《动物生化实验》实验一、生化实验基本知识

西南大学荣昌校区《动物生物化学实验》动物生物化学实验室2011.9西南大学荣昌校区生物化学实验室简介生物化学是研究生命的化学。是研究组成生物体物质的结构及其功能、代谢及其中的能量代谢、信号物质的信号传导、生命遗传物质的遗传及变异和表达调控、以及疾病发生和治疗相关的生物化学问题等的科学。学科研究领域广泛，研究的最大特点是学科的前沿性及极强的交叉性，并能为相关学科的研究提供必需的生物化学技术，是现代养殖技术不可或缺的支撑学科。生物化学教研室现有教师5名，其中副教授2名，讲师一名，博士二人，硕士一人。承担校区各专业的生物化学教学。同时开展科研工作，以动物生化和生化制药为主要研究方向，旨在为现代养殖教育事业的发展培育新人。实验一、生物化学实验基本操作第一部分生物化学实验基本要求一、实验目的1．培养学生实事求是的科学作风，独立工作能力及思维方法。2．学习基础的生物化学实验方法，为今后的学习与研究准备更好的条件。3．培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。4．培养学生的书面及口头表达能力。二、实验的总要求1．按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。2．进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。为达到此目的，实验者应注意：①一切步骤都按操作进行；②样品与试剂勿过量取用；③宜粗者勿细（例如粗天平移物即足够准确时，不用分析天平，用量筒取液足够准确时，不用吸量管）；④试剂、仪器及实验环境的整洁，防止污染及破损；⑤注意力集中，避免差错。3．实验中观察要仔细，记录要详尽、及时与客观，不得于实验后追记，应直接记在实验报告本中，而且无论实验成功与失败，都应记下。对于失败的实验要分析其原因。4．实验室是集体学习与工作的场所，实验时应保持肃静，不得大声喧哗，以免影响他人的工作与思考。对师长尊敬，对同学要团结友爱。实验后应清洗用过的仪器及清理自己的实验场所，教师准许后才能离开实验室。三、实验报告实验报告的书写是培养学生书面表达能力和科学作风的重要手段之一，实验者应该重视。实验报告的内容包括下列各项：1.实验名称、实验日期、实验目的、实验原理、实验步骤，实验记录、计算（定量测定、解释）、讨论或小结。2.实验记录除应包括“实验总要求”的第3项要求外，还应包括原始记录。原始记录是随做随记的第一手记录，应由指导教师签字认可。3.书写实验报告要字迹工整，语句通顺。书写工整的实验报告，是尊师的重要表现之一。四、组织与分组1．每一实验室推选学生课代表一名，负责下列工作：①实验报告的收集与分发；②安排清扫值日名单；③反映同学学习情况及对教学工作的意见；④其它临时性的工作。2．一般实验都为每个学生单独进行。有的实验要两人一组，由相邻两学生组成固定小组。五、仪器1．每次实验前，实验者应根据黑板上公布本实验使用的仪器种类与数目，检查。分发在实验桌上的各种仪器，如有缺损应于清洗前立即向准备室负责老师补换。实验中如有破损，则必须登记，按学院规定处理。实验后应将完整仪器洗涤清洁，点交管理人员。2．公用仪器（包拈贵重仪器，如光电比色计、电动离心机等）使用时时间不宜过长，以免妨碍他人工作。设有使用登记薄的仪器，使用后必须登记，以示负责。对于不熟悉之仪器，切勿随意乱动应请教师指导之。六、试剂1．每2-3人合用一份试剂，在一般情况下，使用的试剂应该固定。2．取试剂瓶塞与量取用具（如吸管或滴管）不应分开，用后应立即放回原处，量取用具应按规定放置。瓶塞与量具一旦弄错，试剂即受损坏、污染，实验就可能失败。3．标准试剂不应用潮湿之吸管与之直接接触，取出后不得再放入原瓶。七、玻璃仪器的洗涤1.一般玻璃仪器用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满足要求洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾去后，器壁不挂珠，视为合格。2.铬酸洗液仅用于毛刷不能洗净的仪器，切勿滥用普通玻璃仪器之洗涤。使用铬酸洗液时，仪器应干燥；过多的水份将洗液迅速失效。