药品微生物限度与无菌检查

LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl药品微生物限度与无菌检查风险管理风险调查/评估微生物实验室技术能力药品微生物控制风险管理、风险调查/评估LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl药品微生物检验的过程控制环境保证培养基保证无菌性检查灵敏度检查有效的方法方法验证SOP操作有效的结果可靠的结论结果判断过程控制LuzhouInstitutesforFoodandDrugControlLuzhouInstitutesforFoodandDrugControlUSP35部分章节《中国药典》2015年版51AntimicrobialEffectivenessTesting抑菌效力检查法55BiologicalIndicators-ResistancePerformanceTests生物指示剂抗性检查法61MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:MicrobialEnumerationTests非无菌产品微生物检查：微生物计数法62MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:TestsforSpecifiedMicroorganisms非无菌产品微生物检查：控制菌检查法1111MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct非无菌药品微生物限度标准63MycoplasmaTests支原体检查法71SterilityTests无菌检查法1035BiologicalIndicatorsforSterilization灭菌用生物指示剂指导原则1112AplicationofWaterActivityDeterminationtoNonsterilePharmaceuticalProducts水活度检查法用于非无菌药品微生物评价1113MicrobialCharacterization,Identification,andStrainTyping微生物鉴定指导原则1116MicrobiologicalEvalutionofCleanRoomsandOtherControlledEnvironments药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则1117MicrobiologicalBestLaboratoryPractices药品微生物实验室质量管理指导原则1208SterilityTesting-ValidationofIsolatorSystems无菌检查用隔离器系统验证指导原则1211SterilizationandSterilityAssuranceofCompendialArticles灭菌法1223ValidationofAlternativeMicrobiologicalMethods药品微生物检验替代方法验证指导原则/非无菌药品微生物限度检测指导原则/（日本药典收载）中药饮片微生物限度检查法？药品微生物检验的过程控制环境保证培养基保证无菌性检查灵敏度检查有效的方法方法验证SOP操作有效的结果可靠的结论结果判断无菌检查用隔离系统验证指导原则药品微生物实验室质量管理指导原则药品洁净实验室微生物检测和控制指导原则微生物鉴定指导原则药品微生物检验替代方法验证指导原则对照培养基alInstitutesforFoodandDrugControl案例阳性结果与玻璃安瓿表面采样菌高度相似NationLuzhouInstitutesforFoodandDr无菌检查过程微生物控制空气微生物浮游菌沉降菌表面微生物样品包装表面操作人员手部④易折方式影响折断力色环：通过在瓶颈喷涂与玻璃膨胀系数不同的色釉产生应力，从而使断面平整⑤灌装工艺落后造成折断力差为防止灌装中安瓿断头安瓿折断后，断面应平整。LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl国家药用包装容器（材料）标准YBB00332002点刻痕易折玻璃安瓿点刻痕易折安瓿的色点应标记在刻痕的上方中心与中心线的偏差不得过±1.0mm①刻痕工艺控制不好深浅、长短、高低位置不一色点和刻痕位置偏离②规格尺寸不规范瓶身外径精度不够刻痕不易控制瓶颈壁厚不均匀折断后断面不平整③玻璃材质不佳低硼硅玻璃：48.6%中性硼硅玻璃：7.7%我国90%以上低硼硅玻璃玻璃安瓿表面消毒方案比较LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl•杀孢子剂（过氧乙酸）喷洒后立即（3min、5min、10min）用75%乙醇钝化，再用湿棉签擦拭取样•酒精灯过火1秒钟（3秒钟、5秒钟、10秒钟）后直接用湿棉签擦拭取样表面消毒方案作用时间残留菌落数菌属类型杀孢子剂立即2cfuBacillus3min0cfu/5min0cfu/10min0cfu/棉签擦拭&过火1秒钟4cfuBacillus、Brevibacillus3秒钟10cfuBacillus、Paenibacillus、Brevibacillus5秒钟0cfu/10秒钟0cfu/微生物检验的过程控制环境保证培养基保证无菌性检查灵敏度检查有效的方法方法验证SOP操作有效的结果可靠的结论结果判断过程控制LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl微生物实验室工作流程LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl环境保障WHOGPML各区域等级LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl微生物限度&无菌检查环境要求无菌检查：环境洁净度B级背景下的局部A级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中B+Aor隔离系统《中国药典2010版》万级下的百级《中国药典2015版》药