3 微生物的代谢调节和代谢工程(2)

第三章微生物的代谢调节和代谢工程(二)2微生物代谢的代谢类型和自我调节酶活性、酶合成调节分支生物合成途径的调节能荷调节代谢调控次级代谢调节本章内容3第四节分支生物合成途径的调节4在有两种或两种以上的末端产物的分支合成代谢途径中，调节方式较复杂，其共同特点是每个分支途径的末端产物控制分支点后的第一个酶，同时每个末端产物又对整个途径的第一个酶有部分的抑制作用。分支代谢的反馈调节方式有多种。分支代谢途径51、同工酶的反馈抑制isoenzymefeedbackinhibition同功酶是指能催化同一生化反应，但它们的结构稍有不同，可分别被相应的末端产物抑制的一类酶。6其特点是：途径中第一个反应被两个不同的酶所催化，一个酶被H抑制，另一个酶被G抑制。只有当H和G同时过量才能完全阻止A转变为B。72、协同反馈抑制concertedfeedbackinhibition在分支代谢系统中，几种末端产物同时都过量，才对途径中的第一个酶具有抑制作用，如果末端产物单独过量则对途径中的第一个酶无抑制作用。8例如，荚膜红假单胞菌中天门冬氨酸族氨基酸生物合成途径中，天门冬氨酸激酶(AK)是受末端产物赖氨酸和苏氨酸的协同反馈抑制。93、累积反馈抑制cumulativefeedbackinhibition在分支代谢途径中各种末端产物单独过量时，它们各自能对途径中的第一个反应的酶仅产生较小的抑制作用。一种末端产物单独过量并不影响其它末端产物的形成，只有当几种末端产物同时过量时，才对途径中的第一个酶产生较大的抑制。104、增效反馈抑制cooperativefeedbackinhibition增效反馈抑制既不同于协同反馈抑制又不同于累积反馈抑制。在一个分支代谢途径中，几种末端产物单独过量时，仅产生对共同途径的第一个酶部分的抑制。如果每种末端产物都过量时，其抑制作用则超过各种末端产物单独过量时抑制的总和。115、顺序反馈抑制sequentialfeedbackinhibition分支代谢途径中的两个末端产物，不能直接抑制代谢途径中的第一个酶，而是分别抑制分支点后的反应步骤，造成分支点上中间产物的积累，这种高浓度的中间产物再反馈抑制第一个酶的活性。6、联合激活或抑制调节由一种生物合成的中间产物参与两个完全独立的、不交叉的合成途径的控制。这种中间体物质浓度的变化会影响这两个独立代谢途径的代谢速率。肠细菌氨甲酰磷酸合成酶的联合激活和抑制肠细菌中精氨酸和嘧啶核苷酸的合成途径是完全独立的，但它们有一共同的中间体——氨甲酰磷酸。负责合成该中间体的酶——氨甲酰磷酸合成酶可以被嘧啶代谢途径的代谢物UMP反馈抑制，也可被精氨酸合成途径中的中间体鸟氨酸激活。氨甲酰磷酸氨甲酰磷酸14第五节能荷调节151、能荷调节(EnergyChargeRegulation)能荷——指细胞中ATP、ADP、AMP系统中可为代谢反应供能的高能磷酸键的量度。能荷调节——指细胞通过改变ATP、ADP、AMP三者比例来调节其代谢活动，也称腺苷酸调节。%AMPADPATPADPATP10021能荷16糖代谢的调节主要受细胞能荷的控制。体系中ATP含量高时，ATP抑制磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的活性，使酵解减少；当需能时，ATP分解为ADP和AMP。ADP、AMP增加、ATP的抑制作用被解除，同时ADP、AMP激活已糖激酶和磷酸果糖激酶，酵解增加。