氯霉素的药物分析

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酰胺醇类抗生素之——氯霉素•一化学结构与性质•二鉴别试验•三检查•四含量测定主要内容一化学结构与性质(一)化学结构氯霉素结构中含有对硝基苯基、丙二醇与二氯二酰胺三个部分,抗菌活性主要与丙二醇有关。本品为D-苏式-(—)-N-[α-(羟基甲基)-β-羟基-对硝基苯乙基]-2,2-二氯乙酰胺。按干燥计算,含C11H12Cl2N2O5应为98.0%̴102.0%。(二)性质1.稳定性性质稳定,能耐热,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、微溶于水等。干燥时稳定,在中性、弱酸性(pH4.5—7.5)溶液中较稳定,煮沸不分解。2.水解性●强碱性(pH9)氯水解●强酸性(Ph2)酰胺水解3.旋光性氯霉素结构中具有两个手性碳,有四个旋光异构体。仅1R,2R(—)或者(—)苏阿糖型(Threo)有抗菌活性,临床使用。此药物在无水乙醇中呈右旋性,在醋酸乙酯中呈左旋性。4.紫外吸收本类抗生素分子内具苯环含有共轭双键系统,在紫外光区有吸收。在277nm波长处有最大吸收。5.氧化性氯霉素含有对硝基苯基,其中硝基具有氧化性,可以将其还原成胺基。二鉴别试验1.色谱法高效液相色谱法ChP采用高效液相色谱法鉴别氯霉素,在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液的主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。2.光谱法紫外吸收光谱利用最大吸收波长鉴定法来鉴别。将供试品配成适当浓度的溶液,直接测定紫外吸收光谱,根据其最大吸收波长或最大吸收波长处的吸光度进行鉴定。3.鉴别反应●氯霉素中的丙二醇能发生醛酮缩合反应,酸水解后产物与过碘酸作用,氧化生成对硝基苯甲醛;与2,4-硝基苯肼缩合,生成苯腙。●本品分子中的硝基经锌粉还原成羟胺衍生物,在乙酸钠存在下与苯甲酰氯进行苯甲酰化,再在弱酸性溶液中与高铁离子生成紫红色的络合物。例:ChP(2010)取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后加1%氯化钙溶液3ml与锌粉50mg置水浴上加热10分钟,倾取上清液,加苯甲酰氯约0.1ml立即强力振摇1分钟,加三氯化铁试液0.5ml与三氯甲烷2ml,振摇,水层显紫红色。●取氯霉素1ml,加氢氧化钠的乙醇溶液2ml,再加硝酸2ml,加硝酸银3滴,生成白色沉淀,沉淀加氨试液溶解,再加硝酸银5滴,沉淀复生(氯离子的鉴别)。三检查•结晶性取本品少许,依法检查(附录IXD),应符合规定。•酸碱度取本品,加水制成每1ml中含25mg的混悬液,依法测定(附录VIH),pH值应为4.5—7.5。•比旋度取本品精密称定,加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含50mg的溶液,依法测定(附录VIE),比旋度为+18.5◦至+21.5◦。•干燥失重在105◦C干燥至恒重,减失重量不得过0.5%(附录VIIL)。•炽灼残渣不得过0.1%(附录VIIIN)。•溶出度取本品,照溶出度测定法(附录ⅩC第一法),以盐酸溶液(9→1000)900ml为溶出介质,转速为每分钟100转,依法操作,30分钟时,取溶液适量,滤过,精密量取续滤液5ml,置50ml量瓶中,用溶出介质稀释至刻度,摇匀,照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA),在278nm的波长处测定吸光度,按C13H12CI2N2O3的吸收系数(E1%1cm)为298,计算每片的溶出量,限度为标示量的70%,应符合规定。•有关物质目前各国药典均采用HPLC法检测精密称取本品适量,加甲醇适量(每10mg氯霉素加甲醇1ml)使溶解后,用流动相定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液,摇匀,作为供试品溶液;另精密称取氯霉素二醇对照品与对硝基苯甲醛对照品适量,加甲醇适量(每10mg氯霉素二醇物加甲醇1ml)使溶解,用流动相定量稀释制成每1ml中含氯霉素二醇物5µg与对硝基苯甲醛3µg的混合溶液,作为杂质对照品溶液。•照含量测定项下的色谱条件,取杂质对照品溶液10µl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使氯霉素二醇物峰的峰高约为满量程的25%;精密量取供试品溶液与杂质对照品溶液各10µl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,含氯霉素二醇物不得过1.0%,含对硝基苯甲醛不得过0.5%。•残留溶剂乙醇与氯苯取本品0.5g,精密称定,置10ml量瓶中,加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品贮备液,精密量取2ml置顶空瓶中,再精密加二甲基亚砜1ml,摇匀,作为供试品溶液;精密称取氯苯约36mg、乙醇约500mg,置100ml量瓶中,加二甲基亚砜稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液;精密量取对照品贮备液1ml置顶空瓶中,再精密加二甲基亚砜2ml,摇匀,密封,作为系统适用性试验溶液;精密量取对照品贮备液1ml置顶空瓶中,精密加供试品贮备液2ml,摇匀,密封,作为对照品溶液,•照残留溶剂测定法(附录ⅧP第二法)测定,以6%清丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定液的毛细管柱为色谱柱,起始温度为40℃,维持10分钟,再以每分钟10℃的速率升至200℃,维持4分钟;进样口温度为250℃;检测器温度为300℃;顶空平衡温度为85℃,平衡时间为45分钟。取系统适用性试验溶液顶空进样,洗脱顺序依次为:乙醇、氯苯,各色谱峰之间的分离度应符合要求,取对照品溶液顶空进样,计算数次连续进样结果,相对标准偏差不得过5.0%。取供试品溶液与对照溶液分别顶空进样,记录色谱图,用标准加入法以峰面积计算,均应符合规定。四含量测定氯霉素的含量测定主要用的是HPLC,除此之外还可以用UV、TLC、LC/MS等方法高效液相色谱•色谱条件填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶流动相:0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液(磷酸二氢钾6.8g0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释,加三乙胺5ml,磷酸调节pH值至2.5)检测波长:277nm对照品:氯霉素•测定法精密称取本品适量,加甲醇适量(每10mg氯霉素加甲醇1ml)使溶解,用流动相定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液,摇匀,精密量取10µl注入液相色谱仪,记录色谱图;另外再精密称取氯霉素对照品适量,同法测定。按外标法以峰面积计算,即得。按下式计算含量(外标法)•含量(CX)=CR·(AX⁄AR)•标示量%=CR·(AX/AR)·D·WW·标示量·100%—式中,CX为对照品溶液浓度(mg/ml);AX和AR分别为供试品溶液和对照品溶液的峰面积;D为稀释体积(ml);W为取样量(g);W为平均重量(g);标示量为取样品规格(mg/支)—THEEND

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