用过之铬酸洗液须加以保存以反复使用，直至变为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃仪器，应先用自来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时清洗的效率也高。八、舍弃物的处理舍弃物必须依照其性质作适当之处理。以免造成实验材料之浪费，损坏水槽及下水管道，或污染实验环境。1．所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、损坏的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。必须放入废物筒或篓中，切勿丢水槽中。2．废硫酸或洗液，应先倾入大量水中，再倒入水槽中，并以大量水冲走。3．实验完成后的沉淀或混合物，若含有可提取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃，应放入教师指定的回收器中。第二部分生物化学实验基本操作和仪器使用一、生物化学实验基本知识与操作1.液体体积的度量仪器及使用方法生化实验中玻璃器皿分为两类，容器和量器。液体体积的度量根据精度和需要有：量筒、容量瓶、吸管、及移液器。其中容量瓶、吸管、及移液器为准确量器。吸量管的使用吸量管种类刻度吸管：管壁有多个刻度，刻度分为从上往下或从下往上，用前分清，尖端残余是否吹出根据实际而定。移液管：管中部有一圆柱状空泡，只有一个刻度准确性比刻度吸管大。尖端残余液体不应吹出。奥氏吸管：管下端有一卵形空泡，上端有一容量刻度，主要用于粘度较大的血液、组织液的吸取，尖端残余液体必须吹出。吸管移液管奥氏吸管洗涤使用前用少量洗液润洗后，依次用自来水洗三次、蒸馏水洗三次洗净的移液管和吸量管整个内壁和下部的外壁不挂水珠。移取溶液前再用少量移取液洗三次。洗移液管时，为避免溶液稀释或沾污，可将溶液转移至小烧杯中吸取。首先吸入少量溶液至移液管中，将移液管慢慢放平，并旋转使移液管内壁全部洗过。然后将管直立，将管中液体沿烧杯内壁放出，然后再将小烧杯的液体沿管的外壁下部倒出（弃去）。这样一次即可将移液管内壁、小烧杯内壁和移液管下端的外壁同时洗一遍。如此操作三次后，将移液管直接插入容量瓶中或将溶液倒入小烧杯中吸取都可以了。吸量管的使用方法吸取溶液：用吸量管移取溶液时，右手拇指和中指拿住管颈标线的上部(右图)，将移液管垂直插入液面以下1～2cm深度，左手拿洗耳球将溶液吸入管内至标线以上，拿去洗耳球，随即右手食指按住管口。将移液管离开液面，靠在器壁上，稍微放松食指，同时轻轻转动移液管，使液面缓慢下降，当液面与标线相切时，立即按紧食指使溶液不再流出。左手右手放出溶液：把吸量管的尖嘴靠在接收容器内壁上，让接收容器倾斜而移液管直立。放开食指使溶液自由流出，如图所示。待溶液不再流出时，等15s后再取出移液管。最后尖嘴内余下的少量溶液，不必用力吹入接收器中，因原来标定移液管体积时，这点体积已不在其内（如移液管上有一个吹字，则一定要将尖嘴内余下的少量溶液吹入接收容器中）。这样从管中流出的溶液正好是管上标明的体积。容量瓶配制准确浓度的溶液时要用容量瓶。它是细颈的平底瓶，配有磨口玻璃塞或塑料塞，容量瓶上标明使用的温度和容积，瓶颈上有刻线。容量瓶使用方法如下：1．检查瓶塞是否严密在容量瓶内加水，塞上瓶塞，右手食指按住瓶盖，其余手指拿瓶颈标线以上部分，左手用指尖托住瓶底边缘，将瓶倒置2min，如不漏水，将瓶直立，瓶盖旋转180°后再次检漏，如不漏水才能使用。为避免塞子打破或遗失，应用橡皮套把塞子系在瓶颈上。2．洗涤容量瓶的洗涤方法与移液管相似。使用前用少量洗液润洗后，依次用自来水洗三次、蒸馏水洗三次。3.配制溶液用容量瓶配制溶液，如是固体物质，先要在烧杯内溶解，再转移到容量瓶中，转移溶液时用搅拌棒引流。用蒸馏水冲洗烧杯几次，洗涤液转入容量瓶中。然后慢慢往容量瓶中加入蒸馏水，当液面接近刻线约1cm时，稍停后待附在瓶颈上的水流下后，用洗瓶或用烧杯溶样时所用的搅拌棒蘸水（尽量不用滴管）滴加水到水的弯月面与标线相切。盖好瓶塞，将容量瓶倒置摇动，重复几次，使溶液混合均匀。转移溶液到容量瓶中容量瓶的翻动如固体是经加热溶解的，溶液冷却后才能转入容量瓶内。