化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范

化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范为加强对化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究工作的技术指导，规范化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和验证工作，明确检测方法验证内容和评价标准，有效保证研究制定的检测方法具备先进性和可行性，特制定本规范。1适用范围本规范规定了化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和建立过程中检测方法验证内容、技术要求和评价指标。本规范适用于化妆品中禁用物质和限用物质检测方法的验证与评价。2依据《化妆品卫生规范》3释义3.1本规范中所指化妆品中禁用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品禁用组分。3.2本规范中所指化妆品中限用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品组分中限用物质、限用防晒剂、限用防腐剂、限用着色剂、暂时允许使用的染发剂等。4定义与术语4.1被测物质是指本规范第3项规定的禁用物质和限用物质。4.2特异性在确定的分析条件下，检测方法所具备的检测和区分共存组分中被测物能力的特性。4.3线性及线性范围4.3.1线性是指在设计范围内检测响应值与样品中被测物质浓度或量成比例关系的程度。4.3.2线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的检测结果，而且呈线性的被测物质浓度或量的变化范围。4.4检出限和定量下限4.4.1检出限：被测物质能被检测出的最低量。4.4.2定量下限：能够对被测物质准确定量的最低浓度或质量。4.5检出浓度和最低定量浓度4.5.1检出浓度：按照检测方法操作，方法检出限对应的被测物质浓度。4.5.2最低定量浓度：按照检测方法操作，定量下限对应的被测物质浓度。4.6精密度在确定的分析条件下，相同浓度被测物质的一系列独立测量结果的一致程度，包括日内精密度和日间精密度。日内精密度：同一天测定的精密度。日间精密度：不同天测定的精密度。4.7回收率提取回收率：是指在确定的分析条件下，回收到物质的实际浓度的百分比，以样品提取和处理过程前后被测物质含量百分比表示。方法回收率：是指在确定的分析条件下，被测物质测得值与真实值的接近程度，以百分比表示。4.8实验样品为建立和验证检测方法而使用的化妆品。4.9空白样品能够以可重复方式获得或制备的，不含被测物质的化妆品。4.10稳定性在确定的分析条件下，一定时间内被测物质在一定溶剂或空白样品中的化学稳定性，包括日内稳定性和日间稳定性。日内稳定性：在一定溶剂或空白样品中的被测物质在正常实验条件或适宜样品保存的条件下放置一天的稳定性。日间稳定性：在一定溶剂或空白样品中的被测物质在正常实验条件或适宜样品保存的条件下放置多天的稳定性。5检测方法验证的内容方法验证包括实验室内验证和实验室间验证。实验室内验证的内容一般包括：方法特异性、线性及线性范围、检出限和定量下限、检出浓度和最低定量浓度、精密度、准确度、回收率和实验样品检测。实验室间验证的内容一般包括：方法特异性、线性及线性范围、检出限、最低定量浓度、日内精密度、回收率和实验样品检测。6检测方法验证的技术要求6.1实验室内方法验证6.1.1特异性所采用的检测方法需要克服任何可预见的干扰，特别是来自实验样品中除被测物质以外的其他组分的干扰，一般对具有代表性的空白样品和空白样品加被测物质的样品，按照确定的样品前处理方法处理后，进样检测分析，考察实验样品中除被测物质以外的其他组分对被测物质的测定有无干扰。6.1.2线性及线性范围线性考察：制备至少5个系列浓度（不包括零点）的被测物质标准品溶液，进行检测分析，记录相应的信号响应值，以被测物质标准品溶液的浓度为横坐标（x）、信号响应值为纵坐标（y）建立标准曲线，进行相关性分析，并回归得到线性方程和相关系数（r）。呈线性的被测物质的浓度或量的变化范围确定为线性范围。方法线性考察：在空白样品中加入被测物质标准品，制备成至少5个系列浓度（不包括零点）的样品溶液，进行检测分析，记录相应的信号响应值，以被测物质的浓度为横坐标（x）、信号响应值为纵坐标（y）建立方法标准曲线，进行相关性分析，并回归得到线性方程和相关系数（r）。呈线性的被测物质浓度的变化范围确定为线性范围。必要时，信号响应值可进行数学转换，再进行回归计算。6.1.3检出限和定量下限检出限和定量下限考察见《化妆品卫生规范》。6.1.4检出浓度和最低定量浓度按照检测方法操作，能够从实验样品背景中区分出被测物质响应信号的最低浓度为检出浓度，能够对实验样品背景中被测物质进行准确定量的最低浓度或质量为最低定量浓度。6.1.5精密度6.1.5.1日内精密度通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，其中：高浓度的标准溶液应接近标准曲线或方法标准曲线的最高点（下同）；低浓度的标准溶液应接近最低定量浓度（下同），于同一日内测定至少6次，记录被测物质的信号响应值，考察该组测量值的彼此符合程度，以相对标准偏差（RSD）表示。