专题二动物细胞融合与单克隆抗体

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体20世纪30年代,科学家们相继在肺结核、天花、水痘、麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。20世纪70年代，科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象，但是受当时科技发展水平的限制，人们对这一现象并没有给予足够重视。1962年，日本科学家发现日本血凝性病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞的现象。1965年，英国科学家进一步证实了灭活的病毒在适当条件下也可以诱发动物细胞融合。后来，科学家又成功诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活。如果你观察到这些现象，你能提出问题吗？你能大胆的作出假设吗？实证结论：动物细胞在诱导因子作用下会发生细胞融合？用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核灭活的病毒细胞核你能说一说动物细胞融合的过程吗？能否用文字流程图表示细胞融合的过程吗？？动物细胞A动物细胞B灭活病毒PEG、电激等诱导融合后的细胞进行有丝分裂一、动物细胞融合杂交细胞两个杂交细胞1、动物细胞融合的过程----流程图方法？原理？几种？动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程。一、动物细胞融合融合后形成的单核细胞称为杂交细胞。2、动物融合的概念植物体细胞杂交动物细胞融合列表比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的异同一、动物细胞融合3、细胞融合的意义突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，为制造单克隆抗体开辟了新途径。4、应用：研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段.特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。1、什么是抗体？抗体是如何产生的？2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？3、B淋巴细胞有什么特点？4、单克隆抗体与克隆、抗体什么关系？二、单克隆抗体1、什么是抗体？抗体是如何产生的？二、单克隆抗体抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。浆细胞（免疫的B淋巴细胞、效应B细胞）产生抗体。抗原动物体内刺激效应B抗体抗原不纯抗体不纯缺陷：特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么?分离抗体体内产生的特异性抗体多达百万种每一个效应B淋巴细胞只能产生一种特异性抗体想方设法一:筛选单一效应B细胞二、单克隆抗体1、单克隆抗体的概念：由单个B淋巴细胞经过克隆形成的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。单个B淋巴细胞细胞群有丝分裂克隆抗原动物体内刺激效应B抗体抗原不纯抗体不纯筛选单一效应B细胞分离抗体不能增值产生大量抗体每一个效应B淋巴细胞只能产生一种特异性抗体体内产生的特异性抗体多达百万种设计：设计出“既能大量增殖又能产生足够数量特异性强的抗体的细胞。”已知：(1)一种B淋巴细胞只能产生一种特异性的抗体;(2)肿瘤细胞能够无限增殖设计并交流实验方案：(可用流程图表示)二、单克隆抗体想方设法二:播放科学家的单克隆抗体制备过程注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体注意观察细胞的种类诱导融合选择培养基筛选，继续培养克隆能产生抗体的阳性细胞体外培养否或小鼠腹腔内增殖动物细胞融合动物细胞培养二、单克隆抗体2、单克隆抗体制备过程----流程图给小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴细胞（免疫）骨髓瘤细胞杂交细胞杂交细胞（B-瘤细胞）单克隆抗体杂交瘤细胞瘤-瘤细胞B-瘤细胞B-B细胞2、单克隆抗体制备过程二、单克隆抗体(1）什么是免疫的小鼠?怎样对小鼠进行免疫？(2)图中的B淋巴细胞有何功能？骨髓瘤细胞有何功能？杂交瘤细胞有何特点？(3)怎样才能将B细胞与骨髓瘤细胞融合？(4)融合后可能有几种类型的细胞?(5)两次筛选的目的是什么？(6)培养杂交瘤细胞的方式有哪两种？(7)制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？二、单克隆抗体①作为诊断试剂。准确识别各种抗原物质，并与特异性结合。优点：准确、高效、简易、快速例如“早早孕诊断试剂盒”。②用于治疗疾病和运载药物。（作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤）3、单克隆抗体的应用本节小结两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个优势——灭活病毒——杂交瘤细胞——单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。(2)、该方案能达到预期效果吗？为什么？(4)、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。(1)、该实验方案的目的是__________(3)、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______(5)、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群AC不能因为没有抗原注入小鼠体内,无法获得产生此抗体的效应（免疫的）B细胞.注射到小鼠腹腔自我评价假如你掌握了动物细胞融合技术，你想用它来解决什么问题？本章小结细胞工程植物细胞工程动物细胞工程操作方法和步骤原理应用概念过程概念意义过程概念培养条件应用植物组织培养植物体细胞杂交动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植过程应用存在的问题概念过程意义应用概念制备应用主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理法（离心、振动、电激）化学法（聚乙二醇）使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性用途诱导方法细胞融合的方法细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较动物细胞融合动物细胞融合与植物体细胞杂交..动物细胞融合植物体细胞杂交原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞全能性融合前需先去壁诱导融合多：灭活的病毒意义解决远源杂交不亲和的问题(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图