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则无菌检查用隔离系统验证指导原则LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl92059206微生物限度检查：受控洁净环境下的局部洁净度不低于B级的单向流空气区域内D+BSCⅡ生物安全柜洁净室/台工作原理层流Laminarflow混流Conventional(mixedflow)cleanroomLuzhouInstitutesforFoodandDrugControlLuzhouInstitutesforFoodandDrugControl相关洁净标准比较ISO14644讨论了洁净室和受控环境的设计与建设按ISO14644的分类是建立在环境中每单位体积的总体粒子数的基础上分类不区分非生物粒子或生物粒子相关洁净标准比较2010版GMP洁净度级别标准“静态”百级，“动态”万级LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl相关洁净标准比较2015版建议的洁净实验室环境监测频次及项目按ISO14644的定级是建立在环境中每单位体积的总体粒子数的基础上LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl定级不区分非生物粒子或生物粒子受控区域洁净级别采样频次检测项目粒子相邻外部每半年粒子、浮游菌、沉降菌、表面菌粒子B级每周粒子、浮游菌、沉降菌、表面菌粒子D级每半年粒子、浮游菌、沉降菌、表面菌LuzhouInstitutesforFoodandDrugC“B级”与“C级”的异同ontrol悬浮粒子与环境微生物LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl非生物粒子数量和活的微生物浓度之间的关系在科学上未达成绝对的一致当操作人员是粒子的来源时，以下的结论是成立的，即洁净室中的粒子越少，空气中微生物存在的可能性就越小。实验设备运行时大量产生的粒子污染和人员产生的粒子污染之间是无法明确区分的大量的药物除了微生物以外还有粒子限度的要求几乎肯定的是，部分悬浮粒子与微生物有关因此，洁净室监测应包括微生物与粒子数两方面洁净室使用次数与浮游菌数关系416#浮游菌数201月2月3月4月5月6月7月8月9月10月11月12月681016141213#使用次数13#浮游菌数16#使用次数LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl近8年无菌室C级浮游菌高限图9080706050403020100200720082009201020112012201320147月8月9月硬件差异软件差异LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl洁净区微生物监测水平USP35＜15cfu信息性，非标准性LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl监控基于风险评估120100806040200法规标准OOT行动限OOE警戒限常规波动WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratoriesAppendix4ExamplesofequipmentqualificationandmonitoringLuzhouInstitutesforFoodandDrugControl环境微生物归属LuzhouInstitutesforFoodandDrugControlLuzhouInstitutesforFoodandDrugControl欣弗事件欣弗培养物洁净环境常见菌：头状葡萄球菌（Staphylococcuscapitis）溶血葡萄球菌（Staphylococcushaemolyticus）缓症链球菌（Streptococcusmitis）科氏葡萄球菌（Staphylococcuscohnii）藤黄微球菌（Micrococcusluteus）山羊葡萄球菌（Staphylococcuscaprae）肺炎克雷伯巨大芽孢杆菌粘质沙雷菌×夺命的欣弗编号鉴定结果0206L1、肺炎克雷伯（K.pneumoniae）；2、粘质沙雷菌（S.marcescens）0206G1、肺炎克雷伯（K.pneumoniae）；2、粘质沙雷菌（S.marcescens）298L；298G1、肺炎克雷伯（K.pneumoniae）；2、粘质沙雷菌（S.marcescens）303L；303G1、肺炎克雷伯（K.pneumoniae）；2、阴沟肠杆菌（Enter.cloacae）305L；305G1、肺炎克雷伯（K.pneumoniae）；2、粘质沙雷菌（S.marcescens）306L/6G肺炎克雷伯（K.pneumoniae）307G肺炎克雷伯（K.pneumoniae）308L粪产碱杆菌（Al.faecalis）309L粪产碱杆菌（Al.faecalis）304G嗜麦芽寡养单胞菌（S.maltophilia）不同生物安全水平对设施的要求LuzhouInstitutesforFoodandDrugControl不同保护类型及生物安全柜的选择LuzhouInstitutesforFoodandDrugControlI级安全柜适用于一级，二级和三级安全实验室，II级和III级安全柜则适用于所有级别安全实验室。保护类型生物安全柜的选择个体防护，针对生物危险等级1～3级微生物Ⅰ级、Ⅱ级生物安全柜个体防护，针对生物危险等级4级微生物，手套箱型实验室Ⅲ级生物安全柜个体防护，针对生物危险等级4级微生物，防护服型实验室Ⅰ级、Ⅱ级生物安全柜实验对象保护Ⅱ级生物安全柜，柜内气流是层流的Ⅲ级生物安全柜少量挥发性放射性核素∕化学品的防护Ⅱ级B1型生物安全柜，外排风式Ⅱ级A2型生物安全柜挥发性放射性核素∕化学品的防护Ⅰ级、Ⅱ级B2型、Ⅲ级生物安全柜LuzhouInstitutesforFoodandDrugControlClassI生物安全柜适用于样品不需保护的工作1、从前窗口吸入的负压气流，用以保护人员的安全；2、排出的气流经HEPA过滤器过滤，用以保护环境，不受污染；3、对受试样本，不能提供切实