6.1.5.2日间精密度通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，于不同日测定，记录被测物质的信号响应值，考察该组测量值的彼此符合程度，以相对标准偏差（RSD）表示。6.1.5.3相对标准偏差（RSD）的计算，其中：6.1.6回收率6.1.6.1提取回收率采用在空白样品或实验样品中添加高低两种浓度被测物质标准品的方法测定，记录被测物质的信号响应值，代入标准曲线计算被测物质的浓度，计算提取回收率。6.1.6.2方法回收率采用在空白样品或实验样品中添加高低两种浓度被测物质标准品的方法测定，记录被测物质的信号响应值，代入方法标准曲线计算被测物质的浓度，计算方法回收率。6.1.6.3回收率的计算公式回收率=（样品中被测物质的测定量－样品中被测物质的原有量）/实际添加量×100%6.1.7稳定性6.1.7.1日内稳定性通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，在正常实验条件或适宜样品保存的条件下，在不同时间点分别测定，代入标准曲线或方法标准曲线计算被测物质的浓度，并计算其准确度和RSD值，考察被测物质在溶液或空白样品中放置一天内的稳定性。6.1.7.2日间稳定性通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，在正常实验条件或适宜样品保存的条件下，连续多天测定，代入标准曲线或方法标准曲线计算被测物质的浓度，并计算其准确度和RSD值，考察被测物质在溶液或空白样品中放置多天的稳定性。6.1.8实验样品检测分析选择具有代表性的实验样品，按照《化妆品卫生规范》规定取样，严格按照检测方法进行检测分析。6.1.9禁用物质阳性结果判定依据考察化妆品中禁用物质阳性结果必须采用适宜的、可靠的方法进行确证。采用色谱-质谱技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，按照确定的分析条件，考察实验样品与加入被测禁用物质的空白样品的质量色谱峰保留时间以及浓度相当时的定性离子的相对丰度比的一致性。采用其他技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，应建立能够保证确证结果正确性的依据和评价指标。6.2实验室间方法验证6.2.1参加检测方法验证的机构或实验室参加检测方法验证的机构或实验室必须是按照国家有关认证认可的规定，取得资质认定，其检测人员、环境条件、设施设备等应满足检测方法验证的要求。每种检测方法参加方法验证的检测机构或实验室应不少于3家。6.2.2方法验证样品的提供方法建立机构或实验室应向参与方法验证的机构或实验室提供一致的实验样品、空白样品和标准品，并应注意样品的被测物质的本底情况。6.2.3方法验证技术要求实验室间的具体验证技术要求同6.1实验室内方法验证。6.3方法验证内容的评价指标6.3.1特异性实验样品中共存物质应对被测物质的测定结果无干扰。6.3.2线性及线性范围线性范围适宜，能够满足化妆品中被测物质测定要求，且线性良好，线性相关系数≥0.99。6.3.3检出限和定量下限具有足够低的检出限和定量下限，能够满足化妆品中被测物质测定要求。6.3.4检出浓度和最低定量浓度具有足够低的检出浓度和最低定量浓度，能够满足化妆品中被测物质测定要求。通常要求方法最低定量浓度的精密度的相对标准偏差（RSD）应不超过20%，方法回收率要求在80%-120%之间。6.3.5精密度根据化妆品中被测物质的含量及确定的分析方法，精密度应能够满足化妆品中被测物质的测定要求，通常日内和日间精密度的相对标准偏差（RSD）应不超过表1所列水平。特殊情况应予以说明。表1：精密度的接受范围被测物精密度RSD含量≤10µg/kg20%10µg/kg＜含量≤100µg/kg15%100µg/kg＜含量≤1000µg/kg10%含量＞1000µg/kg5%6.3.6回收率根据化妆品中被测物质的含量及确定的分析方法，回收率应能够满足化妆品中被测物质的测定要求。通常提取回收率要求在85%-115%之间，如果提取回收率超出85%-115%的范围，则要求方法回收率在85%-115%之间。特殊情况应予以说明。6.3.7稳定性要求被测物质的标准溶液或前处理后的样品在稳定时间内使用和测定。6.3.8实验样品分析结果在重复条件下两次独立测定结果的标准偏差在已确定分析方法的精密度接受范围内。6.3.9禁用物质阳性结果判定依据采用色谱-质谱技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，实验样品与加入被测禁用物质的空白样品的质量色谱峰保留时间要求一致，至少两组浓度相当时的定性离子的相对丰度比一致，定性离子的相对丰度比的最大偏差应不超过表2的规定。采用其他技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，要求满足阳性结果确证依据和评价指标。表2：禁用物质阳性结果判定时相对离子丰度比的最大允许偏差相对离子丰度比（k）k≥50%50%k≥20%20%k≥10%k≤10%最大允许偏差±20%±25%±30%±50%6.3.10实验室间验证结果的评价实验室间验证结果应相符。