17能荷不仅调节形成ATP的分解代谢酶类（如磷酸果糖激酶、异柠檬酸脱氢酶、柠檬酸合成酶等）的活性；也调节利用ATP的生物合成酶类（如柠檬酸裂解酶、磷酸核糖焦磷酸合成酶等）的活性。18第六节代谢调控19但是，在工业生产中却往往需要单一地积累某种产品，这些产品的量又经常是大大地超出了细胞正常生长和代谢所需的范围。代谢反应的协调是通过细胞自身的代谢调控系统对细胞机能实行精细控制来达到的。对于生命过程来说，代谢反应的协调是必要的；20因此，要达到过量积累某种产品的目的，提高生产效率，就必须使原有的调节系统失去控制，在保证微生物适当生存的条件下，建立起新的代谢方式，使微生物的代谢产物按照人们的意志积累。21实现代谢控制发酵的方法1、控制发酵条件;2、改变菌种的遗传特性;3、改变细胞透性.221、发酵工艺条件的控制发酵工艺条件------培养基（各种营养物质，不同的氮、碳源等）------pH------温度------溶氧------生物素------诱导物、前体23“添加诱导物或其类似物”在诱导物就是酶的底物的情况下，添加底物类似物来加强诱导作用是最好的。因为底物类似物不易被所形成的酶分解，而在细胞中始终保持较高的浓度，能够持续地诱导酶的合成，获得较高浓度的酶。例如:用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)可诱导-半乳糖苷酶的合成。242、改变细胞透性细胞内合成的发酵产物若要分泌到培养基中，必须经过细胞膜和细胞壁。如果产物不易分泌出细胞，而积累在细胞内，则会引起反馈调节。改变细胞膜和细胞壁的通透性，使其有利于产物的分泌，也是降低末端产物浓度的一种途径。25采用生理学或遗传学的方法，改变细胞膜的透性。1、生理学方法谷氨酸发酵生产生物素的浓度的控制；添加青霉素；表面活性剂2、遗传学方法营养缺陷型菌株。如谷氨酸生产菌的油酸营养缺陷型，控制油酸，细胞膜合成不完整。26273、菌种遗传特性的改变抗反馈突变菌株营养缺陷型菌株双重营养缺陷型菌株281、抗反馈突变菌株在以积累末端产物为目的的发酵生产中，如果代谢途径单一无分枝，往往不能选用营养缺陷型突变株。要提高产量，最好采用抗反馈调节突变株。抗反馈调节突变株是一种解除合成代谢反馈调节机制的突变型菌株。其特点是所需产物不断积累，不会因其浓度超量而终止生产。工业上，生产氨基酸、嘌呤、嘧啶和维生素的菌种大都是抗反馈突变株。292、营养缺陷型菌株3031第七节次级代谢与次级代谢调节32初级代谢微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢生成维持生命活动的物质和能量的过程。初级代谢产物微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。不同种类的微生物细胞中，初级代谢产物的种类基本相同。33次级代谢次级代谢是在一定的生长时期（一般是稳定生长期），微生物以初级代谢产物为前体合成的对微生物本身的生命活动没有明确功能的物质的过程。次级代谢产物微生物通过次谢活动所大量积累的抗生素、生物碱、类萜（ferpenoid）、酚类、色素等。341、次级代谢的调节类型（1）、酶合成的诱导调节（2）、反馈调节35（1）、酶合成的诱导调节把一些对次级代谢产物产生有诱导作用的物质加入发酵培养基中可增加产量。36（2）、反馈调节次级代谢产物的自身反馈抑制和反馈阻遏；分解代谢产物调节；初级代谢产物的调节；磷酸盐调节。