如果要把浓溶液稀释，要用移液管吸取一定体积浓溶液放入容量瓶中，然后按上述操作加水稀至刻度线。配好的溶液如需保存，应转移到清洁、干燥的磨口试剂瓶中。容量瓶用毕后应立即用水冲洗干净。如长期不用，磨口处应洗净擦干，并用纸片将磨口隔开。容量瓶不得在烘箱中烘烤，也不能用其它任何方法进行加热。量器的读取方法读取量筒、移液管、滴定管等体积时，要使视线与管内液面保持水平，读取与弯月面相切的刻度，视线偏高和偏低都会造成误差2.溶液配制试剂的分类：根据化学试剂的纯度，可分为四级：一级试剂为优质纯试剂，通常用G·R表示；二级试剂为分析纯试剂，通常用A·R表示；三级试剂为化学纯试剂，通常用C·R表示；四级试剂为实验或工业试剂，通常用L·R表示。溶液浓度表示方法：重量浓度：每升溶液中所含溶质的重量。（g/l、mg/l、ug/l）百分浓度：此表示法需注明w/v、v/v、w/w、摩尔（mol/L）浓度：每升溶液中的摩尔数当量浓度（N）：现在已不再使用。当量浓度和摩尔浓度换算1mol/L=1NX离子价数百分浓度配制：百分浓度的精度是1/10，所以配制百分浓度时，称量溶质只需用台秤，溶剂体积用量筒量取。1.w/v百分浓度：100ml溶液中含有溶质的克数。例：怎样配制10%Nacl溶液2.v/v百分浓度：100ml溶液中含有溶质的毫升数。例：怎样配5%醋酸溶液溶液的稀释：实验室常用高浓度的溶液稀释成低浓度的溶液，或调整溶液的浓度，其计算方法是根据稀释前后溶液的溶质数不发生变化。1.稀释C1XV1=C2XV2例：怎样将6mol/L的H2So4溶液稀释成500ml的3mol/L的H2So4溶液6xV1=3X500V1=250ml2.调整C（V1+V2）=C1XV1+C2XV2例：现有2mol/L的NaoH溶液100ml需加多少毫升4mol/L的NaoH才能调整为3mol/LNaoH溶液。3X（100+V2）=2X100+4XV2V2=100ml酸碱摩尔浓度配制：实验室常用的酸、碱为液体，试剂瓶上标有密度、浓度、分子量，其摩尔数计算mol=浓度xVx密度/分子量例：怎样配制1mol/LHCl溶液1000ml？HCl摩尔数为：1X1=1mol38%X1.19XV/36.46=1V=80.63ml固体其摩尔数计算mol=Wx含量/分子量例：怎样配制1mol/L的NaOH溶液W=1X40=40g二、常用生化仪器使用离心机离心技术（centrifugaltechnique）：根据颗粒作匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的行为而发展起来的一种分离技术。离心技术应用很广，诸如分离出化学反应后的沉淀物，天然的生物大分子、无机物、有机物，在生物化学以及其它的生物学领域常用来收集细胞、细胞器及生物大分子物质。离心机种类按用途：有分析用、制备用及分析-制备分；按结构特点：有管式、吊蓝式、转鼓式和碟式等；按转速：有为常速（低速）、高速和超速三种。实验室用普通低速离心机实验室普通离心机使用方法1.将离心机放在坚实而平整的工作台上；2.在适用的离心管中加入样品，必须对称配重，否则会损坏离心机；3.按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入，放下离心机顶盖；4.检查确认调速钮处于最低速位置；5.打开电源开关，调速到需要的转速；6.选择工作时间，调“选时”钮到需要的位置。7.离心完成，离心机自然停止。722分光光度计分光光度计的组成分光光度计种类很多，一般包括光源、单色器、吸收池、检测器和指示器五大部件组成。1.数字显示器2.吸光度调零旋钮3.选择开关4.吸光度调斜率电位器5.组成量度旋钮6.光源室7.电源开关8.波长手轮9.波长刻度窗10.试样拉手架11.100%T旋钮12.0%T旋钮13.灵敏度调节旋钮14.干燥器1.光源：是一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源光强度应大，有良好的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变化。2.单色器：将来自光源的光按波长的长短顺序分散为单色光并能随意改变波长的一种分光部件，包括入口狭缝、色散元件、出口狭缝和准直镜四部分组成。3.吸收池：又称