和时机（熟悉）:1.目的：（1）评价各定性检测参数是否满足临床检测和认可组织的要求.（2）验证厂家提供的试剂参数能在本实验室得到重现.27几个重要概念及计算公式的回顾:1.敏感性:将实际患病者正确诊断为阳性的百分率。计算公式为：真阳性/（真阳性+假阴性）X100%.2.特异性:指将实际无病者检测为阴性的百分率。计算公式为：真阴性/(真阴性+假阳性）X100%.28阳性结果的可靠性（预示值）：即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。=[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%阴性结果的可靠性（预示值）：则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。=[真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%29（一）准确度验证:1.样本的临床诊断已知（敏感性、特异性）室间质评材料(卫生部)厂商提供的已赋值的参考材料用参考方法或决定方法定值的材料（或金标准诊断的标本）。30选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半↓随机盲法重新分号↓检测样本↓将所有检测结果汇总填表↓计算评价性能指标31临床诊断总计阳性阴性验证方法阳性ABA+B阴性CDC+D总计A+CB+DN32敏感度=100%×[A/（A+C）]特异性=100%×[D/（B+D）]相关样本的患病率=100%×[（A+C）/N]阳性结果预测值（PVP）=100%×[A/（A+B）]阴性结果预测值（PVN）=100%×[D/（C+D）]方法效率（正确率）=100%×[（A+D）/N]332.样本的临床诊断未知（符合性）同一项目不同检测方法或仪器的比对适用范围:一个项目有两种以上的方法或者两台以上的仪器(包括同一型号的仪器)同时检测,需要进行一致性比对.34选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半↓随机每8（4）份分成一组↓两种方法(或两台仪器)每天平行检测一组样本↓将所有检测结果汇总↓评价符合率35对比方法总计阳性阴性实验方法阳性aba+b阴性cdc+d总计a+cb+dn36阳性符合率=100%×[a/(a+c)]阴性符合率=100%×[d/(b+d)]总符合率=100%×[(a+d)/n]37更换批号的简易比对：新鲜患者血清阴性2例，阳性3例，阳性包含有S/CO高、中、低值，用新旧批号试剂检测。低值避开“灰区”夹心法：S/CO低值1.2－3竞争法：S/CO低值0.4－0.6判断标准：符合率为100%为可接受。38二.精密度验证:1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检测20次.然后计算均值,SD和CV.2.批间精密度:同一份样本连续检测20天,每天平行检测双孔.然后计算均值,SD和CV.注意:1.用S/CO比值进行统计计算.2.最好选择临界值,或弱阳性样本.判断标准:ELISA批内CV＜10%，批间＜20%39补充：自动加样针的携带污染率的验证1、取强阳性样品和一阴性样品，按l（阳）、2（阳）、3（阴）、4（阴）、5（阴）的顺序测定。2、计算携带污染程度：携带污染率=[3（阴）一5（阴）]/[2（阳）一5（阴）]×100％（用检测的OD值计算）。3、符合厂商标准40小结本章节主要分别介绍定量试验和定性实验方法学评价的主要指标，评价的内容和步骤。41思考题1、何谓定量试验，何谓定性试验。2、定量和定性试验方法评价指标有哪些？各解决哪些误差类型？4、定量试验和定性试验评价精密度和正确度实验的方法包括哪些？5、系统误差、随机误差、检测系统的概念。4243