37次级代谢产物的自身反馈抑制和反馈阻遏如青霉素、链霉素、卡那霉素等的生物合成途径中都发现末端产物的反馈调节作用。38分解代谢产物调节碳分解代谢阻遏或抑制能迅速被利用的碳源（葡萄糖）或其分解代谢产物，对其他代谢中的酶（包括分解酶和合成酶）的阻遏和抑制。葡萄糖是菌体生长良好的碳源和能源，但对青霉素、头孢菌素、卡那霉素、新霉素、丝裂霉素等都有明显降低产量的作用。39防止碳分解代谢阻遏或抑制的发生◇青霉素发酵中限量流加葡萄糖或糖蜜以减少碳分解阻遏的发生。◇使用寡糖、多糖等缓慢利用的碳源。◇加入影响糖代谢的硫氰酸苄酯可使金霉菌对葡萄糖的利用速度减慢，增加金霉素的产量。40氮分解代谢产物的抑制作用以铵盐作为链霉素产生菌的唯一碳源，可抑制链霉素的合成。避免使用高浓度的铵盐作氮源以防止氮代谢阻遏的发生，是抗生素工业成熟的经验。41初级代谢产物的调节次级代谢产物与初级代谢产物有一条共同的合成途径；初级代谢产物直接参与次级代谢产物的合成。4243磷酸盐调节磷酸盐在微生物的生长和代谢产物合成中起着重要的作用，高浓度的磷酸盐对抗生素等次级代谢产物的合成表现出较强的抑制作用。磷酸盐对次级代谢产物的抑制主要是通过抑制酶或导致细胞能荷变化等。442、常用的提高次级代谢产物产量的方法（1）、补加前体类似物（2）、加入诱导物（3）、防止碳分解代谢阻遏或抑制的发生（4）、防止氮(磷)代谢阻遏的发生（5）、筛选耐前体或前体类似物的突变株（6）、选育抗抗生素突变株45（1）、补加前体或其类似物在合成途径已基本清楚的条件下，向发酵培养基中补加前体是增加次级产物的有效方法。如青霉素G的生产中，苯乙酰-CoA是限速性因子，补加苯乙酸或其衍生物都能增加青霉素G的产量。46（2）、加入诱导物把一些对次级代谢产物产生有诱导作用的物质加入发酵培养基中会增加产量。如加蛋氨酸或硫脲可使顶头孢霉增产头孢霉素C，加入巴比妥可提高利福霉素产量等。但在工业生产中还未普遍应用此技术，而只是在选择培养基组成时给以考虑。47（3）、防止碳分解代谢阻遏或抑制的发生青霉素发酵中限量流加葡萄糖(或糖蜜)以减少碳分解阻遏的发生，是一项很有效的提高产量的方法。使用寡糖、多糖等缓慢利用的碳源能减少碳分解阻遏的发生。加入影响糖代谢的硫氰酸苄酯可使金霉菌对葡萄糖的利用速度减缓，可增加金霉素的产量。48（4）、防止氮(磷)代谢阻遏的发生避免使用高浓度的铵盐做氮源，以防止氮代谢阻遏的发生，是抗生素发酵工业生产中比较成熟的经验。在抗生素产生期如补加氮源则会造成发酵逆转，返回生长期，抗生素的产量会大为减少。49防止氮(磷)代谢阻遏的发生使用亚适量(对菌体生长)的磷酸盐，亦是抗生素发酵工业中遵循的原则之一。为防止氮、磷分解阻遏的发生，应选用黄豆饼粉、蛋白胨类物质为主要原料，而尽量少用易被迅速利用的无机氮源。50（5）、筛选耐前体或前体类似物的突变株加入前体有提高次级产物产量的效果；但过量对菌体又会有毒。筛选对前体有抗性的突变株可以减少或消除前体的反馈阻遏，从而可获得高产。如抗苯乙酸的青霉突变株，其青霉素的产量会增加。51（6）、选育抗抗生素突变株链霉素、氯霉素、金霉素筹多种抗生素都具有抑制产生自身菌体蛋白质的能力。一株高产抗生素产生菌，必然应具备对自身所分泌的抗生素的抗性。筛选抗抗生素产生菌也就成了菌种选育中的常用方法。如：金霉素、链霉素产生菌的抗性菌株，产量有数倍增加。52作业1、分支生物合成途径中有哪些调节方式？2.微生物代谢调控有哪些方式？